截短型单纯疱疹病毒2型糖蛋白G制造技术

本发明专利技术涉及一种包含HSV‑2蛋白的截短形式mg G‑2的蛋白，所述蛋白包含：(i)至少285个氨基酸的mg G‑2的胞外区(EX‑mg G‑2)或其截短形式；所述胞外区或其截短形式与存在于SEQ ID NO：3中的相应长度的肽片段具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性(％SI)；(ii)2至15个氨基酸的mg G‑2的截短型跨膜区(t‑TMR‑mg G‑2)；所述截短型跨膜区与存在于SEQ ID NO：6中的相应长度的肽片段具有至少90％的序列同一性(％SI)；和(iii)至少18个氨基酸的mg G‑2的胞内区(IC‑mg G‑2)或其截短形式；所述胞内区或其截短形式与存在于SEQ ID NO：8中的相应长度的肽片段具有至少90％或95％的序列同一性(％SI)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】截短型单纯疱疹病毒2型糖蛋白G
本专利技术涉及一种包括单纯疱疹病毒2(HSV-2)型成熟糖蛋白G的截短形式的新蛋白、包括所述蛋白的疫苗、及其在治疗中和作为诊断抗原用于检测HSV-2感染的用途。
技术介绍
已知单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染生殖器粘膜并在感觉神经节中建立终生感染。原发感染后，HSV-2可能会频繁重新激活，导致广泛的生殖器损伤，并带来相当大的身体和心理压力。最近对HSV-2感染的一项全球估计结果显示，2012年有4.17亿15-49岁的人受到感染，世界范围内患病率为11.3％。2012年新感染了1920万个体(Looker，K.J.等，2015，PLoSOnevol.10，e114989)。此外，在新生儿和免疫功能低下的患者中，HSV-2感染可诱发严重且经常致命的中枢神经系统感染。由于HSV-2是全球生殖器溃疡最常见的原因，该感染强烈促进了HIV的传播是一个主要的问题。HSV-2感染与男性和女性感染艾滋病毒的风险增加三倍相关，这意味着在HSV-2高流行区，高比例的HIV可归因于HSV-2。这一观察结果可以通过以下事实来解释：局部HSV-2感染增加生殖器粘膜中HIV靶细胞(即宫颈CD4+T细胞)的数量。此外，在双重感染的妇女中，使用阿昔洛韦进行HSV-2抑制治疗使得血浆HIV-1RNA降低了70％。专利技术人得出结论认为控制生殖器HSV-2感染的有效方法具有重要的公共卫生重要性。一种有效的疫苗不仅可以减少HSV-2感染的生殖器病变和其他临床表现，还可以降低获得和传播HIV的风险。已经使用HSV-2糖蛋白B(gB-2)和/或糖蛋白D(gD-2)作为抗原进行了人疫苗试验。根据在于这些蛋白对于HSV-2的复制是必需的并且在小鼠和人中诱导强烈的中和抗体和T细胞应答。尽管有这些具有前景的背景数据，但随机双盲安慰剂对照多中心试验的结果却意外地令人沮丧。在2400名受试者中测试基于gB-2和gD-2的疫苗，仅产生针对感染的短暂保护(Corey等，JAMA，1999，第282卷，第331-40页)。2002年至2010年期间在美国和加拿大进行了一项预防性临床研究，其中包括HSV-1血清阴性的女性(总共8,323名受试者)。然而，该研究的结果显示疫苗未能预防HSV-2感染或疾病(Belshe等，2012，NEnglJMed第366卷，34)。这些结果清楚地表明了过往疫苗策略的失败。HSV-1和HSV-2是紧密相关的病毒，整体蛋白组的氨基酸序列同源性>80％。HSV-1和HSV-2的包膜糖蛋白是人抗体应答的强诱导物。这些病毒之间的高度相似性意味着除了糖蛋白G外，包膜蛋白包含数个相同的免疫原性区域，因此诱发交叉反应性的B细胞和T细胞应答。换言之，HSV-1感染诱发的免疫应答也识别HSV-2相关抗原，反之亦然。然而，似乎清楚的是，HSV-1感染后的交叉反应性免疫应答不足以诱导针对HSV-2感染的保护性免疫。该陈述基于如下观察：在前的HSV-1感染并不赋予针对HSV-2获得性感染的保护。这个观点从进化的角度来看是有道理的，因为HSV-2主要是通过性传播的，并且与HSV-1相比通常感染年龄更大的人。这样，HSV-2已经进化来逃避由大多数HSV-1糖蛋白诱导的交叉反应性B细胞和T细胞应答。因此，缺乏对交叉反应蛋白的免疫应答的保护特性可能解释了使用交叉反应性gB和gD蛋白作为疫苗的失败，以及为什么先前的HSV-1感染针对HSV-2的传播不具有保护性。本专利技术涉及HSV-2糖蛋白G(gG-2)抗原，以及它们在疫苗和治疗中的应用，例如预防HSV-2感染的疫苗和疗法，以及作为抗原在监测抗-HSV-2抗体中的应用。gG-2蛋白是由US4基因编码的蛋白，在HSV-2的333株中该基因包含2097个核苷酸，包括终止密码子。HSV-2333株的US4基因的GenBank登录号为EU018098.1，其编码的氨基酸序列(即HSV-2333株gG-2的氨基酸序列)在本文中记作SEQIDNO：1。完整的HSV-2333株US4基因的核苷酸序列示于SEQIDNO：13。在HSV蛋白中gG-2蛋白的独特之处在于gG-2被切割为一个氨基末端分泌部分(sgG2)，和一个羧基末端中间体，其包括一个跨膜区域。如下文详细描述的，将羧基末端中间体进一步加工以形成成熟的膜结合的gG-2(mgG-2)。SEQIDNO：2显示了333株的mgG-2蛋白的氨基酸序列，其由对应于SEQIDNO：1的345-698氨基酸的354个氨基酸组成。从现有技术(Liljeqvist等，1998，JGenVirol.，第79卷，1215；Marsden等，1998，JMedVirol.，第56卷，79；Grabowska等，1999，JGenVirol.，第80卷，1789；Levi等，1996，ClinandDiagn.LabImmunol.，第3卷，265；P.等，2000，JGenVirol.，第81卷，1033；P.等，2005，JGenVirol.，第86卷，247)已知gG-1(HSV-1糖蛋白G)和mgG-2的免疫显性抗体结合区位于蛋白的同源区而非特有区域，参见图3A-B。尽管这些区域中的一部分在两种蛋白之间具有高度相似性，但是人类抗-gG-1和抗-mgG-2抗体之间没有显示出交叉反应性。美国专利号5,665,537请求保护的gG-2的特有区域具有期望的类型特异的性质，并且结合该区域的抗体可用于HSV血清型分型。该文档指出，抗体结合区也位于gG-1和mgG-2的同源区中，并表明结合这些区域的抗体与两种蛋白交叉反应。在WO98/003543中，请求保护图3D中所示的包含38个氨基酸的人抗mgG-2抗体的抗体结合区，该抗体结合区是类型特异性的，并且该蛋白能够用于与HSV-2感染有关的预防、治疗和诊断用途。但是，该现有技术文献指出，只有mgG-2的抗体结合区是重要的。在WO96/17938中，HSV-2的糖蛋白D和G以及HSV-1的糖蛋白E被用于疫苗目的。该文献公开了产生mgG-2时应该没有跨膜区和胞内区。WO2010/135747涉及用于治疗性和/或预防性HSV-2疫苗的蛋白。该申请侧重于gD-2和ICP-4，并提供与gG-2有关的有限数据。尽管GenBank登录号NP_044534.1涉及整个gG-2(表2，第12页)，但SEQID:38(第82页)中指定的蛋白仅包含sgG-2。关于gG-2被切割成具有不同生物化学性质的两种蛋白，即sgG-2和mgG-2的事实没有提及。该文献与mgG-2完全无关。S.等人在Viruses，2014，第6卷，第4358-4372页中披露(Anti-GlycoproteinGAntibodiesofHerpesSimplexVirus2ContributetoCompleteProtectionafterVaccinationinMiceandInduceAntibody-DependentCellularCytotoxicityandComplement-MediatedCytolysis)，用具有全长mgG-2和佐剂对小鼠接种疫苗后引发的抗-mgG-2抗体，对于用HSV-2进行生殖器攻击后的结果是重要的。Le本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含HSV‑2蛋白的截短形式mgG‑2的蛋白，所述蛋白包括：(i)至少285个氨基酸的mgG‑2的胞外区(EX‑mgG‑2)或其截短形式；所述胞外区或其截短形式与存在于SEQ ID NO：3中的相应长度的肽片段具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性(％SI)；(ii)2至15个氨基酸的mgG‑2的截短型跨膜区(t‑TMR‑mgG‑2)；所述截短型跨膜区与存在于SEQ ID NO：6中的相应长度的肽片段具有至少90％的序列同一性(％SI)；和(iii)至少18个氨基酸的mgG‑2的胞内区(IC‑mgG‑2)或其截短形式；所述胞内区或其截短形式与存在于SEQ ID NO：8中的相应长度的肽片段具有至少90％或至少95％的序列同一性(％SI)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.01 SE 1650122-31.一种包含HSV-2蛋白的截短形式mgG-2的蛋白，所述蛋白包括：(i)至少285个氨基酸的mgG-2的胞外区(EX-mgG-2)或其截短形式；所述胞外区或其截短形式与存在于SEQIDNO：3中的相应长度的肽片段具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性(％SI)；(ii)2至15个氨基酸的mgG-2的截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)；所述截短型跨膜区与存在于SEQIDNO：6中的相应长度的肽片段具有至少90％的序列同一性(％SI)；和(iii)至少18个氨基酸的mgG-2的胞内区(IC-mgG-2)或其截短形式；所述胞内区或其截短形式与存在于SEQIDNO：8中的相应长度的肽片段具有至少90％或至少95％的序列同一性(％SI)。2.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)包含2至10个氨基酸(AA)。3.根据权利要求2所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)包含3至5个氨基酸(AA)。4.根据权利要求1-3中任一项所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)与存在于SEQIDNO：9中的相应长度的肽片段具有至少90％的序列同一性(％SI)。5.根据权利要求1-3中任一项所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)与存在于SEQIDNO：10中的相应长度的肽片段具有至少90％的序列同一性(％SI)。6.根据权利要求1-3中任一项所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)与存在于SEQIDNO：11中的相应长度的肽片段具有至少80％的序列同一性(％SI)。7.根据权利要求1-3中任一项所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)与存在于SEQIDNO：12中的相应长度的肽片段具有至少80％的序列同一性(％SI)。8.根据权利要求1-3中任一项所述的蛋白，其中所述截短型跨膜区(t-TMR-mgG-2)具有SEQIDNO：7的氨基酸序列。9.根据权利要求1-8中任一项所述的蛋白，其中所述mgG-2的胞外区(EX-mgG-2)被截短。10.根据权利要求9所述的蛋白，其中所述截短的mgG-2的胞外区(EX-mgG-2)与存在于SEQIDNO：3中的相应长度的肽片段共享90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性(％SI)。11.根据权利要求9或10所述的蛋白，其中所述截短的mgG-2的胞外区(EX-mgG-2)包含至少290、295或300个氨基酸。12.根据权利要求1-11中任一项所述的蛋白，其中所述mgG-2的胞内区(IC-mgG-2)被截短。13.根据权利要求12所述的蛋白，其中所述截短的mgG-2的胞内区(IC-mgG-2)包含18、20、22、24或26个氨基酸。14.根据权利要求12或权利要求13所述的蛋白，其中所述截短的mgG-2的胞内区(IC-mgG-2)与存在于SEQIDNO：8中的相应长度的肽片段共享至少90％或至少95％的序列同一性(％SI)。15.根据权利要求1-3中任一项所述的蛋白，其中所述蛋白包含：(i)mgG-2的胞外区的第345-649位氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾恩阿克·里杰奎斯特，
申请(专利权)人：辛普勒夏雅公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE