The invention discloses an engineered Escherichia coli bacterium for synthesizing glycoprotein conjugated vaccine of E. coli causing neonatal meningitis and its application. The invention relates to a method for constructing a cell factory for synthesizing E. coli O1 serotype glycoprotein binding vaccine for neonatal meningitis. It is based on the efficient homologous recombination efficiency of Saccharomyces cerevisiae and DNA Assembler method to construct O1 antigen synthesis gene cluster plasmid. In Escherichia coli JM109, the O1 gene was synthesized and shuttle plasmid was synthesized. The plasmid was identified by lipopolysaccharide extraction, gel electrophoresis and silver staining. WaaL and wecA in JM109 were deleted under the assistance of FLP FRT, and the interference of the original incomplete O antigen was excluded. The modified plasmid pET28a (+) was induced to synthesize glycoprotein-binding vaccine. The glycoprotein was purified by AKTA Primeplus protein purification workstation and identified by Western blotting. The recombinant E.coli constructed by the invention provides a new way of synthesizing glycoprotein conjugate vaccine by biological method.
【技术实现步骤摘要】
合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途
本专利技术属于合成生物学
，涉及一种利用重组大肠杆菌合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的方法。更具体地说是一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。
技术介绍
新生儿致脑膜炎大肠杆菌（NMEC）是隶属于肠外致病性大肠杆菌的一大类群，主要侵染对象为新生婴幼儿和免疫力低下的人群，属于条件致病菌。经由胃肠道或呼吸道黏膜定植后，NMEC可侵入血液循环系统并大量繁殖，形成高浓度的菌血症。菌血症浓度达到一定阈值后，NMEC将进入脑部侵染环节。通过表达多种特异毒力因子来抵御宿主免疫系统攻击，NMEC可以穿越人体血脑屏障，进入脑脊液和脑组织繁殖生长，并引发严重的脑膜炎和无法痊愈的后遗症。与禽致病性大肠杆菌和尿路致病性大肠杆菌引发的疾病相比，NMEC感染的高致死率和高治疗难度一直是临床医学研究的难题之一。NMEC耐受环境压力，分布广泛，加之近年来出现的多重耐药性，使得NMEC的预防和治疗面临巨大的困难。接种相应疫苗是对抗NMEC感染的有效手段。目前，对新生儿致脑膜炎大肠杆菌致病菌的...
【技术保护点】
1.一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，含有NMEC（neonatal meningitis Escherichia coli, NMEC）O1抗原合成基因簇质粒和糖基化系统质粒，命名为工程菌株JM109∆waaL ∆wecA/pCRG16‑O1 pET28M‑epa‑pglB。
【技术特征摘要】
1.一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，含有NMEC（neonatalmeningitisEscherichiacoli,NMEC）O1抗原合成基因簇质粒和糖基化系统质粒，命名为工程菌株JM109∆waaL∆wecA/pCRG16-O1pET28M-epa-pglB。2.权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于所述含有NMEC血清型O1抗原合成基因簇质粒指的是：通过BSPdb数据库定位出其O1抗原合成基因簇区域，并将其连接到酿酒酵母-大肠杆菌穿梭载体pCRG16上。3.权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于所述含有糖基化系统质粒指的是：改造pET28a(+)，插入合成的两对tac启动子和rrnB终止子替换原始的T7启动子和终止子，该质粒含有来自于铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）经过大肠杆菌密码子优化的外毒素A基因（exotoxinA，GI：877850）；和来自空肠弯曲杆菌（Campylobacterjejuni）并经过大肠杆菌密码子优化的N-糖基转移酶编码基因（undecaprenyl-diphosphooligosaccharide--proteinglycotransferase，GI：905417），该条目中的两个基因分别处于一对tac启动子和rrnB终止子控制下，该质粒命名为Pet28M-EPA-pglB。4.权利要求1-3任一项所述大肠杆菌在合成不同血清型的致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的应用。5.一种权利要求1所述合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：1）将质粒pSim导入转化到宿主菌JM109中，...
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