一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷制造技术

本发明专利技术公开了一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷，本发明专利技术中所述的达玛烷型三萜皂苷及达玛烷型三萜皂苷组分，对果蝇阿兹海默症果蝇模型的学习记忆能力具有显著的挽救效果，具有很好的治疗阿尔茨海默症的作用。

A three diterpenoid saponin from Gynostemma pentaphyllum with anti Alzheimer's disease

The invention discloses a kind of Damarane type triterpenoid saponin with anti-Alzheimer's disease in Gynostemma pentaphyllum. The Damarane type triterpenoid saponin and the Damarane type triterpenoid saponin components described in the invention have remarkable saving effect on the learning and memory ability of Drosophila Alzheimer's disease Drosophila model, and have good therapeutic effect on Alzheimer's disease. The effect of disease.

【技术实现步骤摘要】
一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷
本专利技术具体涉及一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷。
技术介绍
绞股蓝(Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino)是葫芦科绞股蓝属多年生草质攀缘植物，又名第二人参、不老长生草、福音草等。该属植物基源复杂、品种繁多，广泛分布于亚热带国家和地区。全世界约有16种和3变种，我国有14种和3变种，主要分布在陕西、云南、甘肃、湖南、湖北、广西等省。该植物味苦、微甘，性凉，无毒；归肺、脾、肾经；具有补益脾气，化痰止咳，清热解毒之功效。绞股蓝可全草入药，具有延缓衰老、抗疲劳、抗癌、改善脑力活动、提高大脑机能、增强人体免疫力、调节内分泌、降低胆固醇和转氨酶、抑制溃疡、缓解紧张、镇静、镇痛等功效，尤其在防治老年病方面具有积极作用。现代研究表明，绞股蓝中主要活性成分是达玛烷型三萜皂苷，目前已经从中分离得到200余个达玛烷型三萜皂苷。达玛烷型三萜皂苷具有多种药理活性，如、抑制神经细胞凋亡、保护神经细胞以及促进学习记忆能力、抗衰老、抗肿瘤、保护心脑血管、降血糖、调血脂、增强免疫力、保肝等。通过对绞股蓝中达玛烷型三萜皂苷进行果蝇阿兹海默症果蝇模型的学习记忆能力挽救效果研究，寻找具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷，对抗阿尔茨海默病的新药研究以及绞股蓝的开发利用都具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷，另一目的是提供一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，还有一目的是提供一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法。为了满足上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷，其特征在于所述达玛烷型三萜皂苷的结构通式同下：其中R1选自以下基团：-CH3、-CHO；其中R2选自以下基团：-H、-OH；其中R3选自以下基团：-H、-OH；基团R4选自以下基团：-OH、-O(CH2)nCH3(n＝1，2，......30)；其中基团R5选自以下基团：化合物20位、21位和23位的绝对构型各自独立的为：(20R,21R,23R)、(20R,21R,23S)、(20R,21S,23R)、(20R,21S,23S)、(20S,21R,23R)、(20S,21R,23S)、(20S,21S,23R)、(20S,21S,23S)。优选的，所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，具体步骤如下：2.1将绞股蓝全草粉碎，粉碎至长度小于1厘米，再用体积百分数为30％～90％的乙醇、体积百分数为30％～100％的甲醇、乙酸乙酯或丙酮其中的一种为提取溶剂，通过提取方法为室温冷浸提取、加热回流提取或室温渗漉提取中的一种方法对粉碎后的绞股蓝全草进行提取得提取液，再减压至-0.05～-0.09MPa浓缩所得提取液，浓缩至浸膏为粘稠溶液，得总浸膏A；2.2将总浸膏A进行D101大孔吸附树脂柱层析，分别用水、甲醇、甲醇的水溶液等份收集洗脱液，将所得洗脱液浓缩至稠膏，分别得到洗脱液为水的浸膏B、洗脱液体积比为30％甲醇的浸膏C、洗脱液体积比为50％甲醇的浸膏D、洗脱液体积比为70％甲醇的浸膏E、洗脱液体积比为90％甲醇的浸膏F、洗脱液为甲醇的浸膏G；2.3分别对浸膏B、浸膏C、浸膏D、浸膏E、浸膏F、浸膏G进行硅胶柱层析、ODS反相柱层析、薄板制备层析、MCI柱层析、制备HPLC或SephedexLH-20柱层析中的一种层析方法，用体积比为0:100～100:0的甲醇/水、体积比为0:100～100:0的氯仿/甲醇、体积比为0:100～100:0的氯仿/丙酮、体积比为0:100～100:0的石油醚/丙酮、或体积比为0:100～100:0的石油醚/乙酸乙酯中的一种洗脱剂洗脱，得到不同的浸膏组分；2.4对实验步骤2.3所得到的浸膏组分进行硅胶柱层析、薄板制备层析、制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，得到多种活性化合物，通过核磁共振谱(NMR谱)，确定各活性化合物的结构。优选的，所述步骤2.4硅胶柱层析所用硅胶的目数为200-300目。优选的，所述步骤2.4硅胶柱层析所用洗脱剂氯仿/甲醇体系中氯仿与甲醇的体积比为30:1～1:1。优选的，所述步骤2.4制备型高效液相色谱仪所用流动相甲醇/水体系中甲醇与水的体积比为60:40～100:0。优选的，所述步骤2.5所述薄板制备层析所用硅胶型号为化学纯GF254。优选的，所述达玛烷型三萜皂苷具有对果蝇阿兹海默症果蝇模型的学习记忆能力挽救效果。优选的，所述达玛烷型三萜皂苷及其达玛烷型三萜皂苷组分在治疗阿尔茨海默病药物中的应用。优选的，所述达玛烷型三萜皂苷组分为两种或两种以上达玛烷型三萜皂苷的组合。优选的，所述达玛烷型三萜皂苷及达玛烷型三萜皂苷组分的应用包括以下操作步骤：10.1AD果蝇模型建立：本实验中使用的所有果蝇均经过至少5代的回交，使之均处于w1118(isoCJ1)的遗传背景下，以避免不同遗传背景对结果的影响，因此，w1118(isoCJ1)简称为“2U”品系的果蝇作实验对照组背景果蝇，致病性可调控人源Aβ42蛋白通过和启动Aβ42基因表达的果蝇Gal4lineelav-GAL4c155杂交后，其子代会在神经系统中表达Aβ42蛋白，将P35与遗传背景果蝇2U杂交，其子代果蝇则不会表达Aβ42蛋白在分析前1小时，苍蝇被移到黑暗的房间里，以便苍蝇能够熟悉环境，所述致病性可调控人源UAS-Aβ42被称为H29.3，所述果蝇Gal4lineelav-GAL4c155称为P35；10.2样品测试溶液配制称取适量待测样品，使用DMSO配制成10mM母液，之后，吸取部分10mM母液，用DMSO稀释成1mM的母液，再用4％蔗糖水稀释成10μM工作液，所述DMSO终浓度为1％，所有化合物的工作液均为透明澄清溶液，工作液存放于-20℃冰箱中，备用。10.3阳性药物对照组溶液配制对照化合物美金刚MEM的母液存储于-20℃冰箱中，喂药开始前一天，MEM会以4％蔗糖工作液稀释至10μM或100μM，存放于-20℃冰箱中，备用。10.4分组①遗传背景对照组：2U×H29.3；②Aβ42疾病对照组：P35×H29.3；③阳性药物对照组：MEM10μM或100μM，PC；④样品组：10.5果蝇饲养所有果蝇在24℃和40～60％相对湿度RH，每天12小时光照的标准环境中饲养，子代果蝇羽化后的第二日起，选择新孵出的2U×H29.3雄果蝇和P35×H29.3果蝇(AD果蝇)并放入小瓶，每小瓶含有大约120只果蝇，在喂药过程中将这些果蝇放置在29℃和40±15％RH条件下，将果蝇从第2天至第8天喂药4小时后转移到新的小瓶中，将所有果蝇放置在29℃和40±15％RH条件下直到巴甫洛夫嗅觉学习测定前1小时；10.6巴甫洛夫式嗅觉记忆学习记忆测试是在25℃和70％相对湿度的恒温恒湿避光的行为房中进行，在训练期间，将约100只果蝇装入一个内铺有铜网的训练管，先后通入3-辛醇(3-OCT)和4-甲基环己醇(4-MCH)两种气味的气体，每种气味持续60秒，中间间隔45秒的新鲜空气，当且仅当果蝇闻到第一种气味(CS+)时，果蝇受到60本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷，其特征在于所述达玛烷型三萜皂苷的结构通式同下：

【技术特征摘要】
1.一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷，其特征在于所述达玛烷型三萜皂苷的结构通式同下：其中R1选自以下基团：-CH3、-CHO；其中R2选自以下基团：-H、-OH；其中R3选自以下基团：-H、-OH；基团R4选自以下基团：-OH、-O(CH2)nCH3(n＝1，2，......30)；其中基团R5选自以下基团：化合物20位、21位和23位的绝对构型各自独立的为：(20R,21R,23R)、(20R,21R,23S)、(20R,21S,23R)、(20R,21S,23S)、(20S,21R,23R)、(20S,21R,23S)、(20S,21S,23R)、(20S,21S,23S)。2.根据权利要求1所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，其特征在于具体步骤如下：2.1将绞股蓝全草粉碎，粉碎至长度小于1厘米，再用体积百分数为30％～90％的乙醇、体积百分数为30％～100％的甲醇、乙酸乙酯或丙酮其中的一种为提取溶剂，通过提取方法为室温冷浸提取、加热回流提取或室温渗漉提取中的一种方法对粉碎后的绞股蓝全草进行提取得到提取液，再减压至-0.05～-0.09MPa浓缩所得的提取液，浓缩至浸膏为粘稠溶液，得总浸膏A；2.2将总浸膏A进行D101大孔吸附树脂柱层析，分别用水、甲醇、甲醇的水溶液等份收集洗脱液，将所得洗脱液浓缩至稠膏，分别得到洗脱液为水的浸膏B、洗脱液体积比为30％甲醇的浸膏C、洗脱液体积比为50％甲醇的浸膏D、洗脱液体积比为70％甲醇的浸膏E、洗脱液体积比为90％甲醇的浸膏F、洗脱液为甲醇的浸膏G；2.3分别对浸膏B、浸膏C、浸膏D、浸膏E、浸膏F、浸膏G进行硅胶柱层析、ODS反相柱层析、薄板制备层析、MCI柱层析、制备HPLC或SephedexLH-20柱层析中的一种层析方法，用体积比为0:100～100:0的甲醇/水、体积比为0:100～100:0的氯仿/甲醇、体积比为0:100～100:0的氯仿/丙酮、体积比为0:100～100:0的石油醚/丙酮、或体积比为0:100～100:0的石油醚/乙酸乙酯中的一种洗脱剂洗脱，得到不同的浸膏组分；2.4对实验步骤2.3所得到的浸膏组分进行硅胶柱层析、薄板制备层析、制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，得到多种活性化合物，通过核磁共振谱，确定各活性化合物的结构。3.如权利要求2所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤2.4硅胶柱层析所用硅胶的目数为200-300目。4.如权利要求2所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤2.4硅胶柱层析所用洗脱剂氯仿/甲醇体系中氯仿与甲醇的体积比为30:1～1:1。5.如权利要求2所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤2.4制备型高效液相色谱仪所用流动相甲醇/水体系中甲醇与水的体积比为60:40～100:0。6.如权利要求2所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的制备方法，其特征在于步骤2.5所述薄板制备层析所用硅胶型号为化学纯GF254。7.根据权利要求1所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的应用，其特征在于：所述达玛烷型三萜皂苷具有对果蝇阿兹海默症果蝇模型的学习记忆能力挽救效果。8.根据权利要求书1所述的一种绞股蓝中具有抗阿尔茨海默病的达玛烷型三萜皂苷的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨军丽，王君，孟宪华，师彦平，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62