椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法技术

本发明专利技术提供了椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，属于椰子组织培养技术领域。椰子胚诱导培养基，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含2,4‑D，麦草畏，NAA，蔗糖，琼脂和活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8。本发明专利技术以椰子合子胚为外植体，经过外植体消毒、细胞薄层培养、胚的诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了椰子组织培养快速繁殖体系，为椰子产业持续提供优质椰子组培苗，促进椰子产业升级换代具有重要的意义。

Coconut embryo inducing medium and regeneration method from coconut zygote embryo cells by thin layer culture

The invention provides a coconut embryo induction medium and a method for obtaining in vitro regenerated plants based on coconut zygotic embryo cell thin layer culture, belonging to the technical field of coconut tissue culture. The coconut embryo induction medium is based on the improved Y3 medium. The basic medium also contains 2,4 D, wheat straw phobia, NAA, sucrose, agar and activated carbon. The pH value of the coconut embryo induction medium is 5.5-5.8. The invention takes coconut zygotic embryo as explant, through the process of explant disinfection, cell thin layer culture, embryo induction, multiplication culture, rooting culture and seedling transplantation, establishes a rapid propagation system of coconut tissue culture, provides high quality coconut tissue culture seedlings for coconut industry, and promotes the upgrading and replacement of coconut industry. Significance.

【技术实现步骤摘要】
椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法
本专利技术属于椰子组织培养
，具体涉及椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法。
技术介绍
椰子(CocosnuciferaL.)是棕榈科椰子属多年生乔木，是典型的热带木本油料作物和食品作物，是世界热带地区重要的经济作物。目前我国椰子的产量只能满足总需求量的10％左右，供需矛盾突出，因此急需要加快椰子种植产业的发展。然而椰子多为异花授粉植物，生长周期长，繁殖系数低，杂种后代性状分离严重，个体间差异较大，很难获得同一性状的后代群体，同时椰子只有一个独立的茎干而不产生分枝，因而常规的营养繁殖手段如扦插、嫁接、高空压条等无法用于椰子的无性繁殖，因此有必要通过建立完整、高效、实用的椰子组培快繁技术体系，实现椰子优良无性品系培育，为推广优质椰子组织培养苗大规模繁育提供技术支撑。目前，对于椰子组织培养技术而言，尚无成功的植株再生案例，只能借鉴其他物种的植株再生技术进行摸索和研究，但是不同物种遗传背景和生活环境差异巨大，对椰子的组织培养技术的研发帮助甚微。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，具有高效的胚芽诱导率，从而建立了椰子组织培养快速繁殖体系。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种椰子胚诱导培养基，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～1mg/L2,4D，0～1mg/L麦草畏，0～1mg/LNAA，质量浓度为3％～7％蔗糖，质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.25％活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述2,4D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；所述改良的Y3培养基是在Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/LCuSO4·5H2O，25～56mg/LNa2·EDTA和12～45mg/LFeSO4·7H2O。优选的，基本培养基中还包含0.3～0.8mg/L2,4D、0.3～0.8mg/L麦草畏、0.3～0.8mg/LNAA、质量浓度为4％～6％蔗糖、质量浓度为0.4％～0.45％琼脂和质量浓度为0.18％～0.23％活性炭。本专利技术提供了一种基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，包括以下步骤：(1)从消毒的固体胚乳块中分离出胚，将得到的胚切片接种到初代诱导培养基上初代培养，得到初代胚薄片；所述初代诱导培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～4mg/L2,4D、0～10mg/L麦草畏、0～1mg/LNAA、质量浓度为3％～7％蔗糖、质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和0.1％～0.25％活性炭；所述初代诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述2,4D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；所述初代培养的温度25～28℃；所述初代培养为全暗培养；所述初代培养的时间为15～20d；(2)将所述步骤(1)中初代胚薄片接种到权利要求1或2所述的胚诱导培养基上进行诱导培养，得到芽；所述诱导培养为光照培养，光照的时长10～12h/d；光照强度为1000～1500lx；所述诱导培养的温度为25～28℃；(3)将所述步骤(2)中的芽切片接种至增殖培养基上增殖培养，再转接到所述的胚诱导培养基上再次诱导培养，得到胚芽；所述增殖培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～4mg/L2,4D、0.1～0.5mg/L麦草畏、0～1mg/LNAA、质量浓度为3％～7％蔗糖、质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.25％活性炭；所述增殖培养基的pH值为5.5～5.8；所述增殖培养的温度为25～28℃；所述增殖培养为全暗培养；所述增殖培养的时间为15～20d；所述再次诱导培养为光照培养；光照的时长为12～15h/d，光照强度为1000～1500lx，所述再次诱导培养培养的温度为25～28℃；(4)将所述步骤(3)中的胚芽接种到生根培养基上进行生根培养，得到椰子组培苗；所述生根培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0.1～0.5mg/LGA3、0～1mg/LNAA、质量浓度为3％～10％蔗糖、质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.25％活性炭；所述生根培养基的pH值为5.5～5.8；所述生根培养是先进行全暗培养3～7d，然后进行光暗交替培养38～45h；光照的时长为10～12h/d，光照强度为2000～2500lx；所述生根培养的温度为25～28℃；(5)将所述步骤(4)中的椰子组培苗置于自然光照下炼苗10～15d后，洗净根部培养基，移栽至再生基质中培养，得到椰子再生植株；所述再生基质包括体积比为2～4：1的红土和河沙；所述改良的Y3培养基是在国际通用培养基Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/LCuSO4·5H2O，25～56mg/LNa2·EDTA和12～45mg/LFeSO4·7H2O。优选的，所述步骤(1)中消毒的方法如下：将所述固体胚乳块在1号消毒液中浸泡5～10s，然后用体积浓度为2号消毒液中消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次；所述1号消毒液为体积浓度为70％～80％乙醇；所述2号消毒液为体积浓度为0.1％溶液。优选的，所述步骤(1)的胚切片的厚度和步骤(3)芽切片的厚度为独立为0.5～1.2mm。优选的，所述步骤(1)中所述初代诱导培养基为基本培养基中包含2mg/L2,4D、5mg/L麦草畏、0.5mg/LNAA、质量浓度为5％蔗糖、质量浓度为0.4％琼脂和质量浓度为0.20％活性炭；所述初代诱导培养基的pH值为5.6；所述初代培养的温度26℃；所述初代培养的时间为18d。优选的，所述步骤(2)中接种至胚诱导培养基上的接种量为16～30个/皿。优选的，所述步骤(3)中增殖培养基为基本培养基中还包含2mg/L2,4D、0.3mg/L麦草畏、0.5mg/LNAA，质量浓度为5％蔗糖、质量浓度为0.4％琼脂和质量浓度为0.2％活性炭；所述增殖培养基的pH值为5.6；所述增殖培养的温度为26℃；所述所述增殖培养的时间为18d；所述光照的时长为14h/d，光照强度为1200lx，所述再次诱导培养培养的温度为26℃。优选的，所述步骤(4)中所述生根培养基为基本培养基中包含0.3mg/LGA3、0.5mg/LNAA、质量浓度为7％蔗糖、质量浓度为0.45％琼脂和质量浓度为0.2％活性炭；所述生根培养基的pH值为5.6；所述生根培养是先进行全暗培养5d，然后进行光照培养42h；光照的时长为11h/d，光照强度为2200lx；所述生根培养的温度为26℃。优选的，所述步骤(1)中固体胚乳块采集自10～14月的成熟椰子果实。本专利技术提供了一种椰子胚诱导培养基，是以改良的Y3培养基为基本培养基，所述改良的Y3培养基是在常规Y3培养基的基础上对CuSO4·5H2O、Na2.EDTA和FeSO4.7H2O的浓度进行了调整，同时还额外添加了2,4D、麦草畏和NAA3种植物激素，有助于高效诱导椰子胚的诱导成功率。本专利技术提供的椰子胚诱导培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种椰子胚诱导培养基，其特征在于，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～1mg/L 2,4‑D，0～1mg/L麦草畏，0～1mg/L NAA，质量浓度为3％～7％蔗糖，质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.25％活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述2,4‑D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；所述改良的Y3培养基是在Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/L CuSO4·5H2O，25～56mg/LNa2·EDTA和12～45mg/L FeSO4·7H2O。

【技术特征摘要】
1.一种椰子胚诱导培养基，其特征在于，以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～1mg/L2,4-D，0～1mg/L麦草畏，0～1mg/LNAA，质量浓度为3％～7％蔗糖，质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.25％活性炭；所述椰子胚诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述2,4-D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；所述改良的Y3培养基是在Y3培养基基础上对如下组分含量进行调整得到：0.025～0.25mg/LCuSO4·5H2O，25～56mg/LNa2·EDTA和12～45mg/LFeSO4·7H2O。2.根据权利要求1所述的椰子胚诱导培养基，其特征在于，所述基本培养基中包含0.3～0.8mg/L2,4-D、0.3～0.8mg/L麦草畏、0.3～0.8mg/LNAA、质量浓度为4％～6％蔗糖、质量浓度为0.4％～0.45％琼脂和质量浓度为0.18％～0.23％活性炭。3.一种基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从消毒的固体胚乳块中分离出胚，将所述胚切片接种到初代诱导培养基上初代培养，得到初代胚薄片；所述初代诱导培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基还包含0～4mg/L2,4-D、0～10mg/L麦草畏、0～1mg/LNAA、质量浓度为3％～7％蔗糖、质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和0.1％～0.25％活性炭；所述初代诱导培养基的pH值为5.5～5.8；所述2,4D、麦草畏和NAA的浓度不同时为0；所述初代培养的温度25～28℃；所述初代培养为全暗培养；所述初代培养的时间为15～20d；(2)将所述步骤(1)中初代胚薄片接种到权利要求1或2所述的胚诱导培养基上进行诱导培养，得到芽；所述诱导培养为光照培养，光照的时长10～12h/d；光照强度为1000～1500lx；所述诱导培养的温度为25～28℃；(3)将所述步骤(2)中的芽切片接种至增殖培养基上增殖培养，再转接到权利要求1或2所述的胚诱导培养基上再次诱导培养，得到胚芽；所述增殖培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0～4mg/L2,4-D、0.1～0.5mg/L麦草畏、0～1mg/LNAA、质量浓度为3％～7％蔗糖、质量浓度为0.35％～0.5％琼脂和质量浓度为0.1％～0.25％活性炭；所述增殖培养基的pH值为5.5～5.8；所述增殖培养的温度为25～28℃；所述增殖培养为全暗培养；所述增殖培养的时间为15～20d；所述再次诱导培养为光照培养；光照的时长为12～15h/d，光照强度为1000～1500lx，所述再次诱导培养的温度为25～28℃；(4)将所述步骤(3)中的胚芽接种到生根培养基上进行生根培养，得到椰子组培苗；所述生根培养基以改良的Y3培养基为基本培养基，基本培养基中还包含0.1～0.5mg/LGA3、0～1mg/LNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤丽莉，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南,46