The invention discloses an accurate and efficient eukaryotic gene identification method based on transcriptome, which comprises the following technological steps: to identify gene expression prediction; to collect samples with high expression of genes to be identified and to extract and reverse transcription RNA; to sequence transcriptomes; to analyze and store transcriptome data; to extract gene expression data; Identification of primer design and gene identification. Specifically, through the analysis of research reports of related species, the transcriptome of the samples with abundant gene expression to be identified was determined, and then the target sequence of the genes to be identified was screened in the transcriptome. On this basis, the identification and cloning of the genes were carried out, and the accurate gene sequence was obtained. This technique is suitable for functional gene identification in most eukaryotic organisms, and it is very accurate and meets the research needs of functional gene identification in the research process. The invention is reasonable in design, simple in use and relatively low in cost, and suitable for popularization and application.
【技术实现步骤摘要】
一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法
本专利技术涉及生物
,尤其是涉及一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法。
技术介绍
自人类基因组测序完成以来,越来越多的生物的基因组测序完成。基于基因组鉴定生物基因相对容易。然而,完成基因组测序的物种所占比例极小,大部分的物种都需要通过同源克隆的方式鉴定物种本身的基因。同源克隆对于近缘物种中已鉴定得到对应基因的情况下,效果较好。然而,在鉴定物种间一致性低的基因以及一些进化地位特殊的物种的基因时,同源克隆往往无法达到令人满意的效果。这是往往需要分析基因的保守位点,设计兼并引物,可能同时需要几对,甚至十几对的引物才能获得目的基因。大大增加了鉴定的经济成本和时间成本。转录组是继基因组学后另一大组学研究热点。由于转录组测序技术的发展,以及转录组测序和数据分析相对基因组简单,转录组测序成本远远低于基因组测序。转录组测序理论上能够获得某个样本中全部表达的基因的序列。因此,一次转录测序构建的数据库可为成千山万个基因的鉴定提供基础数据库。转录组测序的成本平摊到每一个基因的鉴定上低至几毛钱至几元钱,这远远低于多次引物的设计合成成本。
技术实现思路
本专利技术提供一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,可以有效解决上述
技术介绍
中的问题。本专利技术的技术方案概述如下:一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,包括如下工艺步骤:第1步,拟鉴定基因表达预测:首先利用基因的基本信息,以及其在其他物种中的研究结果预测待鉴定基因本身的表达的情况,确定待鉴定基因高表达的时空信息;第2步,拟鉴定基因高表达样品的采集和RN ...
【技术保护点】
1.一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,其特征在于,包括如下工艺步骤:第1步,拟鉴定基因表达预测:首先利用基因的基本信息,以及其在其他物种中的研究结果预测待鉴定基因本身的表达的情况,确定待鉴定基因高表达的时空信息;第2步,拟鉴定基因高表达样品的采集和RNA提取与反转录:待鉴定基因高表达样品的要求为,待鉴定基因的表达量高,样品容易采集且RNA容易提取,根据此要求,利用真核生物特有的Poly A富集RNA,片段化RNA后反转录得到所需的cDNA文库;第3步,转录组测序:使用高通量测序平台对cDNA文库进行测序;第4步,转录组数据分析与存储:对cDNA文库的转录组数据质控、拼接,并进行功能注释,注释结果保存于EXCEL;第5步,转录组数据的调取:利用EXCEL的搜索功能,以待鉴定基因为关键词进行搜索,将需要鉴定的基因名在功能注释的EXCEL中搜索定位其在转录组中的位置,调出对应的转录组序列,若找到多个序列,则进行序列比对,筛选正确的序列用于引物设计;第6步,基因鉴定引物的设计与基因鉴定:根据筛选到的序列对序列进行整理分析,预测其CDS并设计序列特异性引物,进行基因鉴定。
【技术特征摘要】
1.一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,其特征在于,包括如下工艺步骤:第1步,拟鉴定基因表达预测:首先利用基因的基本信息,以及其在其他物种中的研究结果预测待鉴定基因本身的表达的情况,确定待鉴定基因高表达的时空信息;第2步,拟鉴定基因高表达样品的采集和RNA提取与反转录:待鉴定基因高表达样品的要求为,待鉴定基因的表达量高,样品容易采集且RNA容易提取,根据此要求,利用真核生物特有的PolyA富集RNA,片段化RNA后反转录得到所需的cDNA文库;第3步,转录组测序:使用高通量测序平台对cDNA文库进行测序;第4步,转录组数据分析与存储:对cDNA文库的转录组数据质控、拼接,并进行功能注释,注释结果保存于EXCEL;第5步,转录组数据的调取:利用EXCEL的搜索功能,以待鉴定基因为关键词进行搜索,将需要鉴定的基因名在功能注释的EXCEL中搜索定位其在转录组中的位置,调出对应的转录组序列,若找到多个序列,则进行序列比对,筛选正确的序列用于引物设计;第6步,基因鉴定引物的设计与基因鉴定:根据筛选到的序列对序列进行整理分析,预测其CDS并设计序列特异性引物,进行基因鉴定。2.根据权利要求1所述的一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,其特征在于,所述第1步中具体可使用相关的查询数据库,如THEHUMANPROTEINATLAS(https://www.proteinatlas.org),此外,一些特殊的物种可参考其近缘物种的研究报告。3.根据权利要求1所述的一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,其特征在于,所述第2步中的RNA提取过程中利用OligoT富集包含PolyA的全部RNA,并使用但不限于agilent2200检测RNA和cDNA文库质量。4.根据权利要求1所述的一种基于转录组的准确高效的真核生物基因鉴定方法,其...
【专利技术属性】
技术研发人员:李志琼,汪斌,陈虎,齐锦雯,陈德芳,唐妮,王书瑶,田正志,吴源冰,王美,徐少奇,
申请(专利权)人:四川农业大学,
类型:发明
国别省市:四川,51
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