真核表达载体、真核表达系统、二者的制备方法和应用及GDF11蛋白技术方案

本发明专利技术提供了一种真核表达载体、真核表达系统、二者的制备方法和应用及GDF11蛋白，涉及分子生物学技术领域，本发明专利技术提供的真核表达载体，能够高表达GDF11基因。本发明专利技术提供的上述真核表达载体的制备方法，包括将GDF11基因片段插入重组质粒，操作简单，制备得到的真核表达载体具有高表达GDF11基因的效果。本发明专利技术提供的真核表达系统，宿主细胞为CHO，能够稳定高效地表达重组蛋白GDF11。本发明专利技术提供的上述真核表达系统的制备方法，包括将真核表达载体转染到CHO细胞中，培养并筛选，通过DHFR二氢叶酸还原酶系统进行转染子筛选，能够在保证细胞活率的情况下，通过反馈调节，使GDF11基因扩增，提高蛋白的表达量。

Eukaryotic expression vector, eukaryotic expression system, preparation method and application of two, and GDF11 protein

The invention provides an eukaryotic expression vector, an eukaryotic expression system, a preparation method and application of the two and a GDF11 protein, which relates to the technical field of molecular biology. The eukaryotic expression vector provided by the invention can highly express the GDF11 gene. The preparation method of the eukaryotic expression vector provided by the invention includes inserting the GDF11 gene fragment into the recombinant plasmid, which is easy to operate, and the prepared eukaryotic expression vector has the effect of high expression of GDF11 gene. The eukaryotic expression system provided by the invention has a host cell of CHO, which can stably and efficiently express the recombinant protein GDF11. The preparation method of the eukaryotic expression system provided by the invention includes transfecting the eukaryotic expression vector into CHO cells, cultivating and screening, screening the transfectors through DHFR dihydrofolate reductase system, enabling GDF11 gene amplification and protein expression to be improved by feedback regulation under the condition of ensuring cell viability. Quantity.

【技术实现步骤摘要】
真核表达载体、真核表达系统、二者的制备方法和应用及GDF11蛋白
本专利技术涉及分子生物学
，尤其是涉及一种真核表达载体、真核表达系统、二者的制备方法和应用及GDF11蛋白。
技术介绍
生长分化因子11(growthdifferentiationfactor11,GDF11)也称为骨形态发生蛋白11(BMP11)，属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族，作为一种新的生分化因子于1999年被首次报道。GDF11作为一个新发现的生长分化因子，其具体的生物学功能尚不完善，需要研究人员进一步的探究，但目前可以确定其在生物的胚胎发育过程中起重要作用。比如已经确定了GDF11在脊髓前/后轴、骨、骨骼肌、神经系统、消化腺和泌尿生殖系统发育中发挥重要的作用。另外，还有研究发现GDF11能明显改善骨骼肌、心肌的衰老，具有明显的抗衰老作用，虽然GDF11的抗衰老作用仍存在争议，需要进一步的研究。另一方面，TGF-β家族成员及其受体在癌症中起主要调节作用。在正常细胞和早期癌细胞中，TGF-β信号转导途径发挥肿瘤抑制作用，而在晚期肿瘤细胞中TGF-β信号传导途径会促进癌症的转移，根据人蛋白Atlas本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真核表达载体，其特征在于，所述真核表达载体高表达GDF11基因，所述GDF11基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种真核表达载体，其特征在于，所述真核表达载体高表达GDF11基因，所述GDF11基因具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的真核表达载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：提供pcDNA3.1+-KSH-DHFR重组质粒，将GDF11基因片段插入到所述pcDNA3.1+-KSH-DHFR重组质粒的多克隆位点，得到所述真核表达载体。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，将以DHFR片段和KKS片段为模板，KKSDR和DHFR-R为引物扩增得到的KSH-DHFR片段与pcDNA3.1+质粒连接、转化、筛选阳性菌落后，提取得到所述pcDNA3.1+-KSH-DHFR重组质粒；其中，所述KKS具有如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；所述KKSDR具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述DHFR-R具有如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；优选地，以人脂肪干细胞的cDNA为模板，DHFR-F、DHFR-R为引物，扩增得到所述DHFR片段；其中，所述DHFR-F具有如SEQIDNO.5所示的核苷酸序列。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，以GDF11基因序列NCBIReferenceSequence：NM_005811为模板，GDF11-F和GDF11-R为引物，扩增得到所述GDF11基因片段；其中，所述GDF11-F具有如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列；所述G...

【专利技术属性】
技术研发人员：任哲，刘俊伟，王紫鋆，陈静怡，王一飞，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44