本发明专利技术公开了一种抗C5全人源单链抗体C5B3及其应用，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。能够明显的抑制炎症反应过程中膜攻击复合物的形成，从而减少炎症反应过程中的损伤。C5全人源单链抗体C5B3在制备治疗视神经脊髓炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、重症肌无力等自身免疫性疾病和/或阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型溶血毒症综合征(AHU)、外伤引起的炎症及其相关特征的疾病药物中的应用。
Anti human C5 single chain Fv antibody C5B3 and its application
The invention discloses an anti-C5 human single-chain antibody C5B3 and its application. The DNA sequence of anti-C5 human single-chain antibody C5B3 is shown as SEQ ID NO:1. It can obviously inhibit the formation of membrane attack complex in the process of inflammation, thus reducing the damage in the process of inflammation. The application of C5 whole-human single-chain antibody C5B3 in the preparation of drugs for treating autoimmune diseases such as optic neuromyelitis, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, myasthenia gravis and/or paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH), atypical hemolytic syndrome (AHU), inflammation caused by trauma and related characteristics.
【技术实现步骤摘要】
一种抗C5全人源单链抗体C5B3及其应用
本专利技术属于生物工程领域，涉及一种抗C5全人源单链抗体C5B3及其应用。
技术介绍
C5是补体很重要的成分，补体系统包括30余种成分，广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面，补体不仅是机体固有免疫防御体系的重要组成部分，也是抗体发挥免疫效应的重要机制之一，并在不同环节参与适应性免疫应答及其调节。在炎症反应过程中C5转化酶将C5分解成C5a和C5b，C5a游离于液相，是重要的炎症介质，C5b经过一系列补体反应形成膜攻击复合物(MAC)，导致细胞裂解死亡。补体激活是一种高度有序的级联反应，从而发挥广泛的生物学效应。正常情况下，补体激活及其末端效应均处于严密的调控之下，从而有效地维持机体的自稳功能，但是在免疫功能紊乱或不受控制的补体被激活时会对自身组织造成伤害。这与很多疾病的发生和发展密切相关，比如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿、视神经脊髓炎等。因此，有关C5方面的治疗方法对很对疾病的治疗和预后有很大关系。Kohler和Milstein于1975年创立了杂交瘤技术，第一次获得了专一识别抗原单一表位并与之特异性结合的单克隆抗体，开创了抗体广泛地作为治疗药物的新时代。单克隆抗体与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有高特异性、高亲和力、副作用小等优点，大量的鼠单抗被研发应用并快速用于临床实验。然而在众多临床试验中却发现，鼠单克隆抗体因其对人体来说具有异源性，引起患者强烈的人抗鼠抗体反应(HAMA)，无法多次使用；并且完整的抗体分子量较大，到达靶器官或者靶组织的药物很少。因此，从氨基酸残基序列的源头上对它们进行分子改造。抗体的人源化技术带来了治疗用基因工程抗体免疫原性的大大下降，但即使是人源化程度非常高的鼠单抗的人源化抗体，其中依然至少含有1％-5％的异源成分，依然可能引起患者的抗抗体反应。虽然人源化抗体目前在临床应用的抗体中独占鳌头，但随着人们在全人源抗体技术方面的进步，全人源抗体正逐步后来居上，占据了新抗体药物研发的主导位置。目前关于阻断C5补体效应的单抗主要是鼠来源进行人源化改造获得的，人源化过程也较为复杂，而且人源化后依然存在HAMA反应，该反应影响抗体的治疗效果，可能对患者造成二次伤害，比如过敏反应、肾损害等，严重时可能危及生命。因此，人源抗体以其特有的优势越来越成为抗体研发的主流趋势。本专利技术基于以上研究背景，目前噬菌体展示技术在单抗筛选方面得到了广泛的应用，但针对不同的靶向目标及不同的噬菌体抗体库，有所不同。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷和不足，本专利技术的第一个目的是提供一种抗C5全人源单链抗体C5B3，能够明显的抑制炎症反应过程中膜攻击复合物的形成，从而减少炎症反应过程中的损伤，可能对自身免疫性疾病及补体相关为特征的疾病提供了基于抗体的疗法。本专利技术的第二个目的是提供C5全人源单链抗体C5B3在制备治疗自身免疫性疾病和/或补体为相关特征的疾病药物中的应用。为达到上述目的，本专利技术采取的技术方案包括：一种抗C5全人源单链抗体C5B3，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的DNA序列选自以下一种的序列：SEQIDNO:1所示序列；与SEQIDNO.1具有90％以上同源性的序列。可选的，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的氨基酸序列选自以下一种蛋白的编码序列：SEQIDNO:2所示的序列；与SEQIDNO.2具有90％以上同源性的蛋白序列。可选的，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的重链可变区VHCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；重链可变区VHCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；重链可变区VHCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示；抗C5全人源单链抗体C5B3的轻链可变区VLCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示，轻链可变区VLCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区VLCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。一种含有抗C5全人源单链抗体C5B3的载体，该载体为pET30a，该载体上插入所述的抗C5全人源单链抗体C5B3。一种重组宿主细胞BL21，所述的重组宿主细胞BL21含有所述的载体。所述的抗C5全人源单链抗体C5B3在制备治疗自身免疫性疾病和/或C5补体为相关特征的疾病药物中的应用。所述的抗C5全人源单链抗体C5B3在制备治疗炎症反应过程中膜攻击复合物的形成引起的自身免疫性疾病和/或C5补体为相关特征的疾病药物中的应用。可选的，所述的自身免疫性疾病包括视神经脊髓炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮和重症肌无力。可选的，所述的C5补体为相关特征的疾病包括阵发性睡眠性血红蛋白尿、非典型溶血毒症综合征、外伤引起的炎症。本专利技术的有益效果：本专利技术的单链抗体针对补体C5，能够明显的抑制炎症反应过程中膜攻击复合物的形成，从而减少炎症反应过程中的损伤，可能对自身免疫性疾病及补体相关为特征的疾病提供了基于抗体的疗法。附图说明附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：图1为elisa检测噬菌体C5B3抗体的特异性；图2为重组的表达载体pET30a-C5B3结构示意图；图3为纯化的C5B3单链抗体，大小约30Kd；图4为(左)C5B3减少补体沉积，(右)是减少补体沉积统计图；图5为该专利技术单链抗体的功能验证，左图为阴性对照；右图为加了该单链抗体，死细胞(红色)明显减少；图6为该抗专利技术C5单链抗体功能验证的量效关系，随着加入该专利技术单链抗体的量的增加，死细胞的数量也随之减少；图7为该专利技术抗体体内实验验证结果，加入C5B3mAb组有明显的保护作用，病灶明显较小；图8为体内实验数据的统计分析图；具体实施方法以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。本专利技术基于全人源scFv单链抗体库，通过噬菌体展示的方法筛选得到全人源的抗C5的单链抗体，避免了HAMA反应，且已对进行了功能验证；与以往的抗C5的单链抗体的CDR区进行比较，差别较大，是全新的单抗药物。本专利技术为单链抗体，大小约30KD，蛋白分子量小，更易进去病灶部位起效，尤其是对脑部疾病，可以通过血脑屏障，缩短了到达病灶的时间，可起到更好的治疗效果。全人源抗补体C5单链抗体C5B3，所述全人源抗补体C5单链抗体C5B3的DNA序列如下所示：ATGGCCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCTCTATGTATGATATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTTCTTCTTCTGGTGGCATTACTTCGTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAACGACGCGGTTTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGG本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗C5全人源单链抗体C5B3，其特征在于，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的DNA序列选自以下一种的序列：SEQ ID NO:1所示序列；与SEQ ID NO.1具有90％以上同源性的序列。
【技术特征摘要】
1.一种抗C5全人源单链抗体C5B3，其特征在于，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的DNA序列选自以下一种的序列：SEQIDNO:1所示序列；与SEQIDNO.1具有90％以上同源性的序列。2.如权利要求1所述的抗C5全人源单链抗体C5B3，其特征在于，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的氨基酸序列选自以下一种蛋白的编码序列：SEQIDNO:2所示的序列；与SEQIDNO.2具有90％以上同源性的蛋白序列。3.根据权利要求1或2所述的抗C5全人源单链抗体C5B3，其特征在于，所述的抗C5全人源单链抗体C5B3的重链可变区VHCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；重链可变区VHCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；重链可变区VHCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示；抗C5全人源单链抗体C5B3的轻链可变区VLCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示，轻链可变区VLCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，轻...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫亚平，朱文莉，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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