The present invention relates to a rapid and sensitive colorimetric method for the determination of adenosine kinase activity. The method uses ATP and adenosine as substrates, bromothymol blue as indicator, magnesium acetate and glycine sodium hydroxide as buffer, and detects the absorbance at 614 nm with the solution containing adenosine kinase. By using bromothymol blue as pH indicator, there is a maximum absorption peak at 614 nm in the reaction system. The change of absorbance is positively correlated with the hydrogen ion produced by ADK catalysis. The detection of adenosine kinase by this method is fast, simple, reliable, sensitive and economical, and can replace the traditional method. Adenosine kinase activity assay.
【技术实现步骤摘要】
一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法
本专利技术属于酶活性检测领域，涉及一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法。
技术介绍
腺苷激酶(ADK；腺苷5’-磷酸转移酶，EC2.7.1.20)，由Kornberg于1951年在酵母细胞中首次分离得到。ADK属于核糖激酶家族，是哺乳动物组织中最丰富的核苷激酶之一。ADK作为嘌呤补救途径中的第一个酶，可催化三磷酸腺苷(ATP)的γ磷酸基团向腺苷转移，产生AMP(Adenosine+ATP→AMP+ADP)。ADK通过调节细胞内和细胞外腺苷浓度，能够有效地保护心脏和神经等组织。在糖尿病模型中，降低ADK的活性会抑制T-淋巴细胞的增生。ADK在促进细胞内甲基化方面也起着重要作用，敲除ADK(ADK-/-)的转基因小鼠中，由于ADK的缺乏会导致新生鼠患急性肝脂肪变性，并在出生后第8天死亡。然而，ADK在脑中的过度表达会导致癫痫频繁发生，频率为每小时四次，并且与野生型相比，ADK-/-小鼠睡眠时间更少。此外，ADK还可以催化其他核苷及其类似物的磷酸化，产生相应的单磷酸。目前有两种方法来测定ADK的酶活性：一种是多酶偶联法，另一种是...
【技术保护点】
1.一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，其特征在于：以ATP和腺苷为底物，溴麝香草酚蓝为指示剂，醋酸镁和甘氨酸‑氢氧化钠为缓冲液条件下，与含有腺苷激酶的待测液于614nm条件下检测吸光度。
【技术特征摘要】
1.一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，其特征在于：以ATP和腺苷为底物，溴麝香草酚蓝为指示剂，醋酸镁和甘氨酸-氢氧化钠为缓冲液条件下，与含有腺苷激酶的待测液于614nm条件下检测吸光度。2.根据权利要求1所述一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，其特征在于：所述溴麝香草酚蓝浓度为0.75×10-4～1.50×10-4g/mL。3.根据权利要求2所述一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，其特征在于：所述溴麝香草酚蓝浓度为1.00×10-4g/mL。4.根据权利要求1所述一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，其特征在于：所述腺苷浓度为0.1～0.01mM。5.根据权利要求1所述一种快速灵敏...
【专利技术属性】
技术研发人员：王叶菁，李瑜，何华伟，周海梦，赵萍，夏庆友，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50
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