一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法技术

本发明专利技术公开了一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，包括培养基的制备，且该培养基中含有青鲜素0.5～1份、龙舌兰提取物30～50份、羧甲基纤维素钠5～10份、三乙醇胺3～5份、水50～80份、PDA培养基400～500份；菌种培养；培养物脱水、菌种保存。本发明专利技术配制专用培养基用于蛹虫草菌种的培养、保存，培养基中的青鲜素、龙舌兰提取物配合使用可以抑制蛹虫草菌种的生长，从而延长其保存寿命，羧甲基纤维素钠能够很好的保水，使保存的蛹虫草菌种长期处于最佳状态，进一步延长了保存期。本发明专利技术操作简单、成本低，能够很好的保存蛹虫草菌种，经过本发明专利技术方法保存的蛹虫草菌种，保存期能达到4年以上，远远高于常规方法。

A method for long term preservation of cordycepin Cordyceps militaris

The invention discloses a method for long-term preservation of Cordyceps militaris strains with high cordycepin content, including preparation of culture medium, which contains 0.5-1 portion of cyanidin, 30-50 portion of Agave extract, 5-10 portion of sodium carboxymethyl cellulose, 3-5 portion of triethanolamine, 50-80 portion of water and 400-500 portion of PDA culture medium. Dehydration and preservation of bacteria. The special culture medium prepared by the invention is used for the cultivation and preservation of Cordyceps militaris strains. The combination of cyanidins and agave extracts in the culture medium can inhibit the growth of Cordyceps militaris strains, thereby prolong their preservation life. Sodium carboxymethyl cellulose can keep water well and keep the preserved Cordyceps militaris strains in the best state for a long time. The shelf life was further extended. The method has the advantages of simple operation, low cost and good preservation of Cordyceps militaris strains. The preservation period of the Cordyceps militaris strains preserved by the method can reach more than 4 years, which is much higher than that of the conventional method.

【技术实现步骤摘要】
一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法
本专利技术属于菌种保存
，具体涉及一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法。
技术介绍
蛹虫草又名北虫草、北冬虫夏草等，属于子囊菌门、肉座菌目、虫草菌科、虫草属真菌，是一种食药用虫草。蛹虫草富含虫草素、虫草酸及喷司他丁等具有抗癌、抗菌、抗疲劳及提高免疫等多种生物活性成分，其药用价值与冬虫夏草相似，有些成分甚至优于传统的冬虫夏草，因而已广泛作为冬虫夏草的替代品应用于药用及食用菌领域。随着人们对虫草产品的药用及保健等价值认识的不断深入，对蛹虫草资源及产品的需求也日益增加。近年来，由于过度人工采挖，导致蛹虫草野生资源严重匮乏；而在人工规模化生产过程中，也经常出现因菌种遗传背景不清而引起菌种退化和变异严重等现象，造成子实体畸形、产量减少及品质下降等问题，制约着虫草产业的发展与升级。微生物菌种保藏主要是通过延缓菌种的新陈代谢等，避免继代培养过程中的菌种变异和污染，甚至死亡等问题的发生，保障菌种具有正常及稳定的生长特性及活力。目前蛹虫草菌种保藏中存在的主要问题是：保藏周期较短(一般为3～6个月)，菌种活力低(随着保藏时间延长，子实体形成能力降低甚至无法形成子实体，易出现退化型菌株)。因此，很有必要开发出一种新的长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，以延长菌种保藏周期，提高菌种活力。
技术实现思路
本专利技术提供了一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，解决了现有技术中蛹虫草菌种保藏周期较短，菌种活力低的问题。本专利技术提供了一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，包括以下步骤：步骤1，培养基的制备步骤1.1，按重量份称取以下各组分：青鲜素0.5～1份、龙舌兰提取物30～50份、羧甲基纤维素钠5～10份、三乙醇胺3～5份、水50～80份、PDA培养基400～500份；步骤1.2，将步骤1.1中称取的青鲜素溶于步骤1.1称取的三乙醇胺中，得到青鲜素的三乙醇胺溶液；步骤1.3，将步骤1.1中称取的羧甲基纤维素钠溶于步骤1.1称取的水中，得到水凝胶；步骤1.4，将步骤1.1中称取的龙舌兰提取物、PDA培养基、步骤1.2中青鲜素的三乙醇胺溶液以及步骤1.3中的水凝胶混合均匀，得到蛹虫草菌种培养基；将蛹虫草菌种培养基高温灭菌后趁热分装于试管内，凝固成蛹虫草菌种斜面培养基；步骤2，菌种培养在无菌条件下，将蛹虫草菌种接种到步骤1.4中得到的蛹虫草菌种斜面培养基上，先暗培养3～5d，然后进行光培养10～15d，培养结束得到蛹虫草菌种培养物；步骤3，培养物脱水在无菌条件下，将蛹虫草菌种培养物脱水至体积为原来的60～70％，得到脱水蛹虫草菌种培养物；步骤4，菌种保存往装有脱水蛹虫草菌种培养物的试管中注入灭菌好的石蜡油，使石蜡油淹没脱水蛹虫草菌种培养物1cm以上，再用灭菌好的石蜡封口后置于于4℃下保存。优选的，所述龙舌兰提取物的制备方法如下：取干燥的龙舌兰研磨成粉，然后往龙舌兰粉中加入相当于龙舌兰粉重量10倍的乙醇溶液，于50℃下超声提取60min，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液浓缩至相对密度为1.2～1.3，即得到所述龙舌兰提取物。优选的，每升所述PDA培养基由以下组分组成：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g，余量为水。优选的，所述步骤2中，暗培养的培养温度为23～25℃。优选的，所述步骤2中，光培养的培养温度为23～25℃，光照强度为100～200lux。优选的，所述步骤3中，蛹虫草菌种培养物在-35～-20℃的无菌冷冻干燥机中脱水至体积为原来的50～60％。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术配制专用培养基用于蛹虫草菌种的培养、保存，培养基中的青鲜素、龙舌兰提取物配合使用可以抑制蛹虫草菌种的生长，从而延长其保存寿命，羧甲基纤维素钠能够很好的保水，使保存的蛹虫草菌种长期处于最佳状态，提高了菌种活性，同时也使蛹虫草菌种中虫草素含量基本不受影响，菌种保藏完毕后取出，可以迅速长出正常的菌丝体，进一步延长了保存期。本专利技术操作简单、成本低，能够很好的保存蛹虫草菌种，经过本专利技术方法保存的蛹虫草菌种，保存期能达到4年以上，远远高于常规方法。具体实施方式为了使本领域技术人员更好地理解本专利技术的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。下述各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。实施例1一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，包括以下步骤：步骤1，培养基的制备步骤1.1，按重量份称取以下各组分：青鲜素0.5份、龙舌兰提取物50份、羧甲基纤维素钠10份、三乙醇胺5份、水80份、PDA培养基400份；步骤1.2，将步骤1.1中称取的青鲜素溶于步骤1.1称取的三乙醇胺中，得到青鲜素的三乙醇胺溶液；步骤1.3，将步骤1.1中称取的羧甲基纤维素钠溶于步骤1.1称取的水中，得到水凝胶；步骤1.4，将步骤1.1中称取的龙舌兰提取物、PDA培养基、步骤1.2中青鲜素的三乙醇胺溶液以及步骤1.3中的水凝胶混合均匀，得到蛹虫草菌种培养基；将蛹虫草菌种培养基高温灭菌后趁热分装于试管内，凝固成蛹虫草菌种斜面培养基；步骤2，菌种培养在无菌条件下，将虫草素含量为1.12g/100g的蛹虫草菌种接种到步骤1.4中得到的蛹虫草菌种斜面培养基上，先在23～25℃下暗培养3d，然后在23～25℃、光照强度为200lux的条件下光培养15d，培养结束得到蛹虫草菌种培养物；步骤3，培养物脱水在无菌条件下，将蛹虫草菌种培养物在-20℃的无菌冷冻干燥机中脱水至体积为原来的60％，得到脱水蛹虫草菌种培养物；步骤4，菌种保存往装有脱水蛹虫草菌种培养物的试管中注入灭菌好的石蜡油，使石蜡油淹没脱水蛹虫草菌种培养物1cm以上，再用灭菌好的石蜡封口后置于于4℃下保存，保存时间为4年，保存完毕后，检测到蛹虫草菌种中虫草素的含量为1.08g/100g，与保存前相比，基本没有变化；保存4年后，将步骤4保存的脱水蛹虫草菌种培养物取出，无菌条件下移植到PDA培养基上，2天后即可萌发长出正常的菌丝体。实施例2一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，包括以下步骤：步骤1，培养基的制备步骤1.1，按重量份称取以下各组分：青鲜素0.8份、龙舌兰提取物40份、羧甲基纤维素钠8份、三乙醇胺4份、水60份、PDA培养基450份；步骤1.2，将步骤1.1中称取的青鲜素溶于步骤1.1称取的三乙醇胺中，得到青鲜素的三乙醇胺溶液；步骤1.3，将步骤1.1中称取的羧甲基纤维素钠溶于步骤1.1称取的水中，得到水凝胶；步骤1.4，将步骤1.1中称取的龙舌兰提取物、PDA培养基、步骤1.2中青鲜素的三乙醇胺溶液以及步骤1.3中的水凝胶混合均匀，得到蛹虫草菌种培养基；将蛹虫草菌种培养基高温灭菌后趁热分装于试管内，凝固成蛹虫草菌种斜面培养基；步骤2，菌种培养在无菌条件下，将虫草素含量为1.26g/100g的蛹虫草菌种接种到步骤1.4中得到的蛹虫草菌种斜面培养基上，先在23～25℃下暗培养5d，然后在23～25℃、光照强度为150lux的条件下光培养10d，培养结束得到蛹虫草菌种培养物；步骤3，培养物脱水在无菌条件下，将蛹虫草菌种培养物在-25℃的无菌冷冻干燥机中脱水至体积为原来的55％，得到脱水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，培养基的制备步骤1.1，按重量份称取以下各组分：青鲜素0.5～1份、龙舌兰提取物30～50份、羧甲基纤维素钠5～10份、三乙醇胺3～5份、水50～80份、PDA培养基400～500份；步骤1.2，将步骤1.1中称取的青鲜素溶于步骤1.1称取的三乙醇胺中，得到青鲜素的三乙醇胺溶液；步骤1.3，将步骤1.1中称取的羧甲基纤维素钠溶于步骤1.1称取的水中，得到水凝胶；步骤1.4，将步骤1.1中称取的龙舌兰提取物、PDA培养基、步骤1.2中青鲜素的三乙醇胺溶液以及步骤1.3中的水凝胶混合均匀，得到蛹虫草菌种培养基；将蛹虫草菌种培养基高温灭菌后趁热分装于试管内，凝固成蛹虫草菌种斜面培养基；步骤2，菌种培养在无菌条件下，将蛹虫草菌种接种到步骤1.4中得到的蛹虫草菌种斜面培养基上，先暗培养3～5d，然后光培养10～15d，培养结束得到蛹虫草菌种培养物；步骤3，培养物脱水在无菌条件下，将蛹虫草菌种培养物脱水至体积为原来的50～60％，得到脱水蛹虫草菌种培养物；步骤4，菌种保存往装有脱水蛹虫草菌种培养物的试管中注入灭菌好的石蜡油，使石蜡油淹没脱水蛹虫草菌种培养物1cm以上，再用灭菌好的石蜡封口后置于于4℃下保存。...

【技术特征摘要】
1.一种长期保存高虫草素蛹虫草菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，培养基的制备步骤1.1，按重量份称取以下各组分：青鲜素0.5～1份、龙舌兰提取物30～50份、羧甲基纤维素钠5～10份、三乙醇胺3～5份、水50～80份、PDA培养基400～500份；步骤1.2，将步骤1.1中称取的青鲜素溶于步骤1.1称取的三乙醇胺中，得到青鲜素的三乙醇胺溶液；步骤1.3，将步骤1.1中称取的羧甲基纤维素钠溶于步骤1.1称取的水中，得到水凝胶；步骤1.4，将步骤1.1中称取的龙舌兰提取物、PDA培养基、步骤1.2中青鲜素的三乙醇胺溶液以及步骤1.3中的水凝胶混合均匀，得到蛹虫草菌种培养基；将蛹虫草菌种培养基高温灭菌后趁热分装于试管内，凝固成蛹虫草菌种斜面培养基；步骤2，菌种培养在无菌条件下，将蛹虫草菌种接种到步骤1.4中得到的蛹虫草菌种斜面培养基上，先暗培养3～5d，然后光培养10～15d，培养结束得到蛹虫草菌种培养物；步骤3，培养物脱水在无菌条件下，将蛹虫草菌种培养物脱水至体积为原来的50～60％，得到脱水蛹虫草菌种培养物；步骤4，菌种保存往装有脱水蛹虫草菌种培养物的试管中注入灭...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓红，
申请(专利权)人：辽东学院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21