LTA4H作为指示肝内结节及早期预警肝癌的生物标志物制造技术

本发明专利技术涉及LTA4H作为指示肝内结节及早期预警肝癌的生物标志物。具体而言，本发明专利技术提供下述试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用：(1)与LTA4H特异性结合的试剂；(2)任选的与PLA2G6特异性结合的试剂；和(3)任选的与EPS8L2特异性结合的试剂。本文基于时序动态性和网络关联性分析找到了炎癌转化的关键临界阶段，为临床应用于肝炎患者早期肝癌诊断、是否处于肝炎向肝癌恶性转化的临界阶段和预防炎癌恶化转变提供了新的方向。

LTA4H as a biomarker for intrahepatic nodules and early warning of liver cancer

The present invention relates to LTA4H as a biomarker for intrahepatic nodules and early warning of liver cancer. Specifically, the invention provides the application of the following reagents in the preparation of reagent kits for diagnosing intrahepatic nodules of the target or whether the target is at the critical stage of malignant transformation from hepatitis to hepatocellular carcinoma: (1) reagents specifically bound to LTA4H; (2) reagents specifically bound to PLA2G6; and (3) reagents specifically bound to EPS8L2. Combined reagent. Based on the analysis of time series dynamics and network correlation, we found the critical stage of the transformation of inflammation and cancer, which provides a new direction for clinical application in the diagnosis of early hepatocellular carcinoma in patients with hepatitis, whether they are in the critical stage of malignant transformation from hepatitis to hepatocellular carcinoma, and to prevent the deterioration of inflammation and cancer.

【技术实现步骤摘要】
LTA4H作为指示肝内结节及早期预警肝癌的生物标志物
本专利技术涉及LTA4H作为指示肝内结节及早期预警肝癌的生物标志物。
技术介绍
肝癌作为人类生命威胁最大的恶性肿瘤之一，备受全球关注。根据全球癌症统计报告，肝癌已成为中国发病率最高的癌症，而肝炎病毒的肆虐使中国成为肝炎和肝癌发病重灾区。因此，如何有效预防肝炎向肝癌恶化成为国内研究者的重要议题之一。最近，已有研究表明，慢性炎症确实可诱发包括肝癌在内的多种癌症的发生。虽然研究者们已提出了不少关于炎症促癌机制的假说，但是慢性肝炎向肝癌恶性转化的机制仍未完全明确。因此，暂时还没有比较精准且可靠的生物标志物实现肝癌早期诊断。目前，主要的诊断方式有两种，一种是基于医学影像检测和医生经验对肝病进行临床诊断分期；另一种是基于组织活检，用少数较精准分子标志物对肝脏肿瘤进行病理分级。然而，这些诊断方法都有缺陷，一方面是病情已极度严重，肿瘤已生长足够大，才可被医学影像仪器分辨；另一方面，组织活检对患者造成创伤，不便于广泛应用。这些诊断缺陷严重影响了病情了解进而影响到治疗质量和效果。因此，本领域仍然急切需要能对慢性炎症向肝癌恶性转化〔内源性(原癌基因激活)和外源性(病毒感染)共同影响引发的慢性炎症向肝癌恶性转化〕进行早期预警的分子标志物和方法。
技术实现思路
本专利技术第一方面提供LTA4H和任选的PLA2G6以及任选的EPS8L2作为分子标志物在诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供LTA4H与PLA2G6作为分子标志物在诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供LTA4H与EPS8L2作为分子标志物在诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供PLA2G6、LTA4H与EPS8L2三者作为分子标志物在诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段中的应用。本专利技术第二方面提供与LTA4H特异性结合的试剂、任选的与PLA2G6特异性结合的试剂以及任选的与EPS8L2特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供与LTA4H特异性结合的试剂和与PLA2G6特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供与LTA4H特异性结合的试剂和与EPS8L2特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供与LTA4H特异性结合的试剂、与PLA2G6特异性结合的试剂以及与EPS8L2特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，所述试剂为抗体或其抗原结合片段。本专利技术第三方面提供一种检测试剂盒，其含有以LTA4H作为检测对象的试剂。在一个或多个实施方案中，所述以LTA4H作为检测对象的试剂包括LTA4H的特异性抗体。在一个或多个实施方案中，所述检测试剂盒中还含有以PLA2G6和/或EPS8L2作为检测对象的试剂。在一个或多个实施方案中，所述以PLA2G6和/或EPS8L2作为检测对象的试剂包括PLA2G6和/或EPS8L2的特异性抗体。在一个或多个实施方案中，所述检测试剂盒还含有采用免疫组化方法检测LTA4H所需的试剂。在一个或多个实施方案中，所述检测试剂盒还含有采用免疫组化方法检测PLA2G6和/或EPS8L2所需的试剂。本专利技术第四方面提供一种诊断对象是否存在肝内结节，或是否处于肝炎向肝癌恶性转化的临界阶段的方法，所述方法包括检测该对象肝脏组织内的LTA4H的表达量的步骤；其中，该表达量高于正常人群肝脏组织内的LTA4H表达量提示该患者存在肝内结节或正处于肝炎向肝癌恶性转化的临界阶段。在一个或多个实施方案中，所述方法还包括检测该对象肝脏组织内的PLA2G6和/或EPS8L2的表达量的步骤。在一个或多个实施方案中，所述肝内结节为高级别不典型增生结节。在一个或多个实施方案中，所述对象是肝炎患者。本专利技术第五方面提供LTA4H和任选的PLA2G6以及任选的EPS8L2作为分子标志物在制备诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段用的试剂和/或试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供LTA4H与PLA2G6作为分子标志物在制备诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段用的试剂和/或试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供LTA4H与EPS8L2作为分子标志物在制备诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段用的试剂和/或试剂盒中的应用。在一个或多个实施方案中，本专利技术提供PLA2G6、LTA4H与EPS8L2三者作为分子标志物在制备诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段用的试剂和/或试剂盒中的应用。附图说明图1：WHV/c-myc转基因小鼠和作为参照的wt-C57BL/6小鼠的肝脏蛋白质组检测和定量的流程图。图2：基于动态网络生物标志物检测肝炎向肝癌恶性转化的早期预警信号。图3：动态网络生物标志物及其相关的共表达分子在网络结构和表达变异方面的动态变化。图4：HE染色的肝组织切片图像。图5：动态网络生物标志物相关的功能网络(DNB-associatednetwork)在炎癌转化过程中的动态变化。A和B：分别统计了网络中与差异表达蛋白(DEP)或差异共表达蛋白对(DCE)重合的点或边进行统计，并使用超几何检验评估其重合显著性。C和D：一系列的网络图分别展示了在炎癌恶性转化过程中(即3到7月龄之间)转基因小鼠的DNB相关功能网络所涉及的差异表达蛋白(DEP)和差异共表达蛋白对(DCE)的动态变化。图6：PLA2G6、LTA4H及EPS8L2在肝炎向肝癌恶性转化过程中各时间点(阶段)的表达量变化情况。图7：LTA4H应用于临床病人的诊断情况。图8：PLA2G6应用于临床病人的诊断情况。图9：EPS8L2应用于临床病人的诊断情况。具体实施方式应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成优选的技术方案。为了尽可能模仿内源性和外源性共同影响引发的炎癌恶性转化的过程，本文使用对c-myc转基因小鼠在土拨鼠肝炎病毒(Woodchuckhepatitisvirus，WHV)感染下发生肝炎向肝癌病变的动物模型。先前的研究(EtiembleJ、DegottC、RenardCA等，Liver-specificexpressionandhighoncogenicefficiencyofac-myctransgeneactivatedbywoodchuckhepatitisvirusinsertion，Oncogene1994，9:727-737)表明，在肝癌发生发展过程中，WHV/c-myc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.下述试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用：(1)与LTA4H特异性结合的试剂；(2)任选的与PLA2G6特异性结合的试剂；和(3)任选的与EPS8L2特异性结合的试剂。

【技术特征摘要】
2017.04.20 CN 20171026219461.下述试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用：(1)与LTA4H特异性结合的试剂；(2)任选的与PLA2G6特异性结合的试剂；和(3)任选的与EPS8L2特异性结合的试剂。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为与LTA4H特异性结合的试剂和与PLA2G6特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用；或所述应用为与LTA4H特异性结合的试剂和与EPS8L2特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用；或所述应用为与LTA4H特异性结合的试剂、与PLA2G6特异性结合的试剂以及与EPS8L2特异性结合的试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用。3.如权利要求1－2中任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂为抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，或抗体的抗原结合片段。4.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒含有：(1)以LTA4H作为检测对象的试剂；(2)任选的以PLA2G6作为检测对象的试剂；和(3)任选的以EPS8L2作为检测对象的试剂。5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒含有：(a)以LTA4H作为检测对象的试剂和以PLA2G6作为检测对象的试剂；(b)以LTA4H作为检测对象的试剂和以EPS8L2作为检测对象的试剂；或(c)以LT...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红阳，陈磊，陈洛南，曾嵘，杨应成，李辰，李美仪，刘伟鑫，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院，
类型：发明
国别省市：上海,31