ER β的中药小分子抑制剂制造技术

本发明专利技术描述雌激素受体β(ERβ)的中药小分子抑制剂及其在治疗或者预防ERβ介导的疾病中的应用。

Small molecule inhibitors of ER beta

The present invention describes a small molecule inhibitor of estrogen receptor beta (ERbet) in Chinese medicine and its application in treating or preventing ERbeta-mediated diseases.

【技术实现步骤摘要】
ERβ的中药小分子抑制剂
本专利技术描述雌激素受体受体β(ERβ)的中药小分子抑制剂及其在治疗或者预防ERβ介导的疾病中的应用。
技术介绍
雌激素受体属于核受体超家族，目前已发现两种亚型——雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)。ERα主要分布于子宫、暖巢、乳腺、骨组织、肝脏以及脂肪等组织器官，在调节女性的生殖功能、代谢调控、维持骨密度等方面起到重要作用。ERβ主要分布于泌尿生殖器(前列腺上皮细胞和膀胱)、结肠、中枢神经系统以及免疫系统等，在乳腺、前列腺和结肠细胞中有抗细胞增殖的作用。因此，雌激素受体调节剂，包括雌激素受体激动剂和抑制剂对不同疾病或状况都具有重要的意义。本专利技术主要关注雌激素β受体抑制剂在疾病中的应用。研究表明，阻断ERβ受体能明显提高早期血管形成、中期的软骨内骨化和晚期的机械力学性能等骨折修复能力。此外，也有研究推测雌激素与ERβ结合后增强ERβ的表达，降低OPG的合成和表达，增加RANNKL的合成和表达，减少ALP的分泌，进而抑制新骨的生成。因此ERβ抑制剂是治疗骨质酥松、骨关节炎等相关疾病的潜在药物。ERβ与乳腺癌的发生和发展十分密切。研究表明雌二醇可以激活ERβ与MAPK中的关键酶促进肿瘤的发生和转移。而三苯氧胺和环磷酰胺可以拮抗并下调ERβ的表达，发挥抗肿瘤作用，促进凋亡的发生。因此ERβ抑制剂具有治疗乳腺癌的潜力。此外，在ERα阴性乳腺癌细胞中，抑制ERβ的表达可以降低耐药性。ERβ与女性经期综合征肝气郁证有着密切的联系，ERβ表达异常，比如超过临界值会导致抑郁样行为出现，因此ERβ抑制剂也是治疗女性经期综合征肝气郁证的潜在药物之一。肺癌尤其是非小细胞性肺癌(NSCLC)的致死率极高。研究表明，高表达ERβ可显著提高NSCLC细胞的增值、克隆形成和迁移能力，也能显著提高NSCLC在裸鼠体内的成瘤能力。由此得出ERβ在NSCLC的发生发展中至关重要，ERβ抑制剂是治疗肺癌的潜在药物。流行病学表明，女性的膀胱癌发病率明显低于男性，这可能与雌激素和雌激素受体有关。通过研究发现抑制ERβ的表达可以抑制膀胱癌细胞的生长和转移。ERβ抑制剂可以减轻膀胱癌的症状和致死率。因此ERβ抑制剂具有治疗膀胱癌的可能。中药是药物开发的重要来源之一，中药单体的研究更是成为了现在药物研究的热门，比如青蒿素、丹参酮、麻黄等中药单体都取得了重大成就。因此中药单体药用价值的发现具有十分重要的意义。鞣花酸是广泛存在于各种软果、坚果等植物组织中的一种天然多酚组分。鞣花酸表现出对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用，特别是对结肠癌、食管癌、肝癌、肺癌、舌及皮肤肿瘤等有很好的抑制作用。羽扇豆醇是一种可从草莓、芒果等多种果蔬以及中草药等植物中提取的五环三砧类化合物，具有抗炎症、抗氧化、促进创面愈合等药理作用，且在胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤等肿瘤中显示出抗癌活性，在临床上用于白血病、肝癌、结肠癌、胰腺癌等疾病的治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供能有效抑制ERβ活性的中药小分子化合物。上述中药小分子包括：鞣花酸(I)和羽扇豆醇(II)。其结构如下：上述中药小分子均能够有效抑制ERβ活性，其抑制活性分别为：鞣花酸IC50＝32.13μM，羽扇豆醇IC50＝33.94μM。本专利技术的又一个目的是提供所述中药小分子抑制剂在在治疗或者预防ERβ介导的疾病中的用途。实现上述用途的的药用组合，包含治疗有效量的中药小分子抑制剂任意一种或几种和任何的药学可接受的赋形剂。上述药学可接受的赋形剂可以使药物制剂领域中任何常规的赋形剂，特定赋形剂的选择将拒绝的用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态，用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润集、崩解剂等。附图说明附图1鞣花酸IC50曲线附图2羽扇豆醇IC50曲线具体实施方式为了使本领域的技术人员更好的理解本专利技术的技术方案，下面以实施例进一步说明本专利技术。其中，本专利技术待研究中药小分子购自成都德斯特生物技术有限公司。具体信息如下：鞣花酸纯度为98.8％，分子式为C14H6O8，分子量为302.19，CAS号为476-66-4；羽扇豆醇纯度为98.4％，分子式为C30H50O，分子量为426.72，CAS为545-47-1。1.材料与消耗品2.化合物溶液制备与保存DMSO储存液，3个月以内室温保存，三个月以上-20℃保存。3.实验步骤3.1细胞悬浮液制备与细胞接种3.1.1所有细胞以ATCC建议的方式培养。HEK293T细胞采用指数增长期细胞。3.1.2移除烧瓶内培养基。3.1.3用PBS冲洗细胞。3.1.4在烧瓶中加入TrypLE溶液使细胞分离，用完全培养液清洗细胞。3.1.5离心并采用PBS清洗细胞，重复两次除去酚红，最然后使其悬浮于适当浓度的培养基中。3.1.6取存活率大于90％的细胞进行下一步实验。3.1.7将5.5*106HEK293T细胞传代至100mm的培养皿中培养，在37℃，5％CO2的环境下培养16h。3.2细胞转染3.2.1取Trans-IT转染试剂放至室温3.2.2充分混合Trans-IT转染试剂与Opti-MEM试剂，注意试剂不可沾到试管侧面。颠倒混匀，然后在室温下培养5min。随后在混合液中加入DNA，颠倒混匀并在室温下培养20min。所有质粒浓度为0.5mg/ml。对于RORgt，分别加入8.4ugGAL4-RORgt质粒和1.26ugpGL4.35荧光素酶质粒。3.2.3将混合液加入步骤3.1准备的100mm培养皿中，37℃，5％CO2的环境下培养5-6h。3.3化合物处理3.3.1用Echo550将25nl化合物稀释液并放置于384孔板中。3.3.2在步骤3.3.1准备的384孔板中培养步骤3.2得到的HEK293T细胞，培养至每孔中有15,000个细胞。采用无酚红DMEM以及含5％活性炭/葡聚糖处理的FBS的培养液。37℃，5％CO2的环境下培养16-20h。3.4读取发光值3.4.1Steady-GloTM萤光素-酶检测试剂放至室温。3.4.2步骤3.3得到的384孔板溶液放置室温。3.4.3将25ulSteady-GloTM萤光素-酶检测试剂加入到384孔板中。用平板振动器在无光的条件下，振荡培养5min。3.4.4使用Envision2104读数器读取发光值。4.数据分析4.1其中，RLUcmpd为测量发光值，性对照物平均发光值，为阴性对照物平均发光值。4.2计算IC50和绘制效应-浓度曲线采用非线性回归拟合抑制率与化合物浓度对数值从而得到IC50值。Y＝最低值+(最高值-最低值)/(1+10*((LogIC50-X)*斜率))X：化合物浓度log值Y：抑制率4.3QC：Zfactor＞0.5；S/B＞3。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.中药小分子化合物在制备用于雌激素受体β(ERβ)活性的药物方面的应用，所述化合物：鞣花酸(I)和羽扇豆醇(II)具有如下结构：

【技术特征摘要】
1.中药小分子化合物在制备用于雌激素受体β(ERβ)活性的药物方面的应用，所述化合物：鞣花酸(I)和羽扇豆醇(II)具有如下结构：2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述化合物以及所述化合物药学上的可用盐作为用于治疗或预防ERβ受体介导的相关疾病或病症的药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：林建平，梁璐，赵骁勇，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津,12