The invention provides a base editing tool and its application. The base editing tool is characterized in that the GCN4 D10A formed by linking multiple copies of GCN4 with D10A Cas9, and the scFv APOBEC UGI formed by linking cytosine deaminase APOBEC and uracil glycosylase inhibitor UGI to scFv or cytosine deaminase APOBEC and uracil glycosylase inhibitor UGI are used to And to prevent the thermal stability domain GB1 from being attached to scFv to form the scFv_APOBEC_UGI_GB1 carrier. And targeted sgRNA. Compared with the commonly used base editing tool, the invention significantly increases the window of base editing, thereby expanding the application scope of base editing in genome.
【技术实现步骤摘要】
一种碱基编辑工具及其应用
本专利技术涉及一种新型碱基编辑工具，属于基因编辑领域，更具体地说涉及基于CRISPR系统与碱基脱氨酶结合进行特异性碱基替换的工具。
技术介绍
基因编辑是通过在DNA上特定位点引入序列改变，达到基因的敲除或者外源DNA片段插入的技术手段。目前可编程的核酸酶主要包括三种，早期的锌指核糖核酸酶(ZFN)系统、类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)系统和现在普遍使用的CRISPR-Cas9系统1。CRISPR-Cas9基因编辑系统操作简单，仅需改变sgRNA的靶向序列就能在新的靶向位点上进行基因编辑，因此被迅速广泛应用于基因功能研究，细胞或动物水平的疾病造模以及基因治疗2-7。在基因编辑过程中，尽管CRISPR-Cas9能基于同源重组(HDR)机制在供体模板DNA的介导下引入碱基突变或者片段的插入，进而获得感兴趣的突变或者达到基因修复的目的。但CRISPR-Cas9也会通过非同源末端连接(NHEJ)引入不可控的插入或缺失突变(indels)。两种修复机制之间的竞争也导致同源重组效率不高。为了提高碱基突变的效率，一种通过将胞嘧啶脱氨酶融合在dCa...
【技术保护点】
1.一种碱基编辑工具，其特征在于，包括：多拷贝的GCN4与D10A‑Cas9连接形成的GCN4‑D10A载体；胞嘧啶脱氨酶APOBEC和尿嘧啶糖基化酶抑制物UGI连于单链抗体scFv形成的scFv‑APOBEC‑UGI载体或胞嘧啶脱氨酶APOBEC和尿嘧啶糖基化酶抑制物UGI以及防止多聚化的热稳定性结构域GB1连于单链抗体scFv形成的scFv‑APOBEC‑UGI‑GB1载体。
【技术特征摘要】
1.一种碱基编辑工具，其特征在于，包括：多拷贝的GCN4与D10A-Cas9连接形成的GCN4-D10A载体；胞嘧啶脱氨酶APOBEC和尿嘧啶糖基化酶抑制物UGI连于单链抗体scFv形成的scFv-APOBEC-UGI载体或胞嘧啶脱氨酶APOBEC和尿嘧啶糖基化酶抑制物UGI以及防止多聚化的热稳定性结构域GB1连于单链抗体scFv形成的scFv-APOBEC-UGI-GB1载体。2.如权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于，所述的碱基编辑工具还包括sgRNA载体。3.如权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于，所述的碱基编辑工具还包括靶向特异位点的sgRNA。4.如权利要求1所述的碱基编辑工具，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯松杰，江雯，黄行许，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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