一种乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体及其编码基因和应用，属于病毒技术领域。乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体在原始NS1的基础上删除C端两个强疏水区，得到删除C端63个氨基酸的截短突变体NS1△63基因，克隆至原核表达载体pET‑28a(+)，获得重组表达载体pET28a‑NS1△63，转化大肠杆菌，IPTG诱导，NS1△63在大肠杆菌中能够高效且稳定表达。大肠杆菌表达的NS1△63蛋白纯化和免疫小鼠，ELISA检测免疫小鼠NS1抗血清效价达到1:12150。免疫小鼠的保护力试验表明NS1△63有保护活性。所述NS1△63蛋白可为后期的病毒疫苗及诊断试剂盒的研制奠定基础。

Truncated mutant of Japanese encephalitis virus non structural protein NS1 and its coding gene and Application

The invention relates to a truncated mutant of non-structural protein NS1 of Japanese encephalitis virus and its coding gene and application, belonging to the field of virus technology. The NS1 truncated mutant of Japanese encephalitis virus deleted two strong hydrophobic regions at the C-terminal from the original NS1. The truncated NS1 63 gene deleted 63 amino acids at the C-terminal was obtained and cloned into the prokaryotic expression vector pET28a NS1 63. The recombinant expression vector pET28a NS1 63 was transformed into E.coli, induced by IPTG and NS1 63 (+). It can be expressed efficiently and stably in E. coli. The antiserum titer of NS1 was 1:12150 by ELISA. The protective test of immunized mice showed that NS1 delta 63 had protective activity. The NS1 delta 63 protein can lay a foundation for the development of late viral vaccines and diagnostic kits.

【技术实现步骤摘要】
一种乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体及其编码基因和应用
本专利技术属于病毒
，具体涉及一种乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体及其编码基因和应用。
技术介绍
乙型脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus，JEV)所引起的疾病称为乙型脑炎(简称乙脑)，乙脑是严重威胁人畜健康的一种蚊媒性人兽共患传染病。猪是JEV在自然界最重要的贮存和增殖宿主，JEV感染可引起仔猪脑炎和种猪繁殖障碍，给养猪业造成巨大经济损失。我国是乙脑流行的高发地区，这与我国地域辽阔，各地养猪普遍，人猪关系密切，以及水稻种植面积大，广泛分布有三带喙库蚊等乙脑传播媒介有关。JEV属于黄病毒科(Flaviviradae)黄病毒属(Flavusivir)，其基因组为单股正链RNA，全长为10976个核苷酸，其中5′和3′端为非编码区，二者之间为JEVRNA编码区，形成一个开放阅读框(ORF)，编码全长为3432个氨基酸的多蛋白前体，该前体蛋白在蛋白酶的作用下被切割为3个结构蛋白：核心蛋白(C)、前膜蛋白(prM)、囊膜蛋白(E)和7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体，其特征在于，所述非结构蛋白NS1截短突变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体，其特征在于，所述非结构蛋白NS1截短突变体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.1所示。2.一种权利要求1所述乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1截短突变体的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示。3.一种用于扩增权利要求2所述编码基因的引物，其特征在于，包括正向引物NS1-F和反向引物NS1△63-R，所述正向引物NS1-F的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.3所示；反向引物NS1△63-R的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.4所示。4.一种扩增权利要求2所述编码基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取乙型脑炎病毒总RNA，逆转录，得到乙型脑炎病毒的cDNA；(2)以所述乙型脑炎病毒的cDNA为模板，用权利要求3所述引物进行PCR扩增，得到编码基因。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系：逆转录产物cDNA0.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令保，徐晶，郭韫丽，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西,36