组合治疗制造技术

人临床使用嵌合脊髓灰质炎病毒构建体已表现出优异的抗肿瘤效果。与免疫检查点抑制剂的组合增加了抗肿瘤效果。对组合治疗敏感的不同类型的肿瘤包括但不限于黑素肿瘤、胶质母细胞肿瘤、肾细胞癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、成神经管细胞肿瘤和结肠直肠癌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组合治疗本专利技术是利用美国政府提供的资金而完成的。根据来自美国国立卫生研究院R01CA87537，P50NS20023，P50CA190991，R01CA124756和R01CA140510的拨款条款，美国政府保留一定的权利。
本专利技术涉及抗肿瘤治疗领域。具体地，其涉及溶瘤病毒抗肿瘤治疗。
技术介绍
PVS-RIPO是溶瘤脊髓灰质炎病毒(PV)重组体。它由含有人鼻病毒2型(HRV2)的异质内部核糖体进入位点(IRES)的活减毒1型(Sabin，萨宾)PV疫苗组成。IRES是一种顺式作用遗传因子，其位于PV基因组的5′非翻译区，介导病毒、m7G-帽独立的翻译。该病毒在人体内表现出令人兴奋的疗效迹象。尽管如此，本领域仍然需要确定和开发更有效且对更多人有效、特别是对于患有脑肿瘤的患者有效的抗癌治疗。
技术实现思路
根据本专利技术的一个方面，提供了一种治疗患者肿瘤的方法。向患者施用嵌合脊髓灰质炎病毒构建体。该构建体在所述脊髓灰质炎病毒的四叶草和所述脊髓灰质炎病毒的开放阅读框之间的所述脊髓灰质炎病毒的5′非翻译区中包含具有人鼻病毒2(HRV2)内部核糖体进入位点(IRES)的脊髓灰质炎病毒萨宾I型菌株。免疫检查点抑制剂也可以在同一时间或约30天内向患者施用。根据本专利技术的另一方面，提供了一种用于治疗肿瘤的试剂盒。该试剂盒包含：嵌合脊髓灰质炎病毒构建体，所述构建体在所述脊髓灰质炎病毒的四叶草和所述脊髓灰质炎病毒的开放阅读框之间的所述脊髓灰质炎病毒的5′非翻译区中包含具有人鼻病毒2(HRV2)内部核糖体进入位点(IRES)的脊髓灰质炎病毒萨宾I型菌株；和免疫检查点抑制剂。根据本专利技术的另一方面，提供了嵌合脊髓灰质炎病毒构建体和免疫检查点抑制剂的组合用作药物或用于治疗肿瘤，其中，所述嵌合脊髓灰质炎病毒构建体在所述脊髓灰质炎病毒的四叶草和所述脊髓灰质炎病毒的开放阅读框之间的所述脊髓灰质炎病毒的5′非翻译区中包含具有人鼻病毒2(HRV2)内部核糖体进入位点(IRES)的脊髓灰质炎病毒萨宾I型菌株；和免疫检查点抑制剂。本领域技术人员在阅读说明书后显而易见的这些和其它方面为本领域提供了用于治疗癌症的新治疗方案。附图说明图1描绘了实验方式。图2显示出使用了代表乳腺癌、黑素瘤和前列腺癌的四种不同肿瘤细胞系的结果。将DC接种在培养皿中。将来自癌细胞裂解物的上清液加入到DC培养物中并温育。然后去除上清液并洗涤DC。将DNA酶I处理的外周血单核细胞(PBMC)在37℃下温育。收获非贴壁细胞，并在响应细胞与刺激物DC比率为10∶1和在CTL刺激培养基中存在IL-7的条件下，用装载有脊髓灰质炎病毒诱导的肿瘤裂解物的DC刺激非贴壁细胞。在第12-14天收获T细胞，计数并在铕释放CTL测定中用作效应子T细胞。使用转染有相关和不相关肿瘤抗原编码mRNA的自体DC作为靶标对照。对于DC靶标对照，收获mRNA电穿孔的靶标细胞，洗涤以除去所有培养基的示踪剂并用铕(Eu)标记。可选地，用Eu标记原始靶标细胞(Sum149，MDAMB231，LNCaP或DM6)。将不同E∶T比率的一万个铕标记的靶标(T)和效应子细胞(E)的系列稀释液在96孔V底板中温育。将平板在37℃下离心3分钟并在37℃下温育。收获50μl上清液并加入到96孔平底板的150μl增强溶液中，使用VICTOR3多标记计数器(Perkin-Elmer)通过时间分辨荧光测量铕释放。使用下式确定具体的细胞毒活性：％特异性释放＝[(实验释放-自发释放)/(总释放-自发释放)]×100。靶标细胞的自发释放小于清净剂总释放的25％。通过在不含T细胞的培养基中温育靶标细胞以确定靶标细胞的自发释放。所有测定一式三份进行，条代表平均％裂解，误差条代表SEM。图3显示了使用各种治疗(包括类似于本专利技术的组合的脊髓灰质炎病毒和检查点抑制剂治疗)在C57816小鼠中使用CT2A神经胶质瘤的小鼠肿瘤模型的体内测试结果；小鼠和CT2A细胞均表达人脊髓灰质炎病毒受体CD155。结果(随着时间推移的肿瘤体积)以及下列实验处理显示在上图中：组I(蓝色)：DMEM(控制病毒的载体)+IgG(控制抗PD1)；组II(灰色)：单次瘤内注射PVSRIPO+IgG；组III(橙色)：单次瘤内注射DMEM+抗PD1；第IV组(金色)：单次瘤内注射PVSRIPO(“mRIPO”)+抗PD1。通过腹膜内注射分3次(第3，6，9天)给予抗PD1。三个下图显示了治疗组II-IV中的个体小鼠(每个系为不同的小鼠)的肿瘤响应(随着时间的肿瘤体积)。具体实施方式本专利技术人开发了一种组合治疗方案，其中，向人施用病毒构建体和免疫检查点抑制剂。由于脊髓灰质炎病毒是潜在的病原体，因此，必须采取额外的预防措施以确保不会将致病因子引入受试者。使用良好的制造程序和纯化，制备了足够纯的制剂以允许引入人中。可以使用任何向肿瘤直接施用病毒制剂的技术。直接施用不依靠血脉管系统进入肿瘤。制剂可以涂在肿瘤表面上，注射到肿瘤中，在手术过程中滴入肿瘤位置内或上，通过导管输液到肿瘤中等。可以使用的一种特殊技术是对流增强的递送。根据本专利技术可以使用的免疫检查点抑制剂是任何破坏细胞毒性T细胞和肿瘤细胞的抑制性相互作用的抑制剂。这些包括但不限于抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗LAG-3抗体和/或抗TIM-3抗体。美国批准的检查点抑制剂包括易普米单抗(ipimilumab)、潘利珠单抗(pembrolizumab)和尼伏单抗(nivolumab)。抑制剂不需要是抗体，而可以是小分子或其它聚合物。如果抑制剂是抗体，则它可以是多克隆、单克隆、片段、单链或其它抗体变体构建体。抑制剂可以靶向本领域已知的任何免疫检查点，包括但不限于CTLA-4，PDL1，PDL2，PD1，B7-H3，B7-H4，BTLA，HVEM，TIM3，GAL9，LAG3，VISTA，KIR，2B4，CD160，CGEN-15049，CHK1，CHK2，A2aR和B-7家族的配体。可以使用针对单个靶免疫检查点的抑制剂或针对不同免疫检查点的不同抑制剂的组合。此外，CSF-1R阻断剂可以组合使用或作为免疫检查点抑制剂的替代物，以确保有效消除远处转移和复发性肿瘤的有效性和持续免疫力的产生。CSF-1R特异性抗体或者抑制或阻断CSF-1R的药物可用于此目的，包括但不限于伊马珠单抗(imactuzumab)和AMG820。免疫检查点抑制剂可以与脊髓灰质炎病毒同时施用、在其之前施用或在其之后施用。通常这两种试剂会在彼此间30天、28天、21天、14天、7天、4天、2天或1天内施用。所述试剂可以连续地重复给用，或者以第一试剂和第二试剂循环地重复给用。在检查点抑制剂之前施用疫苗可能是有利的，但不是必需的。但是也可以使用相反的顺序。通过病毒构建体启动细胞毒性T淋巴细胞应答可能需要约5天至约14天。检验点抑制剂的施用可有利地在启动期期间或之后开始。免疫检查点抑制剂可以通过本领域已知的用于特定抑制剂的任何适当手段施用。这些包括静脉内、口服、腹膜内、舌下、鞘内、腔内、肌肉内和皮下。任选地，免疫检查点抑制剂可以与脊髓灰质炎病毒试剂组合施用。可以治疗任何人肿瘤，包括小儿和成人肿瘤。肿瘤可以在任何器官中，例如脑、前列腺、乳房、肺、结肠和直本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗患者肿瘤的方法，其包括：向所述患者施用嵌合脊髓灰质炎病毒构建体，所述构建体在所述脊髓灰质炎病毒的四叶草和所述脊髓灰质炎病毒的开放阅读框之间的所述脊髓灰质炎病毒的5′非翻译区中包含具有人鼻病毒2(HRV2)内部核糖体进入位点(IRES)的脊髓灰质炎病毒萨宾I型菌株；以及向所述患者施用免疫检查点抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.15 US 62/242,123;2016.07.13 US 62/361,7251.一种治疗患者肿瘤的方法，其包括：向所述患者施用嵌合脊髓灰质炎病毒构建体，所述构建体在所述脊髓灰质炎病毒的四叶草和所述脊髓灰质炎病毒的开放阅读框之间的所述脊髓灰质炎病毒的5′非翻译区中包含具有人鼻病毒2(HRV2)内部核糖体进入位点(IRES)的脊髓灰质炎病毒萨宾I型菌株；以及向所述患者施用免疫检查点抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是胶质母细胞肿瘤。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是星型细胞瘤或少突神经胶质肿瘤。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是星型少突神经胶质肿瘤。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是肾细胞癌。6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是前列腺肿瘤。7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是膀胱肿瘤。8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是食管肿瘤和/或胃肿瘤。9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是肝肿瘤或胆囊肿瘤。12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是乳腺肿瘤。13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是成神经管细胞瘤。14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是肺肿瘤。15.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是头颈部肿瘤。16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是黑素瘤。17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤是肉瘤。18.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤表达NECL5(Nectin样蛋白5)。19.根据权利要求1所述的方法，其中，通过脑内输液与对流增强递送而施用所述嵌合脊髓灰质炎病...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·D·比格奈尔，M·格罗米尔，S·奈尔，V·查德拉莫汉，
申请(专利权)人：杜克大学，
类型：发明
国别省市：美国,US