鸡传染性支气管炎病毒5b ELISA抗体检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种鸡传染性支气管炎病毒5b ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括由重组表达的IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板，此外还含有稀释的IgG酶标抗体溶液、封闭液、洗涤液、样品稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。本发明专利技术以非结构蛋白5b作为包被抗原，成本低。本试剂盒的使用具有方便快捷、敏感性高、特异性好等优点，为IBV抗体监测、流行病学调查以及将来对IBV的疾病净化提供了一种新的有效的检测手段。

【技术实现步骤摘要】
鸡传染性支气管炎病毒5bELISA抗体检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及以鸡传染性支气管炎病毒5b蛋白为包被抗原的ELISA抗体检测试剂盒及其应用，属于生物

技术介绍
传支冠状病毒(Infectiousbronchitiscoronavirus,IBV)：传染性支气管炎病毒IBV是由套式病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属γ冠状病毒亚属IBV引起的急性高度接触性呼吸道疾病，主要以张口呼吸，气管啰音，咳嗽，腺胃肿大、出血，“花斑肾”为特征。IBV是不分节的单股正链RNA病毒，全长约27.6kb，不连续转录机制，含有十个明显的开放阅读框ORF,5’1a-1b-s-3a-3b-E-M-5a-5b-N-3’。编码4种结构蛋白S、N、M、E和15种非结构蛋白nsp2-nsp16以及4种附属蛋白3a、3b、5a、5b。IBV感染细胞后,在早期RNA聚合酶作用下转录出负链RNA,在晚期RNA聚合酶作用下以不连续转录机制从负链RNA转录出6种亚基因组mRNA(l-6)。这些mRNA具有共同的3’末端,形成套式结构。其中mRNA2、mRNA4和mRNA6分别编码IBV三个主要结构蛋白:纤突蛋白(S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板。

【技术特征摘要】
1.一种鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述的IBV非结构蛋白5b其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述的IBV非结构蛋白5b是通过重组表达产生的。4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，IBV非结构蛋白5b重组表达的方法如下：S1.RT-PCR扩增IBV5b基因；S2.将步骤S1所得基因整合到质粒载体中，获得重组质粒；S3.将步骤S2所构建的重组质粒转化到宿主菌中并诱导表达，获得菌液；S4.筛选携带IBV5b基因的重组菌，在IPTG诱导下大量表达与HIS融合的5b重组蛋白；S5.利用HIS标签镍柱亲和层析柱纯化，获得提纯后的IBV5b重组蛋白。5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，步骤S1中，扩增IBV5b基因的引物对如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；步骤S2中，所述的质粒载体为pET-32a；步骤S3中，所述的宿主菌为大肠杆菌。6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，还包括：(1)酶标试剂；(2)封闭液；(3)洗涤液；(4)稀释液；(5)阳性对照样品；(6)阴性对照样品；(7)显色液；(8)终止液。7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述的酶标试剂为辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG抗体；所述的洗涤液为含0.01％～0.1％Tween-20的PBS；优选地，为含0.05％Tween-20的PBS；所述的封闭液为含BSA或脱脂奶粉的PBS；优选地，为含5％脱脂奶粉的PBS；所述的稀释液为含BSA、脱脂奶粉的PBST；优选地，为含5％脱脂奶粉的PBST；所述的阳性对照样品为抗IBV5b鸡...

【专利技术属性】
技术研发人员：任涛，戴旭，吴耀棠，游人荣，林秋燕，廖明，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44