一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法及其专用试剂盒，该方法包括：1)提取杂交鹅掌楸叶片DNA；2)进行PCR检测；3)用引物18.2能特异性扩增出400bp的产物的母本为中国鹅掌楸，能特异性扩增出382bp的产物母本为北美鹅掌楸，再用引物700对中国鹅掌楸的进行PCR扩增，能特异性扩增出700bp产物的母本为中国鹅掌楸西部种源，能特异扩增出242bp产物的母本则为中国鹅掌楸东部种源；对北美鹅掌楸的用引物700进行PCR扩增，均特异获得700bp的产物。本发明专利技术可对幼苗阶段的杂交鹅掌楸天然林进行有效鉴定，具有速度快，效率高，结果准确，重复性与稳定性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法
本专利技术属于树种鉴定
，具体涉及一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法。
技术介绍
鹅掌楸属(LiriodendronL.)是木兰科(Magnoliaceae)植物，属古老属种之一。现包括三个种：中国鹅掌楸(Liriodendronchinense(Hemsl.)Sarg.)，北美鹅掌楸(LiriodendrontulipiferaLinn.)以及两者杂交种杂交鹅掌楸Liriodendronchinense×tulipifera。鹅掌楸属植物是研究植物进化历史进程的理想材料，具有重要的研究意义。中国鹅掌楸树干通直，可用作木材，马褂形三裂叶片，具有较高的观赏价值属于国家二级珍稀濒危保护植物。北美鹅掌楸材质优良，淡黄褐色，纹理密致美观，切削性光滑，易施工，为船舱，火车内部装修及室内高级家具用材，为美国重要用材树种之一。杂交鹅掌楸具杂交优势，抗逆性与生长特性均明显优于中国种和美国种。但由于鹅掌楸属植物自然授粉不良，发芽率低，现在得到杂交种的方式主要为人工授粉或嫁接繁殖。现有的方法都相对来说比较繁杂，人们一直在寻找更加方便有效的方法。传统的杂交鹅掌楸亲缘关本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取后代树种的叶片DNA；2)进行PCR检测；3)用引物18.2能特异性扩增出400bp的产物的母本为中国鹅掌楸，能特异性扩增出382bp的产物母本为北美鹅掌楸；4)再用引物700对已鉴别为母本为中国鹅掌楸的进行PCR扩增，能特异性扩增出700bp产物的母本为中国鹅掌楸西部种源，能特异扩增出242bp产物的母本则为中国鹅掌楸东部种源；对已鉴别为母本为北美鹅掌楸的用引物700进行PCR扩增，均特异获得700bp的产物。

【技术特征摘要】
2018.05.23 CN 20181049890201.一种杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取后代树种的叶片DNA；2)进行PCR检测；3)用引物18.2能特异性扩增出400bp的产物的母本为中国鹅掌楸，能特异性扩增出382bp的产物母本为北美鹅掌楸；4)再用引物700对已鉴别为母本为中国鹅掌楸的进行PCR扩增，能特异性扩增出700bp产物的母本为中国鹅掌楸西部种源，能特异扩增出242bp产物的母本则为中国鹅掌楸东部种源；对已鉴别为母本为北美鹅掌楸的用引物700进行PCR扩增，均特异获得700bp的产物。2.根据权利要求1所述的杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法，其特征在于，步骤1)中，叶片为刚展开的嫩叶，液氮处理后放置-80℃备用。3.根据权利要求1所述的杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，其特征在于，步骤2)中，DNA提取采用CTAB法进行。4.根据权利要求1所述的杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，其特征在于，步骤3)中，PCR扩增的10μL体系为：75ng基因组DNA，1.0μL10×PCRBuffer，1.2μL2.5mM·L-1MgCl，0.2μL10mM·L-1dNTP，0.5μL10μM·L-1引物18.2左端引物，0.5μL10μM·L-1引物18.2右端引物和0.5个单位Taq酶，ddH2O补足10μL，其中，引物18.2左端引物序列为：AATTCTCTCAATTTCACTTTGCCT；引物18.2右端引物序列为：TGGTCGATGCATTCTGTTTCT。5.根据权利要求1所述的杂交鹅掌楸亲缘关系鉴定方法，其特征在于，步骤3)中，采用Touch-downPCR扩增程序：95℃预变性4min，94℃变性15s，60℃(△＝-1℃)复性30s，72℃延伸30s，6个循环；94℃变...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈金慧，龙晓飞，施季森，成铁龙，肖保荣，刘思芹，翁禹豪，胡凌峰，刘阳，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32