耐热型普鲁兰酶的编码基因及其重组表达和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种来源于嗜热脂肪土芽孢杆菌的耐热型普鲁兰酶的编码基因，及其重组表达和应用。本发明专利技术成功构建了含PluGS的重组质粒，从而获得多种高表达菌株，包括大肠杆菌、芽孢杆菌、酵母菌及霉菌。本发明专利技术得到的重组宿主细胞，适于上述普鲁兰酶基因的表达。根据本发明专利技术的普鲁兰酶最适pH为6.0，在pH 5.0‑7.0保持较高酶活。最适温度65℃，且在60～70℃的热稳定性良好，在60℃保温3h，该普鲁兰酶仍保留90％以上的酶活，适于工业上应用的要求。通过薄层层析法和高效液相色谱分析鉴定该重组表达的普鲁兰酶为I型普鲁兰酶，能够水解普鲁兰多糖、支链淀粉和可溶性淀粉的α‑1，6‑糖苷键，不能水解支链淀粉和环糊精。

【技术实现步骤摘要】
耐热型普鲁兰酶的编码基因及其重组表达和应用
本专利技术涉及生物技术及食品领域，具体涉及一种来源于嗜热脂肪土芽孢杆菌具有较强热稳定性的普鲁兰酶的克隆，本专利技术还提供该普鲁兰酶编码基因重组质粒的构建、表达和酶学性质。
技术介绍
普鲁兰酶(EC3.2.1.41)是一种淀粉脱支酶，已用于催化水解支链淀粉、普鲁兰多糖、α-和β-极限糊精的α-1,4-和α-1,6-糖苷键。普鲁兰酶是一种主要的脱支酶，可以特异性地水解分支点，当与葡糖淀粉酶一起使用时，可显着提高淀粉葡糖苷酶的利用率，并大大减少葡糖淀粉酶的需求(Bertoldo,C.,Antranikian,G.,Starch-hydrolyzingenzymesfromthermophilicarchaeaandbacteria.Curr.Opin.Chem.Biol.,2002,151-160)。在小麦发酵工业中，普鲁兰酶与真菌α-淀粉酶或葡糖淀粉酶结合使用生产低碳水化合物“轻啤”(M.,Bardowski,J.,Pullulandegradingenzymesofbacterialorigin.Crit.Rev.Microbiol.,200本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来源于嗜热脂肪土芽孢杆菌的耐热型普鲁兰酶的编码基因，用于编码I型普鲁兰酶，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，记为pluGS。

【技术特征摘要】
1.一种来源于嗜热脂肪土芽孢杆菌的耐热型普鲁兰酶的编码基因，用于编码I型普鲁兰酶，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，记为pluGS。2.根据权利要求1所述的耐热型普鲁兰酶的编码基因，其特征在于，所述的编码I型普鲁兰酶的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列或其无义突变序列。3.根据权利要求1所述的耐热型普鲁兰酶的编码基因，其特征在于，所述的耐热型普鲁兰酶的编码基因与SEQIDNO:1所示序列具有80％以上的一致性。4.根据权利要求1所述的耐热型普鲁兰酶的编码基因，其特征在于，所述的耐热型普鲁兰酶的编码基因编码的蛋白序列与所述氨基酸序列具有80％以上的一致性。5.一种耐热型普鲁兰酶，其特征在于，所述耐热型普鲁兰酶是SEQIDNO:2所示的氨基酸序列或其无义突变序列。6.具有I型普鲁兰酶活性的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：李聆梦，魏巍，董凤英，魏东芝，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：上海,31