本发明专利技术提供一种用于对番茄致病的真菌，该真菌为中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为GCMCC NO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)菌株以及该真菌的用途。本发明专利技术分离纯化的真菌具有强致病性，为鉴定筛选抗该真菌的番茄新品种提供了新的途径，可以避免传统方法筛选出现假抗病的现象。
【技术实现步骤摘要】
一种强致病性番茄枯萎病菌菌株及其用途
本专利技术属于植物真菌，特别是，属于一种对番茄植株具有强致病性的真菌以及对该真菌的鉴定技术。
技术介绍
番茄(LycopersiconesculentumMill.)为一年生或多年生草本植物，原产南美洲，现在中国南北方广泛栽培，是目前农业生产上不可或缺的果蔬之一。因番茄的果实富含的维生素、矿物质、碳水化合物、有机酸及少量的蛋白质，有促进消化、利尿、抑制多种细菌作用，番茄中维生素D可保护血管，治高血压。番茄中有谷胱甘肽，有推迟细胞衰老，增加人体抗癌能力。其果实可以生食、煮食、加工番茄酱、汁或整果罐藏等多种方式。是农业生产上的重要的经济作物。番茄枯萎病是生产上危害最为严重的土传病害之一，病原菌为尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)，其侵染维管束，阻塞营养物质的输送，病茎纵切面可观察到维管束变褐。其病症多在番茄开花期间发生，随着坐果及果实膨大，病情逐渐加重。本专利技术涉及的番茄枯萎病菌FB-7-1为强致病性病原菌，其在番茄植株的苗期、花果期均能致病，且发病迅速，症状典型。通常可从病株的茎基部分离获得致病菌，并纯化保存菌种，可以利用这些菌种作为番茄品种育种的工具进行抗病性鉴定和筛选，最终获得抗该病原菌的番茄新品种，也可以利用这些菌种进行其它实验研究，例如用于研究和开发防治或防止番茄枯萎病的药剂。
技术实现思路
本专利技术研究小组在番茄植株上发现一种强致病番茄枯萎病菌，该病原菌为尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)，该菌相比其他番茄枯萎病菌具有强致病性，可引起番茄苗期或成株期植株快速枯萎死亡。基于其在番茄致病上的强致病性状，该致病菌可以作为番茄抗病性育种的一种有利工具。利用该病原菌进行抗病性鉴定可以获得的抗该病害的番茄新品种。一方面，本专利技术提供了一种用于对番茄致病的真菌，该真菌为中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为GCMCCNO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)一方面，本专利技术提供一种用于番茄抗病性育种筛选的真菌，该真菌为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为GCMCCNO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)。另一方面，本专利技术提保藏号为GCMCCNO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)真菌，作为番茄抗病性育种筛选的应用。在优选的方式中，把病原菌接种在番茄的根部。在一些优选的方式中，用该真菌的分生孢子悬浮液(106个/mL)接种到番茄根部。本专利技术还提供一种筛选番茄抗病性品种的方法，该方法包括：通过培养保藏号为2017029的真菌，尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)FB-7-1菌株，获得分生孢子悬浮液，浓度为106个/mL；分生孢子悬浮液浇灌到番茄的根部；接种后用透明塑料膜覆盖保湿，置于20-30℃的温室大棚培养48h；然后去除塑料袋，进行日常的栽培管理；观察番茄的感病症状或抗病性状，获得抗尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)。番茄品种为浙粉502。保藏信息编号FB-7-1的菌株的保藏日期为：2016年11月23日，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学保藏中心；保藏单位为：中国典型培养物保藏中心保藏号为：GCMCCNO.2017029，中文名称为：尖孢镰刀菌，拉丁文学名为：Fusariumoxysporum。有益效果本专利技术分离纯化的真菌即可以对番茄的叶片和植株致病，为鉴定筛选抗该真菌的番茄新品种提供了新的途径，可以避免传统方法筛选出现假抗病的现象。实施例实施例1：病原分离物的分离纯化和病原菌鉴定2016年9月15日，浙江温州苍南的番茄种植基地里发现了几棵番茄迅速发黄枯萎死亡。病症疑似番茄枯萎病，但发病迅猛，不同于普通番茄枯萎病。因此采集该发病点的典型番茄病株，切取病健交界处的块茎，用1％次氯酸钠消毒1min，再用70％酒精消毒30s，用无菌水漂洗3次后，置于PSA培养基(土豆200g，蔗糖20g，琼脂18g，水1000mL，pH6.0)，培养3d。对长出的所有不同菌落，挑取少量菌丝进行分离。对分离后的不同分离物进行单胞分离培养，获得病原分离物23个。这些病原分离物在25℃光照培养箱进行培养。对分离得到的病原菌进行离体叶片接种鉴定，发现以分离物FB-7-1对番茄叶片有很强的致病性(保藏的菌株)，与分离物FB-7-1相同的菌株有12个菌株，其余21个菌株为弱致病菌或非致病菌。因此分离物FB-7-1为引起番茄枯萎病的病原菌，以下实验或测定均以FB-7-1为典型菌株。病原培养鉴定病原菌FB-7-1在PSA培养基上于25℃培养，生长迅速，菌丝为白色，绒状，培养时间稍长菌落经常出现淡紫粉色，菌丝体透明，有分隔。具有3种类型孢子，分别为大型分生孢子、小孢子和厚恒孢子。大型分生孢子具有3个～5个分隔，呈镰刀形，两端略弯曲，壁薄，大小为(2.1μm～4.4μm)×(21.6μm～36.6μm)。小型分生孢子多数为单胞，卵形或椭圆形，(5.2μm～10.1μm)×(2.1μm～3.3μm)，着生于菌丝的侧面的分生孢子梗，聚集成假头状。厚恒孢子表面光滑，球形至卵圆形，浅黄色。病原菌分子鉴定利用分子鉴定技术对该病原菌分离物的rDNAInternalTranscibedSpacer序列、β-tubulin序列和β-tubulin序列等进行扩增，来进一步鉴定该病原菌的种属。1、rDNAInternalTranscibedSpacer序列(ITS)的扩增用引物ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)和ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)PCR扩增该病原菌的,经测序获得一个516bp的序列，具体序列如下：GCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCACTTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCACAGCTTGGTGTTGGGACTCGCGTTAATTCGCGTTCCCCAAATTGATTGGCGGTCACGTCGAGCTTCCATAGCGTAGTAGTAAAACCCTCGTTACTGGTAATCGTCGCGGCCACGCCGTTAAACCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATC。该序列在Genbank中检索发现其与70个Fusariumoxysporum的ITS序列相似性高达100％。未能辨别小种或生理小种的信息。2、β-tubulin序列的扩增用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于对番茄致病的真菌菌株，该真菌菌株为中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为GCMCC NO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)FB‑7‑1菌株。
【技术特征摘要】
1.一种用于对番茄致病的真菌菌株，该真菌菌株为中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为GCMCCNO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)FB-7-1菌株。2.一种筛选番茄抗病性品种的方法，该方法包括：通过培养保藏号为GCMCCNO.2017029的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)FB-7-1菌株，获得分生孢子悬浮液，让其浓度为106个/mL；把病原菌的...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢昀烨，方丽，王汉荣，王连平，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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