The invention discloses a kind of nano-antibody against GPC3 protein and its preparation method and application. The method uses the GPC3 fusion protein expressed in prokaryotic to immunize camels, extracts RNA from camel spleen tissues, uses it as template to reverse into cDNA, constructs the carrier of phage capsid protein, constructs phage display library, and calculates it. Storage capacity and titer. Then using the principle of antigen-antibody affinity, through three rounds of panning, the specific binding nano-antibody to GPC3 was screened out from the library, and then the specific antibody gene was obtained. The expression vector was constructed, and its prokaryotic expression, purification and identification were carried out.
【技术实现步骤摘要】
一种抗GPC3蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种抗GPC3蛋白的纳米抗体，本专利技术还涉及该纳米抗体的制备方法和应用。
技术介绍
肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈逐年上升趋势，严重威胁着人类的健康。肝癌的治疗手段主要包括肝移植、肿瘤切除及非切除性局部疗法如肝动脉化疗栓塞等。由于肝癌特别是原发性肝癌(HCC)早期易发生转移以及治疗后易复发，因此，寻找一个可以准确判断预后的指标和有效的肝癌治疗靶点具有重要意义。早期诊断和治疗是提高原发性肝细胞癌疗效的关键因素之一。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3，GPC3)作为硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族成员，它参与调控细胞增殖、调控、粘附和迁移等过程。有研究显示GPC3原发性肝癌中特异性高表达，而在成人正常肝组织低表达或不表达。从而提示GPC3对肝癌诊断具有显著的灵敏性和特异性，可作为识别原发性肝癌(HCC)特异性肿瘤标志物。靶向治疗则使分子药物特异性结合到肿瘤细胞的某些特定的作用位点，选择性杀死肿瘤细胞而不杀伤或仅很少损伤正常组织与细胞，克服了传统治疗存在的弊端...
【技术保护点】
1.一种抗GPC3蛋白的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，优选地，所述纳米抗体仅由重链组成，优选地，所述纳米抗体的分子量大小为13kD。
【技术特征摘要】
1.一种抗GPC3蛋白的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，优选地，所述纳米抗体仅由重链组成，优选地，所述纳米抗体的分子量大小为13kD。2.编码如权利要求1所述纳米抗体的基因，其特征在于，所述基因包含SEQIDNO:2所示的核苷酸序列。3.一种重组质粒，其特征在于，所述质粒包含权利要求2所述的基因。4.一种重组细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求2所述的基因或权利要求3所述的质粒。5.一种检测GPC3的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的抗体。6.权利要求1所述纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对GPC3基因进行原核表达，收集表达的融合蛋白His-GPC3并纯化；(2)将纯化后的融合蛋白His-GPC3免疫骆驼；(3)提取步骤(2)骆驼脾脏组织的RNA，以其为模板反转成cDNA，特异性扩增骆驼重链抗体可变区基因；(4)将步骤(3)扩增到的基因经酶切后与pCANTAB5E质粒...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏丽洁，腾桥，张富春，李金耀，
申请(专利权)人：新疆大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65
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