用于流感诊断的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及用于流感诊断的方法和试剂盒。本文提供的一些实施方式涉及组合分析。在一些实施方式中，鉴别A型流感或B型流感的分析与测定流感神经氨酸酶对抗病毒药物的敏感性的分析组合。

Method and kit for diagnosing influenza

The invention relates to a method and kit for diagnosing influenza. Some implementations of this article involve combinatorial analysis. In some implementations, an analysis that identifies influenza A or B is combined with an analysis that measures the susceptibility of influenza neuraminidase to antiviral drugs.

【技术实现步骤摘要】
用于流感诊断的方法和试剂盒本申请是分案申请，原申请的申请日为2014年4月1日，中国申请号为201480031254.8，国际申请号为PCT/US2014/032567，专利技术名称为“用于流感诊断的方法和试剂盒”。相关申请的交叉引用本申请要求2013年4月1日提交的名称为“床旁(POC)流感抗病毒易感性测试(PointOfCareInfluenzaAntiviralSusceptibilityTest)”的美国临时申请第61/807,185号的权益，其通过引用以其全文并入本文。
本文提供的一些实施方式涉及用于床旁流感测试的方法、组合物、装置和系统。一些实施方式涉及组合分析。在一些实施方式中，鉴别A型流感或B型流感的分析与测定流感神经氨酸酶对抗病毒药物的敏感性的分析组合。
技术介绍
流感为公共健康的持续和严重威胁。每年，流感相关疾病在美国导致大约200,000例住院和36,000例死亡。从国家影响视角来看，2010年源于流感的总经济成本估计为290亿美元。流感的抗病毒疗法在以及时方式给予为治疗或给予用于预防时有效。若干研究得出神经氨酸酶药物减少症状持续时间的结论。特敏福(Tamiflu)和瑞乐沙(Relenza)均在针对季节性流感的预防中80％有效。当治疗患有流感的患者时，推荐的是患者在症状的48小时内开始治疗且延迟越小越好。即时诊断和开始抗病毒治疗导致最佳患者结果。基于对M2通道阻断剂的广泛抗性，推测广泛使用神经氨酸酶抑制剂可能最后导致在季节性或大流行流感病毒中出现其抗性并非不合理。已在临床研究期间鉴别多种抗神经氨酸酶抑制剂突变体。在三年期间的监测中，分离了八种对奥司他韦的易感性具有>10倍降低的病毒变体。当考虑用于季节性流感管理的基于神经氨酸酶抑制剂的药物的质量分布时，这些发现应引起暂停。在2007-2008冬季期间出现传染性奥司他韦抗性流感病毒和在HSN1和大流行流感H1N1中检测到奥司他韦抗性(2009)之后，WHO在2010年于香港召开关于抗病毒抗性的第一届全球磋商会。此磋商会的关键结果是在临床环境中或作为国家监测的部分而以正式状态报导对流感的抗病毒抗性的要求。此外，一些抗病毒剂(如奥司他韦)引起不良事件，使得仅在需要时开处方是重要的。各种抗病毒药物的覆盖范围可以随着提供商而变化且具有对于患者的不同成本。医师有责任仅在需要时开处方。尽管成本次于有效性，如果患者可以用较不昂贵的药物对付过去，那么医师有义务使患者了解该选项。因此，对于可以提供特异性菌株的诊断以避免不良事件、减缓抗药性的演化且为患者和美国保健系统产生节约的床旁测试存在未满足的需要。
技术实现思路
本文提供的方法、试剂盒、系统和组合物的一些实施方式包括检测流感病毒的方法，其包括：(a)使样品与适于检测A型流感病毒或B型流感病毒的免疫分析的免疫分析缓冲剂接触，进而获得免疫分析测试样品；(b)使免疫分析测试样品的第一部分与包括检测A型或B型流感的免疫分析的测试物接触，进而检测样品中A型或B型流感的存在或不存在；(c)使免疫分析测试样品的第二部分与包括神经氨酸酶分析缓冲剂的基质接触，进而获得神经氨酸酶测试样品；以及(d)使神经氨酸酶测试样品接触神经氨酸酶分析物，进而检测样品中神经氨酸酶的存在。在一些实施方式中，免疫分析缓冲剂与用于神经氨酸酶活性的分析不相容。在一些实施方式中，免疫分析缓冲剂抑制神经氨酸酶活性。在一些实施方式中，步骤(c)和(d)在相同容器中进行。本文提供的一些实施方式包括检测流感病毒的方法，其包括：(a)使样品与适于神经氨酸酶分析的神经氨酸酶分析缓冲剂接触，进而获得神经氨酸酶测试样品；(b)使神经氨酸酶测试样品的第一部分与包括检测A型或B型流感的免疫分析的测试物接触，其中神经氨酸酶测试样品接触包含免疫分析缓冲剂的基质，进而获得免疫分析测试样品且检测样品中A型或B型流感的存在或不存在；和(c)使神经氨酸酶测试样品的第二部分与神经氨酸酶分析物接触，进而检测样品中神经氨酸酶的存在。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析缓冲剂与检测A型或B型流感的免疫分析不相容。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析缓冲剂抑制抗体与选自A型流感和B型流感的抗原的特异性结合。在一些实施方式中，基质包括冻干或干燥的免疫分析缓冲剂。在一些实施方式中，步骤(c)在包含多个室的容器中进行。在检测流感病毒的方法的一些实施方式中，容器包括多个室。在一些实施方式中，容器包括包含基质的室，和包含用于神经氨酸酶分析的试剂的室。在一些实施方式中，基质包含交联多糖。在一些实施方式中，基质选自葡聚糖凝胶和琼脂糖。在一些实施方式中，免疫分析测试样品和神经氨酸酶测试样品通过选自重力、毛细作用和扩散的一种或多种力在容器中移动。在一些实施方式中，容器包括套筒。在一些实施方式中，容器包含适于使用光电倍增器读取的多孔套筒。在一些实施方式中，光电倍增器选自光电倍增管和微光电倍增管。在一些实施方式中，光电倍增器为便携式的。在一些实施方式中，光电倍增器在适合于初级护理医师办公室的便携式读取器中。在一些实施方式中，光电倍增管表面为圆形且具有约6mm到9mm的直径，或微光电倍增管为矩形且具有约1mm到3mm的尺寸。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析包括测定神经氨酸酶对测试化合物的敏感性。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析包括：(a)获得抑制值比率，其中比率包括与不存在测试化合物情况下相比的神经氨酸酶活性水平的存在测试化合物情况下的神经氨酸酶活性水平；和(b)比较抑制值与抑制阈值的比率，进而测定神经氨酸酶活性对测试化合物的敏感性。在一些实施方式中，抑制阈值通过检测A型或B型病毒确定。在一些实施方式中，如果检测A型病毒，那么使用第一抑制阈值，且如果检测B型病毒，那么使用第二抑制阈值。在一些实施方式中，第一阈值比第二阈值低。在一些实施方式中，抑制阈值通过测试化合物确定。一些实施方式也包括选择用于治疗流感的测试化合物。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析物包含包括含信号传导酶的双酶分析物。在一些实施方式中，神经氨酸酶活性产生用于信号传导酶的底物。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析物包括N-乙酰基神经氨酸和荧光素的缀合物或其衍生物。在一些实施方式中，神经氨酸酶活性产生用于信号传导酶的抑制剂。在一些实施方式中，神经氨酸酶分析物包括N-乙酰基神经氨酸和三氟甲基酮的缀合物或其衍生物。在一些实施方式中，信号传导酶包括荧光素酶。在一些实施方式中，免疫分析缓冲剂抑制荧光素酶活性。在一些实施方式中，神经氨酸酶活性水平使用光电倍增管测量。在一些实施方式中，测试化合物为抗病毒药物。在一些实施方式中，测试化合物为选自以下的抗病毒药物：奥司他韦(Oseltamivir)、扎那米韦(Zanamivir)、拉那米韦(Lanamivir)和帕拉米韦(Peramivir)。在一些实施方式中，免疫分析包括夹心分析。在一些实施方式中，样品获自受试者。在一些实施方式中，受试者疑似患有流感。在一些实施方式中，受试者为人类。本文提供的一些实施方式包括选择用于流感病毒的治疗的方法，其包括：(a)使样品与适于检测A型流感病毒或B型流感病毒的免疫分析的免疫分析缓冲剂接触，进而获得免疫分析测试样品；(b)使免疫分析测试样品的第一部分与包含检测A型或B型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.测试物在制备用于检测流感病毒的试剂盒中的应用，所述测试物包括：适于检测A型流感病毒或B型流感病毒的免疫分析的免疫分析缓冲剂；检测A型或B型流感的免疫分析物；交换基质，所述交换基质包括用于将免疫分析测试样品转化为神经氨酸酶分析测试样品的神经氨酸酶分析缓冲剂或用于将神经氨酸酶分析测试样品转化为免疫分析测试样品的免疫分析缓冲剂；神经氨酸酶分析物，所述神经氨酸酶分析物包括双酶分析物，所述双酶分析物包括：信号传导酶，和包含用于双酶流感神经氨酸酶敏感性分析的经遮蔽抑制剂化合物的试剂，所述经遮蔽抑制剂选自1,1,1‑三氟‑4‑(4‑羟基苯基)丁‑2‑酮(对位)、1,1,1‑三氟‑4‑(3‑羟基苯基)丁‑2‑酮(间位)、和1,1,1‑三氟‑4‑(2‑羟基苯基)丁‑2‑酮(邻位)。

【技术特征摘要】
2013.04.01 US 61/807,1851.测试物在制备用于检测流感病毒的试剂盒中的应用，所述测试物包括：适于检测A型流感病毒或B型流感病毒的免疫分析的免疫分析缓冲剂；检测A型或B型流感的免疫分析物；交换基质，所述交换基质包括用于将免疫分析测试样品转化为神经氨酸酶分析测试样品的神经氨酸酶分析缓冲剂或用于将神经氨酸酶分析测试样品转化为免疫分析测试样品的免疫分析缓冲剂；神经氨酸酶分析物，所述神经氨酸酶分析物包括双酶分析物，所述双酶分析物包括：信号传导酶，和包含用于双酶流感神经氨酸酶敏感性分析的经遮蔽抑制剂化合物的试剂，所述经遮蔽抑制剂选自1,1,1-三氟-4-(4-羟基苯基)丁-2-酮(对位)、1,1,1-三氟-4-(3-羟基苯基)丁-2-酮(间位)、和...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·坎贝尔，K·G·多兰，E·法洛斯，R·A·霍克，R·雅各布森，J·B·皮特纳，G·冯克，R·卡赫尔，U·古拉蒂，H·伊梅尔，R·B·埃文斯斯托姆斯，
申请(专利权)人：贝克顿·迪金森公司，
类型：发明
国别省市：美国,US