核酸检测方法技术

本发明专利技术涉及一种核酸检测方法，步骤a，在芯片上层的加样孔将核酸样本添加到芯片中层内的样本室；步骤b，按照第一预设转速旋转芯片，将核酸样本从样本室依次排入样本分流通道、样本等分室，多余核酸样本进入到第一废液室；步骤c，芯片停止转动，样本等分室中的样本流入第一虹吸阀；步骤d，芯片以第二预设转动，由于离心力的作用，第一虹吸阀里的液体受到离心力的作用进入到反应室，FTA卡提取并吸附样本中的核酸。本发明专利技术设备的自动化程度高，操作人员只需单次加样即能够实现核酸的检测，控制精度高。

【技术实现步骤摘要】
核酸检测方法
本专利技术涉及核酸检测领域，尤其涉及一种核酸检测方法。
技术介绍
现有技术中，随着基因测序技术的迅猛发展，基因测序已从传统的基因芯片测序发展到现在的高通量基因测序。目前，基因测序系统和装置在各个方面取得了长足的进展，但其发展仍然处于起步阶段，各个方面仍然需要不断的改进和创新。现有技术中的基因测序设备，用于测量基因序列的仪器，其包括数据处理装置和核酸检测装置。所述数据处理装置，与核酸检测装置连接，用于提供用户接口并根据控制指令控制核酸检测装置的工作，并显示核酸检测装置的工作状态；所述核酸检测装置，用于进行基因测序。其中，核酸检测装置包括：测序反应小室、液体传输组件、温控组件、位移组件和采图组件，所述测序反应小室，与液体传输组件、温控组件和位移组件分别连接，用于进行测序反应；所述液体传输组件，用于根据控制指令传输液体到测序反应小室；所述温控组件，用于调节测序反应小室的温度；所述位移组件，用于调节测序反应小室的位置；所述采图组件，用于采集测序反应小室的测序图像。该技术方案中，用户只能通过操作数据处理装置来获知核酸检测装置的各个组件的工作状态，使用不便。然而，现有技术中的核酸检测装置仅能够对单一种类的核酸进行混合及检测，尤其不能够对不同试剂针对不同的反应温度及时间进行自动控制，以使不同的核酸根据实际的反应时序及温度进行自动反应。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种核酸检测方法，用以克服上述技术缺陷。为实现上述目的，本专利技术提供一种核酸检测方法，包括：步骤a，在芯片上层的加样孔将核酸样本添加到芯片中层内的样本室；步骤b，按照第一预设转速旋转芯片，将核酸样本从样本室依次排入样本分流通道、样本等分室，多余核酸样本进入到第一废液室；步骤c，芯片停止转动，样本等分室中的样本流入第一虹吸阀；步骤d，芯片以第二预设转动，由于离心力的作用，第一虹吸阀里的液体受到离心力的作用进入到反应室，FTA卡提取并吸附样本中的核酸；步骤e，芯片停止转动，反应室中的核酸样本废液流入第二虹吸阀中，芯片以第三预设速度转动，反应室里的核酸样本废液流入第二废液室；步骤f，按照上面步骤a-e，自动在芯片中层添加第一清洗液和第二清洗液，按照样本分流通道、样本等分室、第二虹吸阀顺次流通清洗FTA卡；步骤g，芯片按照第四预设速度转动并加热，将石蜡融化，第一支路推动LAMP或PCR反映试剂和引物流入反应室，并通过矿物油将反应室密封，第二支路推动矿物油进入第二虹吸阀中，将废液室密封；步骤h，芯片加热到适合LAMP或PCR反映的温度，反映完成后，用荧光检测，读取反映结果。其中，所述样本室单元包括设置在中间位置的样本室、与样本室连通并设置在样本室外围的样本分流通道、设置在所述样本分流通道外侧并与样本分流通道连通的若干个样本等分室，核酸样本在第一预设转速下从样本室受到离心力作用，排出到样本分流通道中，并在样本分流通道内流动，在离心力的作用下继续向外层运动，分别进入各个样本等分室内。进一步地，所述样本室为偏心结构，核酸样本在样本室旋转过程中，向直径较大的一方汇集，核酸样本向豁口方向汇集并从此处流向样本分流通道；所述样本室的外侧壁为一弧形壁，样本室的外侧壁从豁口开始沿顺时针方向逐渐向圆心侧延伸以形成样本室的偏心结构，在弧形壁端部为最靠近样本室圆心的位置。进一步地，核酸样本经过所述豁口向上流至所述样本分流通道，样本分流通道与样本室之间设置台阶面，样本分流通道的高度高于样本室的高度，同时，样本等分室的高度高于样本分流通道的高度。进一步地，在每个所述样本等分室的末端连接连通有第一虹吸阀，用以将样本等分室内的核酸样本导入所述反应室，所述样本室在第一预设速度旋转时，核酸样本进入样本等分室中，多余样本进入第一废液室；所述样本室停止转动，样本等分室中的样本流入第一虹吸阀中并充满第一虹吸阀。进一步地，所述第一虹吸阀包括与所述样本等分室连通并向外侧延伸的第一虹吸段、与第一虹吸段连通并沿周向布置的第二虹吸段、与第二虹吸段并向内侧延伸的第三虹吸段、与第三虹吸段并列设置并向外侧延伸的第四虹吸段，在第三虹吸段和第四虹吸段之间为弧形段，其在第三虹吸段与第四虹吸段之间实现过渡，还包括与第四虹吸段连通倾斜向外侧延伸的第五虹吸段，与第五虹吸段连通沿径向向外侧延伸的第六虹吸段，第六虹吸段的末端与所述反应室的第一储液槽连通。进一步地，所述装置还包括与所述反应室连通的第二虹吸阀，所述第二虹吸阀包括与反应室连通并沿径向向外层延伸的第七虹吸段、与第七虹吸段连通沿周向的第八虹吸段、与第八虹吸段连通并沿径向向内侧延伸的第九虹吸段，以及与第九虹吸段并排设置，沿径向向外侧延伸的第十虹吸段，在九虹吸段与第十虹吸段之间还设置有过渡的弧形段，第十虹吸段的末端与第二废液室连通。进一步地，所述试剂存储导入单元包括靠近中心部位的石腊室，其内装载石蜡，在低温时作为驱动源；所述石腊室的一端还连通有第三排气通道，用以将石腊室内的气体排出。进一步地，所述石蜡室、与并排的两个支路连接，其中第一支路上设置第一矿物油室，其内装载有矿物油，并通过第二连通管路与所述第二虹吸阀连通，在对石蜡进行加热后，矿物油沿第二连通管路流向第二虹吸阀，并充满第二虹吸阀以封堵在反应室的一端。进一步地，第二支路上沿芯片径向方向自内向外依次设置第二矿物油室、试剂室、引物室，三者之间通过管道连通，其内分别存储矿物油、LAMP试剂和引物，在引物室一端通过第三管道与反应室连通，在石蜡加热时，推动矿油流动，进而矿物油推动LAMP试剂、引物进入反应室。进一步地，所述第一虹吸阀设置在芯片中层底面，所述第二虹吸阀设置在芯片中层顶面。与现有技术相比本专利技术的有益效果在于，本专利技术反应芯片包括设置在中间位置的样本室单元，其存储加入的核酸样本，并在旋转作用下将核酸样本等分；与所述样本室单元连通，并通过虹吸现象将核酸样本引入反应室单元的至少两个第一虹吸阀，其中，第一虹吸阀设置在芯片中层的下侧面上；反应室单元，其设置在芯片中层的边缘位置，与反应室单元连通的试剂存储导入单元。本专利技术该芯片能够实现核酸检测的功能，可以针对各种血液病毒进行检测，设备的自动化程度高，操作人员只需单次加样即能够实现核酸的检测；单个芯片能够同时检测多种病毒核酸，研究人员可以根据实际使用的需求增加或减少检测单元；芯片上集成样本前处理系统，对操作人员的技能要求低，同时对使用的环境要求低，不需要专用的核酸检测实验室；芯片上设计有石蜡阀门和毛细阀门，通过控制温度和转速能够实现阀门的开启和闭合，从而控制不同样本的次序流动；检测设备上具有温度控制系统能够针对LAMP反应和PCR反应实现温度控制，Iamp反应需要温度保持在65度，PCR反应需要实现温度的周期性变化，通知制热芯片和制冷芯片的共同作用实现温度的交替变化。尤其，样本室侧壁通过设置渐开线形状，使样本室具有偏心结构，增强核酸样本在离心作用下的运动，尤其，通过渐开线形状的样本室侧壁的两端形成豁口，使流动中的核酸样本在极细的窄通道中迅速涌进样本分流通道，以快速对核酸样本分流。再者，样本分流通道的高度高于样本室的高度，同时，样本等分室的高度高于样本分流通道的高度，通过设置一次升高的结构，避免核酸样本在未进行旋转时产生不规则流动，而且，通过逐次升高的结构，可以方便的通过控本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸检测方法，其特征在于，包括：步骤a，在芯片上层的加样孔将核酸样本添加到芯片中层内的样本室；步骤b，按照第一预设转速旋转芯片，将核酸样本从样本室依次排入样本分流通道、样本等分室，多余核酸样本进入到第一废液室；步骤c，芯片停止转动，样本等分室中的样本流入第一虹吸阀；步骤d，芯片以第二预设转动，由于离心力的作用，第一虹吸阀里的液体受到离心力的作用进入到反应室，FTA卡提取并吸附样本中的核酸；步骤e，芯片停止转动，反应室中的核酸样本废液流入第二虹吸阀中，芯片以第三预设速度转动，反应室里的核酸样本废液流入第二废液室；步骤f，按照上面步骤a‑e，自动在芯片中层添加第一清洗液和第二清洗液，按照样本分流通道、样本等分室、第二虹吸阀顺次流通清洗FTA卡；步骤g，芯片按照第四预设速度转动并加热，将石蜡融化，第一支路推动LAMP或PCR反映试剂和引物流入反应室，并通过矿物油将反应室密封，第二支路推动矿物油进入第二虹吸阀中，将废液室密封；步骤h，芯片加热到适合LAMP或PCR反映的温度，反映完成后，用荧光检测，读取反映结果。

【技术特征摘要】
1.一种核酸检测方法，其特征在于，包括：步骤a，在芯片上层的加样孔将核酸样本添加到芯片中层内的样本室；步骤b，按照第一预设转速旋转芯片，将核酸样本从样本室依次排入样本分流通道、样本等分室，多余核酸样本进入到第一废液室；步骤c，芯片停止转动，样本等分室中的样本流入第一虹吸阀；步骤d，芯片以第二预设转动，由于离心力的作用，第一虹吸阀里的液体受到离心力的作用进入到反应室，FTA卡提取并吸附样本中的核酸；步骤e，芯片停止转动，反应室中的核酸样本废液流入第二虹吸阀中，芯片以第三预设速度转动，反应室里的核酸样本废液流入第二废液室；步骤f，按照上面步骤a-e，自动在芯片中层添加第一清洗液和第二清洗液，按照样本分流通道、样本等分室、第二虹吸阀顺次流通清洗FTA卡；步骤g，芯片按照第四预设速度转动并加热，将石蜡融化，第一支路推动LAMP或PCR反映试剂和引物流入反应室，并通过矿物油将反应室密封，第二支路推动矿物油进入第二虹吸阀中，将废液室密封；步骤h，芯片加热到适合LAMP或PCR反映的温度，反映完成后，用荧光检测，读取反映结果。2.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其特征在于，所述样本室单元包括设置在中间位置的样本室、与样本室连通并设置在样本室外围的样本分流通道、设置在所述样本分流通道外侧并与样本分流通道连通的一个样本等分室，核酸样本在第一预设转速下从样本室受到离心力作用，排出到样本分流通道中，并在样本分流通道内流动，在离心力的作用下继续向外层运动，分别进入各个样本等分室内。3.根据权利要求2所述的核酸检测方法，其特征在于，所述样本室为偏心结构，核酸样本在样本室旋转过程中，向直径较大的一方汇集，核酸样本向豁口方向汇集并从此处流向样本分流通道；所述样本室的外侧壁为一弧形壁，样本室的外侧壁从豁口开始沿顺时针方向逐渐向圆心侧延伸以形成样本室的偏心结构，在弧形壁端部为最靠近样本室圆心的位置。4.根据权利要求3所述的核酸检测方法，其特征在于，核酸样本经过所述豁口向上流至所述样本分流通道，样本分流通道与样本室之间设置台阶面，样本分流通道的高度高于样本室的高度，同时，样本等分室的高度高于样本分流通道的高度。5.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙佳姝，陈清华，刘超，田飞，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京,11