适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，尤其涉及一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体及其制备方法。所述表达载体含有pUC19质粒的序列，且所述pUC19质粒上的多克隆位点处插入有太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3‑磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子；其中，所述启动子在所述终止子的上游。该表达载体无需诱导，可稳定表达，并在太瑞斯梭孢壳霉中高效表达，而且具有在大肠杆菌中稳定性复制和保持、以及便于DNA纯化分离操作的特质。

【技术实现步骤摘要】
适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体及其制备方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体及其制备方法。
技术介绍
太瑞斯梭孢壳霉属于散囊菌纲，散囊菌霉目，嗜热子囊菌科，拉丁名为Thielaviaterrestris。菌落为白色，具短绒毛，于45℃下生长迅速，具有水解生物质中多种主要多糖的能力，可产生大量的植物细胞壁降解酶类。它是潜在的耐高温酶库，所产酶的最适温度多在60～80℃之间，温度耐受性良好。因此，太瑞斯梭孢壳霉在用于耐热酶类表达研究方面具有巨大的应用前景。现有的关于太瑞斯梭孢壳霉表达载体的研究未见报道，利用高效率的启动子表达目的蛋白是构建表达载体的一种常用策略，其中3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，gpd)基因的启动子在多种工业菌株中被用作表达载体构建。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体及其制备方法，旨在解决现有太瑞斯梭孢壳霉表达载体有限，缺少高效表达载体的技术问题。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术一方面提供一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体，所述表达载体含有pUC19质粒的序列，且所述pUC19质粒上的多克隆位点处插入有太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子；其中，所述启动子在所述终止子的上游。本专利技术另一方面提供一种上述表达载体的制备方法，包括如下步骤：以太瑞斯梭孢壳霉基因组为模板，进行PCR扩增，得到所述太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子的序列；提供pUC19质粒，将所述启动子和所述终止子插入到所述pUC19质粒上的多克隆位点处。本专利技术提供的表达载体是在太瑞斯梭孢壳霉表达载体构建中属首次应用，由在pUC19的多克隆位点处插入太瑞斯梭孢壳霉基因中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子而获得，其有益效果在于：该表达载体无需诱导，可稳定表达，并在太瑞斯梭孢壳霉中高效表达，而且具有在大肠杆菌中稳定性复制和保持、以及便于DNA纯化分离操作的特质。附图说明图1为本专利技术实施例1提供的表达载体pUC-PT构建示意图；图2为本专利技术实施例2提供的表达载体pUC-Pgpd-xyn-Tgpd构建示意图；图3为本专利技术实施例4中表达载体pUC-Pgpd-xyn-Tgpd转化验证电泳图；图4为本专利技术实施例4中表达载体pUC-Pgpd-xyn-Tgpd表达后木聚糖酶的酶活图。具体实施方式为了使本专利技术要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。一方面，本专利技术实施例提供了一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体，所述表达载体含有pUC19质粒的序列，且所述pUC19质粒上的多克隆位点处插入有太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子；其中，所述启动子在所述终止子的上游。本专利技术实施例提供的表达载体是在太瑞斯梭孢壳霉表达载体构建中属首次应用，由在pUC19的多克隆位点处插入太瑞斯梭孢壳霉基因中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，gpd，GeneID:11517920)的启动子和终止子而获得，其有益效果在于：该表达载体无需诱导，可稳定表达，并在太瑞斯梭孢壳霉中高效表达，而且具有在大肠杆菌中稳定性复制和保持、以及便于DNA纯化分离操作的特质，构建简单且便于筛选、保存。进一步地，所述表达载体的序列如SEQIDNO.3所示，全长为5883bp，GC含量为52.7％。所述启动子的序列如SEQIDNO.1所示(即SEQIDNO.3中的第245-2254位)，所述终止子的序列如SEQIDNO.2所示(即SEQIDNO.3中的第2283-3482位)。所述表达载体的序列如下SEQIDNO.3：GCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTGCATGCCACCTGGAGCTCTCAGCAACCCAAGGAATAAGTCCGTGAGGGATCGAGATGTTGGTCATCAGTGGAGTGGGTCGAAGGCAGGAGGACGAGATATAGTGGTTGACGAGGACACGGTCCGTCGGACAAGTAGTTAACGCCAGTACTCCGTAGTTAAAGCATATGATACTCGATGTTTGAGCCTCGCCTGTACCACCTGAAATCGTGAAAACTGAATACTTCGACGATATCATCACGTCTTGGGCCCCTGAGGGAGTCAATATTTGGGTCCACTGAAGTTTGGTCGTTGAGCTCCGGCGAGTCGTCTTGACAGGGATGCTCAACTGAAAGAATGACGTCGATGGCGACCTGTTAAATAATTTCACTATAACGTGAGGGGCATGACTGAGCACCCAACCCGAACCAAAAAGTGTACGCTAGGCATCTCGATCGGTTCCTTACCGGATTGTTAGTCATACCTCCAATTTTAGTGTAAACCGCTCGTCGAGAAGTCGTCATCCATCATGCCAATCATCAAGTATGATCAGGTTGTCACGGAATGCTGCGTTGAATCCGGATTCCATGGAGGGGTGTCCGCCCAGCAGCTGAGTGAATCATCGAGGCTTGGCAGACATGGTGCGTTTAATTACGGATACGGACACCTCCGACCTCGCCTGTCGCCAGACTCCGAGTCTTGGCCCGGTCCAATTCACTGTTACACAGTCACAGCCCTCCCAACCGGTTAACCACTCGGCGCGCCCGTCCAACACGTGCTTCGGAGTCCGTGTTTGGTTCGAGATGACTTGATATCAGATGGGTGGCGCGACCGCCGGAACGTTGGCGCGGTCCGACTTGGCGGATCTCACGGAACGCTGCGCTTCGTGCGGACCGACGTCGCCCCAAGCACGCCGACATCATGCGAAGAAAAATGCAGGCACGGGAAGTTGACGCGAGACGTGGTGTGGAAGCTTGGGCTGTGGGCTGAGATTCCCGTCCCTTCGTATTCTGCTGGATGTTTTACTGTAAGTTTCGTAGCACAATCGCGGGCTCCGAAGCAGAGTCAAGTCCGAAGCTAGCAGAGTCGAGTTCCGACGTCAAACGGCTCGTTTCC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有pUC19质粒的序列，且所述pUC19质粒上的多克隆位点处插入有太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3‑磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子；其中，所述启动子在所述终止子的上游。

【技术特征摘要】
1.一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有pUC19质粒的序列，且所述pUC19质粒上的多克隆位点处插入有太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子；其中，所述启动子在所述终止子的上游。2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列如SEQIDNO.1所示，所述终止子的序列如SEQIDNO.2所示。3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的序列如SEQIDNO.3所示。4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列的上游和所述终止子的序列的下游存在通用引物M13的结合位点。5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列和所述终止子的序列之间存在XbaI酶切位点和KpnI酶切位点。6.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列和所述终止子的序列之间连接有木聚糖酶基因序列。7.一种如权利要求1-5任一项所述的表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以太瑞斯梭孢壳霉基因组为模板，进行PCR扩增，得到所述太瑞斯梭孢壳...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶文俊，廖国侠，刘刚，王娟，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44