一种胆酸-赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种由胆酸、赖氨酸、卡拉胶寡糖和亚硒酸钠为原料制备的胆酸‑赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖及其制备方法。本发明专利技术首先以卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)为原料，用对甲苯磺酰氯将其羟基取代，制备出对甲苯磺酰卡拉胶寡糖，然后再与赖氨酸钠和亚硒酸钠反应，生成赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖；将胆酸与固体光气反应制备出胆酰氯，再将胆酰氯与赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖反应，生成胆酸‑赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖。

Cholinic acid lysine grafted seleno carrageenan oligosaccharide and preparation method thereof

The invention relates to a selenized carrageenan oligosaccharide grafted with cholic acid lysine, which is prepared from cholic acid, lysine, carrageenan oligosaccharide and sodium selenite and a preparation method thereof. The method firstly takes carrageenan oligosaccharide (molecular weight: 3000 ~ 9000) as raw material, substitutes its hydroxyl group with p-toluenesulfonyl chloride, and then reacts with sodium lysine and sodium selenite to form lysine grafted selenized carrageenan oligosaccharide; and then reacts cholic acid with solid phosgene to prepare cholic chloride. Cholic acid-lysine grafted selenized carrageenan oligosaccharides were synthesized by the reaction of cholic chloride and lysine grafted selenized carrageenan oligosaccharides.

【技术实现步骤摘要】
一种胆酸-赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖及其制备方法
本专利技术属药品及保健品领域，特别是涉及一种由胆酸、赖氨酸、卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)和亚硒酸钠为原料制备的胆酸-赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖及其制备方法。
技术介绍
硒化卡拉胶是肝黄金的主要成份，人体必需的微量元素，人体内含硒化卡拉胶量最丰富的器官就是肝。研究表明，肝病患者体内普遍缺硒化卡拉胶，并且病情越严重，血液中的硒化卡拉胶水平越低。同时临床研究证实，健康人补硒化卡拉胶亦能降低甲、乙型肝炎发病几率；甲、乙型肝炎患者补硒化卡拉胶，能够在相对较短的时间内大大改善食欲不振、两脚酸软、睡眠不良、明显乏力、面容灰暗、视力模糊等症状。硒化卡拉胶能够减少有毒物质对肝脏的伤害并帮助肝脏解毒；保护肝细胞的结构完整，修复受损部位；可作为免疫系统的非特异刺激因素，刺激体液免疫和细胞免疫系统，刺激免疫球蛋白及抗体产生，增强机体的免疫功能，提高肝脏自身的免疫能力；阻止肝纤维化，抑制肝癌细胞的生长；与抗癌药物联合使用时，明显抑制癌细胞的生长增殖，明显高于单独用药的效果。目前硒化卡拉胶普遍存在含硒率低，不具有肝胆靶向性。因此，提高卡拉胶的硒化接枝率、增加其肝胆靶向效率具有重要意义。本专利技术以胆酸、卡拉胶寡糖、赖氨酸和亚硒酸钠为主要原料，制备的胆酸-赖氨酸接枝的硒化卡拉胶寡糖具有较高的硒化率和胆酸接枝率。
技术实现思路
本专利技术首先以卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)为原料，用对甲苯磺酰氯将其羟基取代，制备出对甲苯磺酰卡拉胶寡糖，然后再与赖氨酸钠和亚硒酸钠反应，生成赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖；将胆酸与固体光气反应制备出胆酰氯，再将胆酰氯与赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖反应，生成胆酸-赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖。附图说明本专利技术的具体内容由以下实施例及实施例3的附图给出。附图是实施例3中硒溶液浓度-吸光度标准曲线图。具体实施方式实施例1(1)赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖的制备将15.30g卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)分散于100mLDMF中，降温至0℃，一次性加入0.10mol的TsCl，搅拌溶解，室温下搅拌反应3h，放置12h，过滤，无水乙醇洗涤3次，真空干燥；将上述产物溶解于80mL蒸馏水中，加入0.075mol亚硒酸钠和0.025mol赖氨酸钠，升温至80℃，保温反应5h，10％NaOH溶液中和至pH至7.0，蒸馏，浓缩，沉淀，过滤，80％乙醇洗涤3次，得白色固体粉末，干燥，备用；(2)胆酸酰氯的制备将0.05mol胆酸和100mL氯仿置于250mL三口反应瓶中，搅拌使胆酸溶解，再加入2.00gDMF，搅拌均匀，25℃温度下，将0.01mol三光气溶于20mL氯仿中，然后搅拌下将三光气氯仿溶液缓慢滴入反应瓶中，需1h，升温至60℃，搅拌反应3h，减压蒸馏蒸去氯仿，刮出，无水乙醚洗涤3次，真空干燥，得浅灰色固体粉末，备用；(3)赖氨酸硒化卡拉胶寡糖胆酸酰胺的制备将上述(1)中的产物加入到100mL蒸馏水中，搅拌溶解后，升温至70℃，分批加入(2)中的产物，同时滴加50mL2.5mol/L的NaOH溶液，搅拌反应5h，冷却至25℃，逐渐有固体颗粒析出，过滤，蒸馏水洗涤3次，无水乙醇洗涤三次，真空干燥，得白色固体粉末。实施例2分别称取实施例1(1)和实施例1(3)的产物各0.5000g，以甲基橙作指示剂，加入浓度为0.100mol/L的盐酸标准液V1/L。，用0.050mol/L的氢氧化钠标准液滴定至溶液由红色变成橙黄色为终点，消耗的体积记为V2/L。其中：氨基含量％＝(0.100V1-0.050V2)/0.5000×16×100％。胆酸接枝率％＝(实施例1(1)样品氨基含量-实施例1(3)氨基含量)/实施例1(1)氨基含量×100％。重复三次，计算平均值。见表1、表2。表1实施例1(1)样品氨基含量表2实施例1(3)样品氨基含量及胆酸接枝率实施例3(1)样品中无机硒含量的测定取0.1000g实施例1中所得固体粉末溶解于100mL蒸馏水中，静止24h后，定溶至100mL，然后准确量取10mL上述溶液，分别移入125mL分液漏斗中，加入2mL0.5％的3，3’-2二氨基联苯胺氯仿溶液，摇匀，于60℃水浴光线暗淡的环境下保温30min，取出，用浓氨水调节pH至7.0，准确移入10mL甲苯，振荡2min，静置5min分层，然后用吸管将有机层吸入到比色皿中，测定其吸光度。从标准曲线上(见说明书附图)查找样品中无机硒的浓度，按回归方程：y＝0.5x(式中x为硒溶液浓度，y为溶液吸光度)，计算出样品中无机硒含量。重复上述实验3次，取平均值。见表3。表3样品无机硒含量(2)样品总硒含量和有机硒含量的测定准确称取0.0001g实施例1中所得固体粉末，置于三角烧瓶中，加0.5mL30％硝酸浸泡放置过夜后，加热浸取近干，稍冷，加0.5mL30％H2O2，稍加热，冷却后，消化液转入200mL烧杯中，用大约10mL的蒸馏水洗净上述消化液，用2.5mol/L的NaOH溶液调pH在7.0，然后用50％的甲酸调节pH至2～3，加入1mL0.2mol/L的盐酸羟胺还原过剩的H2O2，将溶液定溶稀释至10000mL。按(1)同样的方法用3，3’-2二氨基联苯胺显色、甲苯萃取后测定其吸光度。从标准曲线上(见说明书附图)查找样品中总硒的浓度，按回归方程：y＝0.5x(式中x为硒溶液浓度，y为溶液吸光度)，然后计算出样品中总硒含量。重复上述实验3次，取平均值。由样品中总硒含量减去无机硒含量得到有机硒含量。见表4。表4样品有机硒含量附：标准硒溶液浓度-吸光度曲线的绘制和曲线回归方程：取5支125mL三角烧瓶，分别加入2.0、4.0、6.0、8.0和10.0mL的硒标准溶液(1μg/mL)，各加蒸馏水至20mL，用甲酸调pH为2.5，加入4mL0.2mol/L的EDTA-2Na，定溶至50mL。得到硒溶液浓度分别为0.04、0.08、0.12、0.16和0.20μg/mL的硒标准溶液。然后分别移入125mL分液漏斗中，加入2mL0.5％的3，3’-2二氨基联苯胺氯仿溶液，摇匀，于60℃水浴光线暗淡的环境下保温30min，取出，用浓氨水调pH至7.0，准确移入10mL甲苯，振荡2min，静置5min分层，然后用吸管将有机层吸入到比色皿中，用721型分光光度计于420nm处测定不同浓度硒的甲苯溶液的吸光度，并绘制吸光度-浓度标准曲线。见附表1和说明书附图。从说明书附图得曲线回归方程：y＝0.5x，式中x为硒溶液浓度，y为溶液吸光度。附表1不同浓度硒标准溶液的吸光度溶液硒浓度，μg/mL00.040.080.120.160.20吸光度，A42000.0200.0410.0650.0830.105本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种由胆酸、赖氨酸、卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)和亚硒酸钠为原料制备的胆酸‑赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖的方法，包括下列步骤：(1)赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖的制备将15.30g卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)分散于100mLDMF中，降温至0℃，一次性加入0.10mol的TsCl，搅拌溶解，室温下搅拌反应3h，放置12h，过滤，无水乙醇洗涤3次，真空干燥；将上述产物溶解于80mL蒸馏水中，加入0.075mol亚硒酸钠和0.025mol赖氨酸钠，升温至80℃，保温反应5h，10％NaOH溶液中和至pH至7.0，蒸馏，浓缩，沉淀，过滤，80％乙醇洗涤3次，得白色固体粉末，干燥，备用；(2)胆酸酰氯的制备将0.05mol胆酸和100mL氯仿置于250mL三口反应瓶中，搅拌使胆酸溶解，再加入2.00gDMF，搅拌均匀，25℃温度下，将0.01mol三光气溶于20mL氯仿中，然后搅拌下将三光气氯仿溶液缓慢滴入反应瓶中，需1h，升温至60℃，搅拌反应3h，减压蒸馏蒸去氯仿，刮出，无水乙醚洗涤3次，真空干燥，得浅灰色固体粉末，备用；(3)赖氨酸硒化卡拉胶寡糖胆酸酰胺的制备将上述(1)中的产物加入到100mL蒸馏水中，搅拌溶解后，升温至70℃，分批加入(2)中的产物，同时滴加50mL2.5mol/L的NaOH溶液，搅拌反应5h，冷却至25℃，逐渐有固体颗粒析出，过滤，蒸馏水洗涤3次，无水乙醇洗涤三次，真空干燥，得白色固体粉末。...

【技术特征摘要】
1.一种由胆酸、赖氨酸、卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)和亚硒酸钠为原料制备的胆酸-赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖的方法，包括下列步骤：(1)赖氨酸接枝硒化卡拉胶寡糖的制备将15.30g卡拉胶寡糖(分子量：3000～9000)分散于100mLDMF中，降温至0℃，一次性加入0.10mol的TsCl，搅拌溶解，室温下搅拌反应3h，放置12h，过滤，无水乙醇洗涤3次，真空干燥；将上述产物溶解于80mL蒸馏水中，加入0.075mol亚硒酸钠和0.025mol赖氨酸钠，升温至80℃，保温反应5h，10％NaOH溶液中和至pH至7.0，蒸馏，浓缩，沉淀，过滤，80％乙醇洗涤3次，得白色固体粉末，干燥，备用；(2)胆酸酰氯的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：麻金海，张波涛，孔淑玲，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东,37