一种去除鱼类鳃中血液的方法技术

本发明专利技术公开了一种去除鱼类鳃中血液的方法；包括：待麻醉后的实验鱼侧卧、鳃盖停止活动后侧放于解剖盘中，由胸鳍处沿腹部中线剪开，露出围心腔，剥离开围心膜露出心脏；在鱼心室上剪一小口，将PE管一端插入鱼心室上的小口，另外一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中，同时在鱼心房处用剪刀剪开一小口；打开蠕动泵将缓冲液经PE管泵入鱼血管中，开始冲洗去除鱼鳃中血液，冲洗后的缓冲液由鱼心房上的小口排出经集液槽排入到废液缸中；待鳃丝全部由血红色变为白色后代表血液去除完全，停止冲洗。与现有技术相比，本发明专利技术引入鱼类解剖学的方法以及蠕动泵等自动化操作方式，能够有效去除鱼类鳃中的血液。

A method for removing blood from fish gills

The invention discloses a method for removing blood from the gills of fish, which comprises: lying on the side of the experimental fish after anesthesia, placing the gill lid in an anatomical disc after it stops moving, cutting off the pectoral fin along the midline of the abdomen, exposing the pericardium, peeling off the pericardium and exposing the heart; cutting a small opening on the fish ventricle and inserting one end of the PE tube into the fish ventricle. At the other end, the peristaltic pump is inserted into the precooling buffer of the buffer tank, and a small opening is cut with scissors at the atrium of the fish; the peristaltic pump is opened and the buffer is pumped into the blood vessels of the fish through the PE tube, and the blood in the gill is washed and removed, and the washed buffer is discharged from the small opening on the atrium of the fish and drained into the collecting tank. In the waste liquid tank, all of the gill filaments turn red from blood red to blood. Compared with the prior art, the invention can effectively remove the blood in the gill of fish by introducing the method of fish anatomy and the automatic operation mode such as peristaltic pump.

【技术实现步骤摘要】
一种去除鱼类鳃中血液的方法
本专利技术涉及生理学领域，尤其涉及一种适用于鱼类生理学实验的方法，具体来说是在鱼类生理学实验中一种去除鱼类鳃中血液的方法。
技术介绍
鱼类生理学实验是研究鱼类对环境的适应性及应激反应的重要手段，是绿色健康水产养殖技术建立的基础，同时也是评价水域环境的重要手段。鳃是鱼类呼吸、离子调节的最重要的场所之一。从组织、细胞以及分子水平研究鱼类鳃上细胞中转运蛋白、催化蛋白的功能是揭示鱼类对外界环境的适应规律，尤其对特殊生境(例如：低氧、盐碱、高氨)的适应机制的重要实验方法。鳃上调控蛋白常以多种亚型形式存在，有些亚型同时在血液中发挥功能。比如鱼类碳酸酐酶中的CAc亚型多存在于鳃及其他组织的上皮细胞中，而CAb亚型则存在于红细胞中。作为血液循环摄氧的重要场所，鳃中血液循环极为活跃，含血量大。研究CAc的功能，首先要去除鳃中的血液排除血液中CAb的干扰。因此如何有效去除鱼鳃中的血液对于揭示碳酸酐酶等蛋白的作用机制尤为重要。目前国内尚没有用于去除鱼鳃中血液的成熟方法，而国外相关实验研究大都采用注射器进行洗涤，工作量和可控性较差。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种去除鱼类鳃中血液的方法，解决了常规测定方法工作量大和可控性差的问题，提高去除效率和效果，为鱼类生理学研究提供基础技术。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术涉及一种去除鱼类鳃中血液专用冲洗装置，所述装置包括放置实验鱼的解剖盘、蠕动泵、缓冲液盛放缸、废液缸、集液槽和PE管；所述PE管一端插入鱼心室中，另一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中；所述集液槽设于解剖盘上，所述集液槽的出口与废液缸相连通。优选的，所述PE管的直径为1.27mm-1.57mm。本专利技术还涉及一种采用本专利技术所述的专用冲洗装置的去除鱼类鳃中血液的方法，所述方法包括如下步骤：1)待麻醉后的实验鱼侧卧鳃盖停止活动后侧放于解剖盘中，由胸鳍处沿腹部中线剪开，露出围心腔，剥离开围心膜；2)在鱼心室上剪一小口，将PE管一端插入鱼心室上的小口，另外一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中，同时在鱼心房处用剪刀剪开一小口；3)打开蠕动泵将缓冲液经PE管泵入鱼血管中，开始冲洗去除鱼鳃中血液，冲洗后的缓冲液由鱼心房上的小口排出经集液槽排入到废液缸中；4)待鳃丝全部有血红色变为白色后代表冲洗完全，停止冲洗。优选的，步骤2)中，鱼心室上的小口的直径为1.5-2.5mm。优选的，步骤2)中，所述将PE管一端插入鱼心室上的小口是沿鱼头部方向向前插入，直至进入鱼静脉窦4。优选的，步骤2)中，所述预冷缓冲液为包含50IU/mL肝素锂和10-5mol/L异丙肾上腺素的0.9％NaCl溶液。优选的，步骤3)中，打开蠕动泵时控制流速在3060mL/min。优选的，所述方法还包括定时向鱼鳃部打入麻醉剂的步骤。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：目前普遍采用的方法是鳃取下后离体洗涤去除血液，去除效果差、不能满足有关生理学实验的要求；而本专利技术引入鱼类解剖学的方法以及蠕动泵等自动化操作方式，能够有效去除鱼类鳃中的血液。附图说明图1为本专利技术的冲洗装置工作示意图；其中，1.实验鱼，2.解剖盘，3.鱼鳃，4.鱼静脉窦，5.鱼心室，6.鱼心房，7.蠕动泵，8.缓冲液盛放缸，9.废液缸，10.集液槽。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。实施例本专利技术涉及一种去除鱼类鳃中血液的方法，其采用的冲洗装置如图1所示，包括放置实验鱼的装有冰块的解剖盘2、蠕动泵7、缓冲液盛放缸8、废液缸9、集液槽10和PE管；所述PE管一端插入鱼心室5中，另一端经蠕动泵7接入到缓冲液盛放缸8中的预冷缓冲液中；所述集液槽10设于解剖盘2上，所述集液槽10的出口与废液缸9相连通。应用上述冲洗装置去除鱼类鳃中血液，如图1所示，具体包括如下步骤：1.将实验鱼1放置于浓度为0.5g/L的MS-222溶液中进行麻醉，待实验鱼侧卧鳃盖停止活动后开始解剖。2.将实验鱼1侧放于盛有冰块的解剖盘2中，用医用手术剪刀由胸鳍处沿腹部中线剪开(50-70cm)，露出围心腔，用小号手术镊小心剥离开围心膜。3.用小号医用剪刀在鱼心室5上剪一小口(直径为2mm左右)，将规格为PE90-160(根据鱼体大小选择PE管直径，多为1.27mm-1.57mm。)PE管一端插入鱼心室5上的小口，沿鱼头部方向向前插入，直至进入鱼静脉窦4，用手术线将PE管固定。4.将PE管另外一端经蠕动泵7接入到缓冲液盛放缸8中的预冷缓冲液(50-500mL，包含50IU/mL肝素锂和10-5mol/L异丙肾上腺素的0.9％NaCl)中，打开蠕动泵7(流速控制在30-60mL/min)将缓冲液经PE管泵入鱼血管中，开始冲洗去除鱼鳃3中血液，同时在鱼心房6处用剪刀剪开一小口，便于将经鱼体内冲洗会的缓冲液排除，排除的冲洗溶液经集液槽10排入到废液缸9中。5.打开鳃盖观察血液去除效果，待鳃丝全部有血红色变为白色后代表去除完全，停止冲洗。6.为了在整个实验过程中保证鱼处于麻醉状态，定时用注射器向鳃部打入一定量的麻醉剂。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去除鱼类鳃中血液专用冲洗装置，其特征在于，所述装置包括放置实验鱼的解剖盘、蠕动泵、缓冲液盛放缸、废液缸、集液槽和PE管；所述PE管一端插入鱼心室中，另一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中；所述集液槽设于解剖盘上，所述集液槽的出口与废液缸相连通。

【技术特征摘要】
1.一种去除鱼类鳃中血液专用冲洗装置，其特征在于，所述装置包括放置实验鱼的解剖盘、蠕动泵、缓冲液盛放缸、废液缸、集液槽和PE管；所述PE管一端插入鱼心室中，另一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中；所述集液槽设于解剖盘上，所述集液槽的出口与废液缸相连通。2.根据权利要求1所述的去除鱼类鳃中血液专用冲洗装置，其特征在于，所述PE管的直径为1.27mm-1.57mm。3.一种采用如权利要求1或2所述的专用冲洗装置的去除鱼类鳃中血液的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)待麻醉后的实验鱼侧卧、鳃盖停止活动后侧放于解剖盘中，由胸鳍处沿腹部中线剪开，露出围心腔，剥离开围心膜；2)在鱼心室上剪一小口，将PE管一端插入鱼心室上的小口，另外一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中，同时在鱼心房处用剪刀剪开一小口；3)打开蠕动泵将缓冲液经PE管泵入鱼血管中，开始...

【专利技术属性】
技术研发人员：么宗利，来琦芳，周凯，高鹏程，李子牛，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31