嘉宝果myb转录因子McMYB与李bHLH转录因子PsbHLH及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种嘉宝果myb转录因子McMYB、蛋白及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供了一种嘉宝果myb转录因子McMYB，所述McMYB的核苷酸序列具有如序列表SEQ ID No.1所示。所述嘉宝果myb转录因子McMYB调控参与嘉宝果花色苷生物合成的myb基因的表达，研究发现McMYB基因表达与不同发育阶段嘉宝果果皮花色苷含量呈正相关，可强烈诱导烟草叶片积累花色苷。这表明本发明专利技术提供的McMYB能有效调控植物花色苷生物合成。嘉宝果myb转录因子McMYB对花色苷生物合成具有转录调控作用，可应用到植物花色苷生物合成中。

【技术实现步骤摘要】
嘉宝果myb转录因子McMYB与李bHLH转录因子PsbHLH及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种嘉宝果myb转录因子McMYB、蛋白及其应用。
技术介绍
嘉宝果(Myrciariacauliflora)原产巴西，果皮中富含花色苷等生物活性物质。花色苷对人体有很好的保健作用，具有预防心血管疾病、神经疾病、癌症、糖尿病和阿兹海默症等疾病以及增强视力敏锐性等功能。植物花色苷生物合成途径是类黄酮合成途径的一个分支，是目前研究较为清楚的次生代谢途径。花色苷合成受转录因子MYB、bHLH和WD40重复蛋白协同调控，MYB、bHLH和WD40重复蛋白形成MBW复合体并结合到花色苷合成途径的结构基因启动子的顺势作用元件上，激活这些结构基因的转录。鉴定出参与嘉宝果花色苷生物合成调控的MYB转录因子，对于阐明嘉宝果果皮积累大量花色苷的转录调控机制具有重要意义，且可应用于其他植物的基因工程改良，提高食物中的花色苷含量，增加食物的保健功能，具有重要的应用价值。但是现有技术中调控嘉宝果花色苷生物合成途径研究较少，还没有报道的有效调控嘉宝果花色苷生物合成的转录因子。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种新的调控花色苷的转录因子，嘉宝果myb转录因子McMYB、蛋白及其应用，所述McMYB的表达量与花色苷的含量呈正相关，利用基因工程技术实现提高植物中花色苷生物合成的含量。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种嘉宝果myb转录因子McMYB，所述McMYB的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.1所示。本专利技术提供了一种用于扩增所述McMYB的引物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.2所示；所述下游引物的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.3所示。本专利技术提供了一种所述McMYB的扩增方法，包括以下步骤：(1)以嘉宝果果皮为材料提取总RNA，以提取的总RNA为模板进行逆转录，得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，得到的PCR产物为McMYB。优选的，所述PCR扩增的反应体系为50μl，所述反应体系如下：Mix液25μl，10μmol/L上游引物2μl，10μmol/L上游引物2μl，cDNA1μl，ddH2O20μl。优选的，所述PCR扩增的反应程序如下：90℃预变性3min；98℃15s，56℃15s和72℃20s，35个循环；72℃5min。本专利技术提供了一种包含所述McMYB的重组载体。本专利技术提供了一种包含所述McMYB或所述重组载体的重组菌。本专利技术提供了一种由所述McMYB表达的蛋白，所述蛋白的氨基酸具有如序列表SEQIDNo.4所示。本专利技术提供的所述McMYB、所述引物、所述方法扩增得到McMYB、所述重组载体、所述重组菌或所述的蛋白在植物花色苷生物合成中的应用。本专利技术提供的嘉宝果myb转录因子McMYB，参与嘉宝果花色苷生物合成调控的myb基因，研究发现McMYB基因表达与不同发育阶段嘉宝果果皮花色苷含量呈正相关。这表明本专利技术提供的McMYB能有效调控植物花色苷生物合成。本专利技术提供的所述McMYB、所述引物、所述方法扩增得到McMYB、所述重组载体、所述重组菌或所述的蛋白在植物花色苷生物合成中的应用。诱导花色苷积累分析研究表明，在烟草叶片中瞬时过量表达McMYB，可使叶片中积累花色苷，着紫红色。本专利技术提供的嘉宝果McMYB对花色苷生物合成具有转录调控作用，可应用到植物花色苷生物合成的基因工程中。附图说明图1为不同发育阶段嘉宝果果皮中花色苷含量及McMYB基因表达模式分析；图2为不同处理组的烟草瞬时过表达McMYB情况。具体实施方式本专利技术提供了一种嘉宝果myb转录因子McMYB，所述McMYB的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.1所示。所述myb转录因子McMYB的生物来源为嘉宝果。所述McMYB的核苷酸序列长度为732bp。本专利技术提供了一种用于扩增所述McMYB的引物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.2所示；所述下游引物的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.3所示。本专利技术对所述引物的来源没有特殊限制，委托本领域所熟知的引物合成公司即可。在本专利技术实施例中，所述引物委托尚亚生物公司合成。本专利技术提供了一种所述McMYB的扩增方法，包括以下步骤：(1)以嘉宝果果皮为材料提取总RNA，以提取的总RNA为模板进行逆转录，得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，用所述的引物进行PCR扩增，得到的PCR产物为McMYB。在本专利技术中，所述嘉宝果果皮优选为黑色果皮。所述提取总RNA的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的总RNA提取试剂盒法即可。本专利技术对所述总RNA提取试剂盒的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的试剂盒即可。在本专利技术实施例中，所述总RNA提取试剂盒购自OmegaBio-tek的EZNAPlantRNAKit。在本专利技术中，所述逆转录的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的逆转录试剂盒即可。本专利技术对所述逆转录试剂盒的种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的逆转录试剂盒即可。在本专利技术实施例中，所述逆转录试剂盒购自Fermentas公司生产的First-StrandcDNASynthesisKit。在本专利技术中，所述PCR扩增的反应体系优选为50μl，所述反应体系优选如下：Mix液25μl，10μmol/L上游引物2μl，10μmol/L上游引物2μl，cDNA1μl，ddH2O20μl。所述PCR扩增的反应程序优选如下：90℃预变性3min；98℃15s，56℃15s和72℃20s，35个循环；72℃5min。在本专利技术中，将得到的PCR产物进行测序，得到McMYB的核苷酸序列。本专利技术对测序的方法没有特殊限制，委托本领域所熟知的测序公司即可。在本专利技术实施例中，所述测序委托尚亚生物公司进行。为了研究所述McMYB的表达水平，本专利技术优选提供了采用实时荧光定量法对所述McMYB进行扩增。所述采用实时荧光定量法对所述McMYB进行扩增用引物优选采用荧光定量检测引物。所述荧光定量检测引物包括正向引物和反向引物。所述正向引物的核苷酸序列具有如序列表中CTTCTCGAAGAGCTCGGCAT(SEQIDNo.5)和GGTGTGGAGTCCTTCGTCAG(SEQIDNo.6)所示。所述反向引物的核苷酸序列具有如序列表中SEQIDNo.6所示。所述荧光定量法对所述McMYB进行扩增的反应程序优选如下：95℃5min；95℃5s，退火15s，72℃30s，40个循环。本专利技术优选以嘉宝果actin为内参基因，引物为TGCAGACAGGATGAGCAAGG(SEQIDNo.7)和ACCGGATTCATCGTACTCGC(SEQIDNo.8)。本专利技术提供了一种包含所述McMYB的重组载体。所述重组载体中的载体优选为pCAMBIA1302。所述重组载体中，McMYB和载体的连接多克隆位点为NcoI酶和BstEII酶的酶切位点。在本专利技术中，所述包含所述McMYB的重组载体的制备方法，优选包括以下步骤：A.以上述方案得到的PCR产物为模板，用带接头的特异性引物进行扩增，得到带接头的McMYB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嘉宝果myb转录因子McMYB，其特征在于，所述McMYB的核苷酸序列具有如序列表SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种嘉宝果myb转录因子McMYB，其特征在于，所述McMYB的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.1所示。2.一种用于扩增权利要求1所述McMYB的引物，包括上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.2所示；所述下游引物的核苷酸序列具有如序列表SEQIDNo.3所示。3.一种权利要求1所述McMYB的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以嘉宝果果皮为材料提取总RNA，以提取的总RNA为模板进行逆转录，得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，用权利要求2所述的引物进行PCR扩增，得到的PCR产物为McMYB。4.根据权利要求3所述的扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为50μl，所述反应体系如下：Mix液25μl，10...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雅玲，方智振，叶新福，
申请(专利权)人：福建省农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35