一种建立昆虫细胞系的方法技术

本发明专利技术提供了一种建立昆虫细胞系的方法，所述方法包括以下步骤：1)在昆虫细胞培养液中培养昆虫组织，以获得分散的原代昆虫细胞；2)物理性低氧诱导或化学性低氧诱导步骤1)所获得的原代细胞；3)半量更换昆虫细胞培养液后，对步骤2)的原代细胞进行复氧，直至观察到细胞不断增殖布满整个瓶底；所述复氧条件为：在25‑28℃、复氧诱导10‑30天；4)传代培养步骤3)获得的细胞，获得能够连续传代的细胞，从而建立昆虫细胞系；整个过程都是在无菌条件下进行。与现有技术相比，本发明专利技术的方法显著提升了昆虫原代细胞建系成功率以及缩短了昆虫建系前所需的培养时间。

【技术实现步骤摘要】
一种建立昆虫细胞系的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种建立昆虫细胞系的方法，具体地，本专利技术涉及通过低氧-复氧诱导促进原代昆虫细胞转化，从而建立昆虫细胞系的方法。
技术介绍
昆虫是世界上种类最多的生物群体，有着丰富的细胞遗传学系统。在农业、医学、生物学等领域中，昆虫细胞系的使用越来越普遍。昆虫细胞系是生理学、发育生物学、细胞生物学、分子生物学、生物化学和遗传学等学科的重要研究工具；作为昆虫细胞/杆状病毒表达载体中的一部分，可以表达具有重大经济价值和科学意义的重组蛋白质，用于生物杀虫剂的合成以及作为研究细胞自噬等的模型。昆虫细胞系近年来虽然得到了很大的发展，但是大部分细胞系的建立都是依靠体外培养的细胞自发发生转化形成，并且在长期的培养过程中容易因污染而导致建系失败。虽然，也有少部分人工诱导体外培养细胞转化获得昆虫细胞系的一种重要手段，包括：化学(MNNG等诱变剂)、物理(射线)、生物(病毒)等，但此类方法具有随机性和建系成功率低等缺点。因此，当前对高效、快速地建立昆虫细胞系的方法存在需求。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的是针对当前传统的建立昆虫细胞系的方法费时费力、成功率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种建立昆虫细胞系的方法，所述方法包括以下步骤：1)在昆虫细胞培养液中培养昆虫组织，以获得分散的原代昆虫细胞；2)物理性低氧诱导或化学性低氧诱导步骤1)所获得的原代细胞；所述物理性低氧诱导的条件为：25‑28℃，0.5‑10％的氧气浓度下诱导3‑15天；所述化学性低氧诱导的条件为：25‑28℃，诱导3h～48h；3)半量更换昆虫细胞培养液后，对步骤2)的原代细胞进行复氧，直至观察到细胞不断增殖布满整个瓶底；所述复氧条件为：在25‑28℃、通入空气诱导10‑30天；4)传代培养步骤3)获得的细胞，获得能够连续传代的细胞，从而建立昆虫细胞系；整个过程都是在无菌条件下进行。

【技术特征摘要】
1.一种建立昆虫细胞系的方法，所述方法包括以下步骤：1)在昆虫细胞培养液中培养昆虫组织，以获得分散的原代昆虫细胞；2)物理性低氧诱导或化学性低氧诱导步骤1)所获得的原代细胞；所述物理性低氧诱导的条件为：25-28℃，0.5-10％的氧气浓度下诱导3-15天；所述化学性低氧诱导的条件为：25-28℃，诱导3h～48h；3)半量更换昆虫细胞培养液后，对步骤2)的原代细胞进行复氧，直至观察到细胞不断增殖布满整个瓶底；所述复氧条件为：在25-28℃、通入空气诱导10-30天；4)传代培养步骤3)获得的细胞，获得能够连续传代的细胞，从而建立昆虫细胞系；整个过程都是在无菌条件下进行。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述昆虫组织来自鳞翅目和双翅目的昆虫；优选地，所述昆虫组织选自所述昆虫的卵巢组织、精巢组织、胚胎组织、成虫盘组织、血细胞组织、中肠组织或脂肪体组织中的一种或多种；更优选地，所述昆虫组织为甜菜夜蛾蛹的卵巢组织或斜纹夜蛾蛹的卵巢组织。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)包括以下步骤：解剖昆虫组织，置于含有昆虫细胞培养液的带透气瓶盖的培养瓶中，于27℃培养，以获得分散的原代昆虫细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)是通过包括以下步骤的方法完成：1.1将昆虫表面消毒，用无菌蒸馏水清洗昆虫后，再吸干昆虫表面的水分；优选地，所述表面消毒为将昆虫浸没在2-4％(体积比)的次氯酸溶液中4-6分钟，然后在75％(体积比)的乙醇溶液中浸没10-20分钟；更优选地，所述表面消毒为将昆虫浸没在3％(体积比)的次氯酸溶液中5分钟，然后在75％(体积比)的乙醇溶液中浸没15分钟；优选地，所述昆虫选自鳞翅目和双翅目的昆虫；1.2解剖昆虫，取出昆虫的组织；优选地，所述组织为所述昆虫的卵巢组织、精巢组织、胚胎组织、成虫盘组织、血细胞组织、中肠组织和/或脂肪体组...

【专利技术属性】
技术研发人员：张寰，唐凯，秦启联，张继红，孟茜，李瑄，李苗苗，于旭鹏，
申请(专利权)人：中国科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11