本发明专利技术涉及一种耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法及应用。其特征是首先筛选出高效氨氧化细菌，然后对氨氧化细菌进行耐冷性驯化得到耐冷氨氧化细菌，其次再制得生物炭球，并将制得的数个生物炭球置于耐冷氨氧化细菌富集液中得到耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球。上述所述的挂膜生物炭球应用于低温条件氨氮污染水体净化。其优点在于利用环境友好的粘土和生物炭制备的生物炭球作为载体，制备耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球不但能够在低温条件下较好的降解氨氮，且可特别应用于流动的自然水体，并能保证充足的生物量和停留时间，以达到氨氮降解的目的。在温度为15℃的条件下进行动态去除，每5天进行一次氨氮浓度的测定，氨氮的去除率约为80%。
【技术实现步骤摘要】
耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法及应用本申请为2015100864643《一种耐盐耐冷氨氧化细菌固定化方法和应用》的分案申请，申请日为2015年2月17日。
本专利技术属于水污染治理技术，具体涉及一种耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法及应用。
技术介绍
氨氮过高是水体富营养化的主要因素之一，是水污染控制的主要指标。目前国内外针对氨氮的去除方法主要包括物理方法、化学方法和生物方法。物理方法只能实现污染物在空间上的位移，不能实现彻底的去除；化学方法快速有效，但由于引进化学药剂，处理不当会对水体构成二次污染；生物方法利用微生物的代谢将氨氮转化为氮气，实现污染物的去除，同时不会对环境构成二次污染，被广泛的认可。生物方法较物理方法和化学方法相比最大的特点是处理成本低，处理效果好，不会造成二次污染。一种处理氨氮废水的方法（CN102001721A）的国家专利技术，该方法在微波场辐照氨氮废水和活性炭的混合液进行脱除氨氮，该方法去除效率高，但只改变了氨氮的存在形态，没有彻底去除，并且该方法不适用于自然地表水体。利用微生物降解水体中的氨氮受到诸如温度等环境条件的影响，造成降解效率的降低。低温环境会影响微生物酶的活性和繁殖速率，抑制对氨氮的去除。目前文献报道氨氧化细菌的最适生长温度为30℃-35℃，对于北方寒冷地区，特别是诸如辽河湿地这样的面积广阔的自然湿地，低温条件不利于氨氧化细菌对氨氮的降解。目前已有专利（CN102268386A）筛选出一株降解效果好的氨氧化细菌，在温度为30℃的实验室培养条件下，该菌株的氨氧化效率可达90%，该方法筛选出的氨氧化细菌的最佳温度高，不能在低温环境产生较好的去除效果。一种耐低温硝化细菌的筛选方法(CN102286390A)的国家专利技术专利，通过该方法筛选出的氨氧化细菌（专利中称亚硝酸细菌）能够在温度为10℃-15℃的条件下保持其硝化效果。然而，高效菌剂在自然水体中的投加也是一个十分重要的问题。通过培养驯化获得的高效菌剂投加在固定容积的反应器中，可通过改变反应器内的条件能够获得较好的降解效果。但应用于流动态的自然河流中，随着水体的流动，菌剂在水体中冲散，不能保证足够的停留时间和足够的微生物浓度，不能实现较好的去除效果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法及应用，以克服现有技术存在的问题。本专利技术首先考虑到位于我国北方的辽河口湿地，常年处于低温状态。然而，利用已有的传统物理、化学和生物方法无法达到较好的修复效果，且治理成本高。所以从湿地沉积物中筛选、驯化的耐冷氨氧化细菌处理辽河水体中的氨氮，不但处理效果好、费用低，而且因地制宜，不会对原有的生态环境构成威胁。又考虑到在流动态的自然河流中，随着水体的流动，耐性降解菌在水体中冲散，不能保证足够的停留时间和足够的微生物浓度，从而不能实现较好的去除效果菌剂，在自然水体中的投加也是一个十分重要的问题。所以本专利技术提出耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球技术，能够保证微生物不会被水流冲散和单位体积的微生物量的同时，对耐冷氨氧化细菌具有保护作用，实现氨氮的高效去除。一种耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法，首先筛选出高效氨氧化细菌，然后对氨氧化细菌进行耐冷性驯化得到耐冷氨氧化细菌，其次将制得的数个生物炭球置于耐冷氨氧化细菌富集液中得到挂膜生物炭球。上述所述的高效氨氧化细菌的筛选方法，包括如下步骤：（1）富集培养：称取干重10g-20g的沉积物，加入到一个盛有100mL富集培养基的250mL锥形瓶中，于150r/min-200r/min，28℃-30℃的条件下震荡培养数天后吸取10mL至另一个富集培养基中，于上述条件震荡培养数天，如此重复上述步骤3次以提高氨氧化细菌的浓度，最终得到氨氧化细菌富集液；上述富集培养基为：(NH4)2SO45.5g，CaCO35.5g，NaCl2.0g，MgSO40.5g，K2HPO41.5g，MnSO40.01g，FeSO40.02g，蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=8.0，121℃灭菌30min；（2）纯化分离：将上述氨氧化菌富集液按10-1-10-7梯度进行稀释，涂布在固体培养基上，于28℃-30℃培养数天，待菌落长成后，挑选不同形态的菌落在另一个固体培养基上进行反复划线，直到生成的菌落为不同种单一形态的单一菌，分离得到多株纯种氨氧化细菌，上述步骤3中的固体培养基：NH4SO42g，NaH2PO40.25g，MgSO4·7H2O0.03g，MnSO4·4H2O0.01g，K2HPO40.75g，NaCl0.01g，CaCO35g，琼脂20g蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=7.2，121℃灭菌30min。上述所述的氨氧化细菌的耐盐和耐冷性驯化方法，包括如下步骤：耐盐和耐冷性驯化：将上述筛选出的氨氧化细菌以富集液与富集培养基5%的接种量接种到一个100mL盐度为20‰的富集培养基中，依次于25℃、20℃、15℃和10℃，150r/min-180r/min的条件下震荡培养数天，筛选出对氨氮降解效果好的氨氧化细菌即为耐冷氨氧化细菌。上述所述生物炭球挂膜方法：将生物炭球置于上述耐冷氨氧化细菌富集液中浸泡4-6天，得到挂膜生物炭球。上述所述的生物炭球的制备方法，包括如下步骤：（1）取秸秆洗净，烘干至恒重，将秸秆粉碎后过筛，得到秸秆粉末，经过马弗炉烧制成生物炭；（2）将上述烧制的生物炭用去离子水清洗若干次，并利用0.1mol/L的硝酸作为改性剂，在200r/min的磁力搅拌条件下，使上述改性剂与生物炭充分混匀，进行改性一天后，再用去离子水清洗至pH为中性得到化学改性生物炭；再将上述的化学改性生物炭置于频率40KHz的微波清洗仪中微波震荡40min-90min，过滤，恒温干燥后得到物化改性生物炭；（3）再将粘土在恒温干燥箱中干燥，过100目-200目筛得到粘土粉末；（4）将上述物化改性的生物炭与粘土粉末按质量比为（0.5-1）：10的比例混合后，加入到硅酸钠和碳酸氢钠用去离子水溶解的混合液中，用制球机制成球粒后，再置于恒温干燥箱中干燥，最后置于马弗炉烧制成生物炭球，上述硅酸钠与粘土质量比为3%，碳酸氢钠与粘土质量比为1.5%。上述所述的马弗炉的烧制条件皆为：升温速度10℃/min,温度为300℃-400℃和保温时间180min，恒温干燥条件皆为60℃-80℃条件下干燥8h-12h。上述所述的挂膜生物炭球应用于低温条件氨氮污染水体净化。其优点在于利用环境友好的粘土和生物炭制备的生物炭球作为载体，制备耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球。该挂膜生物炭球不但能够在低温条件下较好的降解氨氮，且可特别应用于流动的自然水体，并能保证充足的生物量和停留时间，以达到氨氮降解的目的。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术作进一步详细说明。实施例1对某河流受污较严重区域进行采样，通过检测氨氮浓度达3.4mg/L，采用耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球方法在温度为10℃的条件下对水体中的氨氮进行静态处理，包括步骤如下：首先，筛选出高效氨氧化细菌：称取干重20g的沉积物，加入到一个盛有100mL富集培养基的250mL锥形瓶中，于200r/min，30℃的条件下震荡培养数天后吸取10mL至另一个富集培养基中，于上述条件震荡培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法，其特征是首先筛选出高效氨氧化细菌，然后对氨氧化细菌进行耐冷性驯化得到耐冷氨氧化细菌，其次再制得生物炭球，并将制得的数个生物炭球置于耐冷氨氧化细菌富集液中得到耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球；上述高效氨氧化细菌的筛选方法，包括如下步骤：（1）富集培养：称取干重10g‑20g的沉积物，加入到一个盛有100mL富集培养基的250mL锥形瓶中，于150r/min‑200r/min，28℃‑30℃的条件下震荡培养数天后吸取10mL至另一个富集培养基中，于上述条件震荡培养数天，如此重复上述步骤3次以提高氨氧化细菌的浓度，最终得到氨氧化细菌富集液；上述富集培养基为：(NH4)2SO4 5.5g，CaCO3 5.5g，NaCl 2.0g，MgSO4 0.5g，K2HPO4 1.5g，MnSO4 0.01g，FeSO4 0.02g，蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=8.0，121℃灭菌30min；（2）纯化分离：将上述氨氧化菌富集液按10‑1‑10‑7梯度进行稀释，涂布在固体培养基上，于28℃‑30℃培养数天，待菌落长成后，挑选不同形态的菌落在另一个固体培养基上进行反复划线，直到生成的菌落为不同种单一形态的单一菌，分离得到多株纯种氨氧化细菌，上述培养基为：NH4SO4 2g，NaH2PO4 0.25g，MgSO4·7 H2O 0.03g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 0.75g，NaCl 0.01g，CaCO3 5g，琼脂 20g蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=7.2，121℃灭菌30min；上述氨氧化细菌的耐盐耐冷性驯化方法，包括以下步骤：将上述筛选出的氨氧化细菌以富集液与富集培养基5%的接种量接种到一个100mL盐度为20‰的富集培养基中，依次于25℃、20℃、15℃和10℃，150r/min‑180r/min的条件下震荡培养数天，筛选出对氨氮降解效果好的氨氧化细菌即为耐冷氨氧化细菌；上述生物炭球的制备方法，包括如下步骤：（1）取秸秆洗净，烘干至恒重，将秸秆粉碎后过筛，得到秸秆粉末，经过马弗炉烧制成生物炭；（2）将上述烧制的生物炭用去离子水清洗若干次，并利用0.1mol/L的硝酸作为改性剂，在200r/min的磁力搅拌条件下，使上述改性剂与生物炭充分混匀，进行改性一天后，再用去离子水清洗至pH为中性得到化学改性生物炭；再将上述的化学改性生物炭置于频率40KHz的微波清洗仪中微波震荡40min‑90min，过滤，恒温干燥后得到物化改性生物炭；（3）再将粘土在恒温干燥箱中干燥，过100目‑200目筛得到粘土粉末；（4）将上述物化改性的生物炭与粘土粉末按质量比为（0.5‑1）：10的比例混合后，加入到硅酸钠和碳酸氢钠用去离子水溶解的混合液中，用制球机制成球粒后，再置于恒温干燥箱中干燥，最后置于马弗炉烧制成生物炭球，上述硅酸钠与粘土质量比为3%，碳酸氢钠与粘土质量比为1.5%；上述生物炭球挂膜方法，包括以下步骤：将生物炭球置于上述耐冷氨氧化细菌富集液中浸泡4‑6天，得到耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球。...
【技术特征摘要】
1.耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球的制备方法，其特征是首先筛选出高效氨氧化细菌，然后对氨氧化细菌进行耐冷性驯化得到耐冷氨氧化细菌，其次再制得生物炭球，并将制得的数个生物炭球置于耐冷氨氧化细菌富集液中得到耐冷氨氧化细菌挂膜生物炭球；上述高效氨氧化细菌的筛选方法，包括如下步骤：（1）富集培养：称取干重10g-20g的沉积物，加入到一个盛有100mL富集培养基的250mL锥形瓶中，于150r/min-200r/min，28℃-30℃的条件下震荡培养数天后吸取10mL至另一个富集培养基中，于上述条件震荡培养数天，如此重复上述步骤3次以提高氨氧化细菌的浓度，最终得到氨氧化细菌富集液；上述富集培养基为：(NH4)2SO45.5g，CaCO35.5g，NaCl2.0g，MgSO40.5g，K2HPO41.5g，MnSO40.01g，FeSO40.02g，蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=8.0，121℃灭菌30min；（2）纯化分离：将上述氨氧化菌富集液按10-1-10-7梯度进行稀释，涂布在固体培养基上，于28℃-30℃培养数天，待菌落长成后，挑选不同形态的菌落在另一个固体培养基上进行反复划线，直到生成的菌落为不同种单一形态的单一菌，分离得到多株纯种氨氧化细菌，上述培养基为：NH4SO42g，NaH2PO40.25g，MgSO4·7H2O0.03g，MnSO4·4H2O0.01g，K2HPO40.75g，NaCl0.01g，CaCO35g，琼脂20g蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=7.2，121℃灭菌30min；上述氨氧化细菌的耐盐耐冷性驯化方法，包括以下步骤：将上述筛选出的氨氧化细菌以富集液与富集培养基5%的接种...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄潇，李岿然，党佳佳，李辉，赵阳国，白洁，张颖，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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