含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含干细胞因子的明胶‑透明质酸‑壳聚糖电纺膜制备方法，包括如下步骤：制备干细胞因子的步骤；配制溶剂的步骤：配制0.5％透明质酸溶液，配制20％明胶溶液，配制0.5％壳聚糖溶液；配制电纺液的步骤：将明胶溶液、透明质酸溶液、壳聚糖溶液按体积比为8：1：1或7：2：1或6：3：1混合，将干细胞因子以0.5g/L浓度加入混合液中，均匀混合后得到电纺液；静电纺丝的步骤。干细胞因子均匀分布于电纺膜中，且膜溶于水后降解时间也可以控制，降解后小分子透明质酸可被皮肤吸收起到较好的保水作用，壳聚糖具有较好的抗菌作用，明胶分子可促进表皮细胞外基质合成释放；电纺膜降解后干细胞因子释放被皮肤吸收，可促进皮肤修复，延缓衰老。

【技术实现步骤摘要】
含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜制备方法
本专利技术涉及生物材料
，尤其是关于一种能够用于皮肤修复、美容护肤的可降解吸收修复面膜的制备方法。
技术介绍
市面上面膜产品多种多样，但同时也存在很多问题，如含有化学增白剂、增稠剂以及防腐剂和香精等，短期内可能有一定美白补水效果，但长期来看对皮肤的损伤较大。无论是面膜纸还是面膜膏，使用之后都需要清洗，比较麻烦。即使是市面上有售的免清洗面膜，因其中含有大量高分子胶体或增稠剂，所以残留在皮肤上极不舒服又影响皮肤的正常呼吸。因此，有必要设计出一种能够满足广大使用者需求的可降解免清洗的面膜。透明质酸俗称玻尿酸，是自然界中最好的保水材料。明胶是胶原的变性物，与胶原有着类似的结构。壳聚糖具有较好的抗菌性，通过静电纺丝的方式可将这三种生物材料纺成膜，其溶于水易降解，且降解产物无毒害。
技术实现思路
本专利技术提供一种新的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜制备方法。本专利技术提供一种含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜制备方法，包括如下步骤：制备干细胞因子的步骤；配制溶剂的步骤：1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和蒸馏水按体积比1:1作溶剂配制0.5％透明质酸溶液，以1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇作溶剂配制20％明胶溶液，以1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇作溶剂配制0.5％壳聚糖溶液；配制电纺液的步骤：将20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液、0.5％壳聚糖溶液按体积比为8：1：1或7：2：1或6：3：1混合，将干细胞因子以0.5g/L浓度加入混合液中，均匀混合后得到电纺液；静电纺丝的步骤：将所述电纺液高压静电纺丝，得到含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖静电纺膜。，壳聚糖为蟹壳壳聚糖，脱乙酰度为98％。明胶为牛皮B型明胶。透明质酸是分子量为2～4×105Da低分子透明质酸钠。干细胞因子为收集经检测合格的人脂肪干细胞所分泌的干细胞相关因子。所述的制备干细胞因子的步骤中，将生长良好并经检测合格的人脂肪干细胞换磷酸盐缓冲液(PBS)培养，收集上清，冷冻干燥后得到所述干细胞因子。所述的制备干细胞因子的步骤中，从获取的人脂肪组织分离脂肪干细胞，进行常规培养传代，四代以后的细胞用于干细胞因子提取；在脂肪干细胞完全长满培养表面后换磷酸盐缓冲液进行培养，收集上清，离心，去除细胞碎片，冷冻干燥后得到干细胞因子冻干粉。所述配制电纺液的步骤中，电纺液搅拌时间为4h，搅拌速度为500rpm。所述静电纺丝的步骤中，通过高压静电纺丝装置进行高压静电纺丝，所述高压静电纺丝装置包括高压电源、喷射装置及接收装置，静电纺丝的温度是20～26℃，静电纺丝电压是7kv～12kv，所述喷射装置中所需针头型号为20或21号，所述针头与接收装置的距离为10～12cm，所述喷射装置送液速度为0.2～0.8ml/h。电压由高压电源提供。所述静电纺丝的温度为24℃，所述静电纺丝的电压为8kv，所述喷射装置中所需针头型号为20号，所述针头与接收装置的距离为12cm，所述喷射装置送液速度为0.2ml/h。20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液和0.5％壳聚糖溶液的体积比为6:3:1。本专利技术的有益效果是：干细胞因子均匀分布于电纺膜中，且膜溶于水后降解时间也可以控制，降解后小分子透明质酸可被皮肤吸收起到较好的保水作用，壳聚糖具有较好的抗菌作用，明胶分子可促进表皮细胞外基质合成释放；电纺膜降解后干细胞因子释放被皮肤吸收，可促进皮肤修复，延缓衰老。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。实施例1：将检测合格的人脂肪干细胞换PBS培养48h后，收集上清，冷冻干燥得干细胞因子冻干粉。按1:1体积比配好1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和蒸馏水作溶剂，取透明质酸0.01g加入溶剂2ml磁力搅拌4h得到0.5％透明质酸溶液。取明胶2g加入溶剂1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇10ml得到20％明胶溶液。取壳聚糖0.01g加入溶剂1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇2ml得到0.5％壳聚糖溶液。按体积比8：1：1的比例，分别取20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液和0.5％壳聚糖溶液5.6ml、0.7ml、0.7ml配置混合液，并在混合液中加入3.5mg干细胞因子，均匀混合后得到电纺液。电纺液在由高压电源、溶液储存装置、喷射装置与接收装置组成的高压静电纺丝装置中进行静电纺丝，静电纺丝电压8.21kv、本实施例用10ml注射器、20号针头、针头距接收装置12cm、注射泵送液速度0.8ml/h、环境温度24℃。进行静电纺丝后得到含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜。本实施例中，混合液有7ml，干细胞因子有3.5mg，相当于干细胞因子的浓度为0.5g/L。实施例2：将检测合格的人脂肪干细胞换PBS培养48h后，收集上清，冷冻干燥得干细胞因子冻干粉。按1:1体积比配好1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和蒸馏水作溶剂，取透明质酸0.015g加入溶剂3ml磁力搅拌4h得到0.5％透明质酸溶液。取明胶2g加入溶剂1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇10ml得到20％明胶溶液。取壳聚糖0.01g加入溶剂1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇2ml得到0.5％壳聚糖溶液。按体积比7:2:1，分别取20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液和0.5％壳聚糖溶液4.9ml、1.4ml、0.7ml配置混合液，并在混合液中加入3.5mg干细胞因子，均匀混合后得到电纺液。电纺液在由高压电源、溶液储存装置、喷射装置与接收装置组成的高压静电纺丝装置中进行静电纺丝，静电纺丝电压8.86kv、本实施例用10ml注射器、21号针头、针头距接收装置12cm、注射泵送液速度0.2ml/h、环境温度23℃。进行静电纺丝后得到含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜。实施例3：将检测合格的人脂肪干细胞换PBS培养48h后，收集上清，冷冻干燥得干细胞因子冻干粉。按1:1体积比配好1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和蒸馏水作溶剂，取透明质酸0.015g加入溶剂3ml磁力搅拌4h得到0.5％透明质酸溶液。取明胶2g加入溶剂1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇10ml得到20％明胶溶液。取壳聚糖0.01g加入溶剂1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇2ml得到0.5％壳聚糖溶液。按体积比6:3:1，分别取20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液和0.5％壳聚糖溶液4.2ml、2.1ml、0.7ml配置混合液，并在混合液中加入3.5mg干细胞因子，均匀混合后得到电纺液。电纺液在由高压电源、溶液储存装置、喷射装置与接收装置组成的高压静电纺丝装置中进行静电纺丝，静电纺丝电压8.35kv、本实施例用10ml注射器、20号针头、针头距接收装置12cm、注射泵送液速度0.2ml/h、环境温度24℃。进行静电纺丝后得到含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜。本申请人研究表明，干细胞起修复作用，除干细胞分化替代损伤细胞外，干细胞旁分泌的干细胞相关因子(如表皮生长因子、内皮细胞生长因子等)也起到很关键的修复作用。因此，本专利技术能够制备一种含干细胞因子的可降解吸收的生物膜，其既易保存，又不含防腐剂，降解的透明质酸能够起到很好的保水作用，被吸收的干细胞因子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含干细胞因子的明胶‑透明质酸‑壳聚糖电纺膜制备方法，其特征在于:包括如下步骤：制备干细胞因子的步骤；配制溶剂的步骤：1,1,1,3,3,3‑六氟‑2‑丙醇和蒸馏水按体积比1:1作溶剂配制0.5％透明质酸溶液，以1,1,1,3,3,3‑六氟‑2‑丙醇作溶剂配制20％明胶溶液，以1,1,1,3,3,3‑六氟‑2‑丙醇作溶剂配制0.5％壳聚糖溶液；配制电纺液的步骤：将20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液、0.5％壳聚糖溶液按体积比为8：1：1或7：2：1或6：3：1混合，将干细胞因子以0.5g/L浓度加入混合液中，均匀混合后得到电纺液；静电纺丝的步骤：将所述电纺液高压静电纺丝，得到含干细胞因子的明胶‑透明质酸‑壳聚糖静电纺膜。

【技术特征摘要】
1.一种含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖电纺膜制备方法，其特征在于:包括如下步骤：制备干细胞因子的步骤；配制溶剂的步骤：1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和蒸馏水按体积比1:1作溶剂配制0.5％透明质酸溶液，以1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇作溶剂配制20％明胶溶液，以1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇作溶剂配制0.5％壳聚糖溶液；配制电纺液的步骤：将20％明胶溶液、0.5％透明质酸溶液、0.5％壳聚糖溶液按体积比为8：1：1或7：2：1或6：3：1混合，将干细胞因子以0.5g/L浓度加入混合液中，均匀混合后得到电纺液；静电纺丝的步骤：将所述电纺液高压静电纺丝，得到含干细胞因子的明胶-透明质酸-壳聚糖静电纺膜。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备干细胞因子的步骤中，将生长良好并经检测合格的人脂肪干细胞换磷酸盐缓冲液培养，收集上清，冷冻干燥后得到所述干细胞因子。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备干细胞因子的步骤中，从获取的人脂肪组织分离脂肪干细胞，进行常规培养传代，四代以后的细胞用于干细胞因子提取；在脂肪干细胞完全长满培养表面后换磷酸盐缓冲液进行培养，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱艳霞，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44