一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种粉叶金花的组织培养快速繁殖方法，其采用具有优良性状母株当年萌发带有叶芽的茎段作为外植体，经过清洗、灭菌后接种于不定芽诱导培养基中培养，经过20‑30天的不定芽诱导培养后，将不定芽转接于增殖培养基中进增殖培养，经过35‑40d的培养后增殖倍率可以达到4‑5倍。最后将增殖后的芽体分株接种于生根壮苗培养基中进行生根壮苗诱导培养，经过60天的壮苗培养生根率可达到100%。本发明专利技术可以在一个周期120‑130天内使粉叶金花幼苗扩大4‑5倍，较传统的扦插繁殖时间缩短一半以上，且不受季节、气候及用地方面的条件限制，且苗木质量优良，数量充足，可以快速满足市场对园林造景绿化的需求。

Tissue culture and rapid propagation of golden leaf

The invention discloses a tissue culture and rapid propagation method of Flos Lonicerae, in which the stem segments with leaf buds which have good characteristics are used as explants, after being cleaned and sterilized, the adventitious buds are inoculated in adventitious bud induction medium and cultured, and after 20 to 30 days of adventitious buds induction and culture, the adventitious buds are transferred to multiplication. The proliferation rate of culture medium reached 4 - 5 times after 35 - 40d culture. Finally, the proliferated shoot ramets were inoculated in the medium of rooting strong seedlings to induce the rooting strong seedlings. After 60 days, the rooting rate of the strong seedlings could reach 100%. The invention can enlarge the seedlings of Flos Lonicerae in a period of 120 to 130 days by 4 to 5 times, shorten the propagation time by more than half compared with the traditional cutting, and is not limited by the season, climate and land use conditions. The seedlings have good quality and sufficient quantity, and can quickly meet the market demand for landscaping and greening.

【技术实现步骤摘要】
一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法
本专利技术涉及植物组织培养的
，特别是指一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
粉叶金花，学名Mussaendahybridacv.Alicia，别名粉萼花、粉纸扇，原产热带非洲、亚洲，属茜草科植物。株高1～2米，生性强健，喜高温，耐旱。萼片肥大，盛开时满株粉红色，非常醒目，花期夏至秋冬。多年来只在野外或热带、亚热带植物园中有栽培，随着近年来园林绿化的兴起，粉叶金花具有叶色翠绿、生长快速、花姿美、花期长适应性强；适宜盆栽、花槽栽植、单植、列植、或群植于庭院中的种种特点越来越得到人们的喜爱。是南方夏季的莳花之一,也是造园添景的理想灌木。同属的还有红叶金花、玉叶金花，株型类似，花色不同。传统的繁殖方法为扦插繁殖，扦插时间通常在2月底3月初，因粉叶金花在冬季与春季交接时间段不开花并准备萌发新芽，这是繁殖最佳时间。所以扦插繁殖不仅受季节气候的影响，其产量也难以满足日益增长的园林绿化造景需求。通过植物组织培养技术可以很好的解决这一问题，但是由于长期得不到重视，导致这一优良的造景植物在各个方面的研究都比较滞后，所以本专利技术通过植物培养方法，工业化生产优良种苗以填补此方面研究的空白。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法，填补粉叶金花组织培养方面研究的空白，解决传统粉叶金花扦插繁殖增殖率低，繁殖周期长及成本高等问题，实现粉叶金花工业化快速繁育。为了达成上述目的，本专利技术的解决方案是：一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：步骤A、不定芽诱导：采取健壮粉叶金花当年生带有腋芽的茎段作为外植体，先对外植体进行清洗、消毒，接入不定芽诱导培养基中培养，光照强度1500-2000Lux，光照时间10h/d，温度23±2℃，培养20-30天；步骤B、增殖培养：将步骤A诱导出的不定芽切下后，接入增殖培养基中进增殖培养，培养条件为温度为23±2℃，光照10h/d，培养周期40天；步骤C、壮苗生根培养：将步骤B增殖后的芽体分株切下，然后接种于壮苗生根培养基中，培养周期60天。进一步，步骤A中外植体的清洗、消毒方法为：将采集的幼嫩枝条用家用清水清洗后用洗衣粉饱和澄清液浸泡12h，冲洗干净后转移至超净工作台中用75％的酒精溶液清洗10s，清洗过程中轻微摇晃使外植体充分与酒精溶液接触，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍，再用10％次氯酸钠溶液清洗8min，无菌蒸馏水冲洗3遍，最后用0.1％升汞溶液再清洗8min，无菌蒸馏水冲洗5遍，沥干水分备用。进一步，步骤A中，所述不定芽诱导培养基中含改良后的MS基本培养基，植物激素6-BA0.8-1.0mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗糖30g/L，PH5.6-5.8。进一步，步骤B中，所述增殖培养基中含有改良后的MS基本培养基，激素水平为6-BA0.3-0.5mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗糖20g/L，PH5.6-5.8。进一步，步骤C中，壮苗生根培养基中含有改良后的MS基本培养基，激素水平ABT0.1-0.3mg/L、香蕉50g/L、AG1g/L，PH5.6-5.8。进一步，所述改良后的MS基本培养基包括：大量元素：硝酸铵1375mg/L、硝酸钾1650mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、氯化钙170mg/L、四水硝酸钙170mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸0.62mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，钼酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L；有机成分：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，L-抗坏血酸25mg/L。采用上述结构后，本专利技术可以在一个周期120-130天内使粉叶金花幼苗扩大4-5倍，较传统的扦插繁殖时间缩短一半以上，且不受季节、气候及用地方面的条件限制，且苗木质量优良，数量充足，可以快速满足市场对园林造景绿化的需求。具体实施方式为了进一步解释本专利技术的技术方案，下面通过具体实施例来对本专利技术进行详细阐述。一、外植体消毒选取健壮无病虫害的母株作为外植体来源，裁剪带腋芽的嫩枝条清洗干净后，用饱和洗衣粉澄清液浸泡12h，洗净后转移至超净工作台，用75％的酒精溶液清洗10s，清洗过程中轻微摇晃使外植体充分与酒精溶液接触，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍，再用10％次氯酸钠溶液清洗8min，无菌蒸馏水冲洗3遍，最后用0.1％升汞溶液再清洗8min，无菌蒸馏水冲洗5遍，沥干水分后将外植体裁剪成1cm左右带腋芽的茎段，平铺接种于培养基表面，稍微轻压使外植体稍稍浸入培养基。不同灭菌方式的效果对比如下表1所示。表1不同灭菌方法对外植体灭菌的效果影响二、不定芽诱导将消毒后的外植体裁剪去头尾切口，然后将外植体裁剪成1cm左右的茎段，平铺接种于不定芽诱导培养基，稍微轻压使茎段稍稍浸入培养基中，其中不定芽诱导培养基包含改良后的MS基本培养基、6-BA0.8-1.0mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗糖30g/L、PH5.6-5.8，光强2000Lux，光照时间10h/d，温度23±2℃，培养30天，一株外植体可诱导出1-2颗不定芽。不同基本培养基对不定芽诱导的影响如下表2所示；不同激素组合度不定芽诱导的影响如下表3所示。表2不同基本培养基对不定芽诱导率的影响有表2可见经过改良后的MS基本培养基，使盐含量相对降低，符合外植体培养的环境条件，可以维持外植体与培养基的内外渗透压平衡，培养过程中外植体不易失水死亡，玻璃化现象也较少。表3不同激素组合及用量对不定芽诱导的影响由表3可以看出在不定芽诱导中，6-BA可以起到较好的作用，通过与NAA的搭配使用可以很好的用于粉叶金花茎段不定芽的诱导。三、不定芽增殖将诱导出的不定芽从外植体根部裁剪后接种于增殖培养基中，其中增殖培养基包含改良后的MS基本培养基、6-BA0.3-0.5mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗糖20g/L、PH5.6-5.8。光强2000Lux，光照时间10h/d，温度23±2℃，培养40天，增值率倍率可达到4-5倍。不同基本培养基对不定芽增殖的影响如下表4所示；不同激素用量对增值倍率的影响如下表5所示。表4不同基本培养基对不定芽增殖的影响由表4可知不同的基本培养基对不定芽增殖的影响较明显。其中使用改良后的基本培养基较适合粉叶金花的不定芽增殖培养，经过30-40天的培养，增殖倍率可达到4-5倍。表5不同植物激素水平对增殖倍率的影响四、壮苗生根将增殖后的芽体分株后接种于壮苗生根培养基中，其中壮苗生根培养基包含改良后的MS基本培养基、ABT(生根粉)0.1-0.3mg/L、香蕉50g/L、AG(活性炭)1g/L，PH5.6-5.8。光强2000Lux，光照时间10h/d，温度23±2℃，培养2.5-3个月，高度可达到6-7cm，株径3-4mm，可达到根须数4-6根。不同激素对芽体壮苗生根的影响如下表6所示；不同基本培养基对壮苗生根的影响如下表7所示；不同有机添加物对芽体壮苗生根的影响如下表8所示。表6不同基本培养基对壮苗生根的影响由表6可以看出本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A、不定芽诱导：采取健壮粉叶金花当年生带有腋芽的茎段作为外植体，先对外植体进行清洗、消毒，接入不定芽诱导培养基中培养，光照强度1500‑2000Lux，光照时间10h/d，温度23±2℃，培养20‑30天；步骤B、增殖培养：将步骤A诱导出的不定芽切下后，接入增殖培养基中进增殖培养，培养条件为温度为23±2℃，光照10h/d，培养周期35‑40天；步骤C、壮苗生根培养：将步骤B增殖后的芽体分株切下，然后接种于壮苗生根培养基中，培养周期60天。

【技术特征摘要】
1.一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A、不定芽诱导：采取健壮粉叶金花当年生带有腋芽的茎段作为外植体，先对外植体进行清洗、消毒，接入不定芽诱导培养基中培养，光照强度1500-2000Lux，光照时间10h/d，温度23±2℃，培养20-30天；步骤B、增殖培养：将步骤A诱导出的不定芽切下后，接入增殖培养基中进增殖培养，培养条件为温度为23±2℃，光照10h/d，培养周期35-40天；步骤C、壮苗生根培养：将步骤B增殖后的芽体分株切下，然后接种于壮苗生根培养基中，培养周期60天。2.如权利要求1所述的一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤A中外植体的清洗、消毒方法为：将采集的幼嫩枝条用家用清水清洗后用洗衣粉饱和澄清液浸泡12h，冲洗干净后转移至超净工作台中用75%的酒精溶液清洗10s，清洗过程中轻微摇晃使外植体充分与酒精溶液接触，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍，再用10%次氯酸钠溶液清洗8min，无菌蒸馏水冲洗3遍，最后用0.1%升汞溶液再清洗8min，无菌蒸馏水冲洗5遍，沥干水分备用。3.如权利要求1所述的一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤A中，所述不定芽诱导培养基中含改良后的MS基本培养基，植物激素6-BA0.8-1.0mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄永恒，陆利春，陈瑞凤，赖鹭挺，赖春阳，
申请(专利权)人：厦门涌泉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35