检测和/或预测人类巨大儿的miRNA标志物或其组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种与人类巨大儿相关的miRNA标志物或其组合及应用，属于基因工程及临床医学领域。该标志物选自hsa‑miR‑195‑5p、hsa‑miR‑155‑5p、hsa‑miR‑221‑3p中的一种或多种。该标志物对巨大儿具有特异性和敏感性,可用于制备巨大儿早期诊断或监测的试剂盒,并可在早期进行筛查和诊断,可反复检测并易于动态监测。

Detection and / or prediction of miRNA markers or combinations of human macrosomia and their applications

The invention discloses a microRNA marker related to human macrosomia or its combination and application, belonging to the field of genetic engineering and clinical medicine. This marker is selected from one or more of hsa_microRNAs_195_5p, hsa_microRNAs_155_5p, hsa_microRNAs_3p. This marker is specific and sensitive to macrosomia. It can be used to prepare a kit for early diagnosis and monitoring of macrosomia. It can be screened and diagnosed in early stage. It can be detected repeatedly and monitored dynamically.

【技术实现步骤摘要】
检测和/或预测人类巨大儿的miRNA标志物或其组合及其应用专利
本专利技术属于基因工程及临床医学领域，涉及检测和/或预测人类巨大儿的miRNA标志物或其组合及其应用。
技术介绍
在儿童生长发育指标中，出生体重是新生儿健康状态的重要指标，是影响其生存质量的重要因素。新生儿出生体重异常不仅对婴儿近期健康会造成不良影响，而且会影响其成年后的健康状况。流行病学调查发现，近十年来，世界各地(加拿大、瑞典、美国、中国)低出生体重儿的发生率总体呈下降趋势，而高出生体重儿的发生率逐渐上升，全球正面临新生儿高出生体重带来的健康风险。高出生体重中，出生体重超过4000克的新生儿被称为巨大儿，国外发生率为15.1％，国内发生率为7％左右。大量的研究表明，巨大儿可导致难产和产伤的发生率增加，同样增加了如肥胖、2型糖尿病、高血压等远期并发症的发生率，而且乳腺癌和其他癌症的风险也随着出生体重的增加而增加。巨大儿带来的健康风险已经成为影响我国人口质量、造成严重社会与经济负担的重要医学难题，如何将成年疾病的预防提前是当今公共卫生领域研究的热点。因此，寻求巨大儿的早期预测和论断，并进行有效干预，对提高母婴健康水平具有重要意义。巨大儿的发生是多种因素共同作用的结果，与遗传、孕期营养、内分泌和胎盘的功能等因素有关。近年来已有大量临床观察发现，即使在营养及母体因素相似或几乎相同的情况下，新生儿的出生体重也可能出现较大差异。这是因为胎儿生长发育所需的一切营养物质都是由母体通过胎盘供应，而且胎盘中某些因子的表达(IGF-I、IGF-II、瘦素等)调控着营养物质的转运，进而影响胎儿的生长。巨大儿不仅增加孕妇的负担，且可对胎儿成年健康产生不利影响，因此我们需要在亚临床或更早、甚至孕前就采取相关的干预措施来避免或减少本病的发生、减慢病程，减轻母儿的不良结局。为此我们迫切需要寻找本病特异标志物与治疗靶点，从而尽早预测发病风险、尽早启动预防与干预措施，对减少本病的发生、改善母儿预后具有极其重要的意义！近年来越来越多的研究发现表观遗传变异在疾病发生发展中起着重要的作用，微小核糖核酸(microRNA，即miRNA)作为表观遗传的重要小分子，它是一类长约19-23个核苷酸的单链RNA分子，多位于基因组非编码区，进化上高度保守，可在转录后水平对基因表达进行调节，并与动物的许多正常生理活动密切相关，同时也与许多疾病的发生及发展存在着紧密的联系。预测发现miRNA至少能调控数千个人类基因，占所有基因的30％以上。在动物细胞中，这些小分子RNA是从60-200nt的具有发夹状结构的前体中被切割出来而成熟，miRNA的转录初产物(pri-miRNA)很快被一种核糖核酸酶IIIDrosha加工成miRNA前体(pre-miRNA)，然后由细胞核转运至细胞质中，经另一种核糖核酸酶IIIDicer识别剪切为成熟miRNA。miRNA不编码蛋白质，而是以单链形式与辅酶因子TRBP及PACT形成RNA诱导沉默复合物，再与mRNA的3’端非编码区(3’UTR)结合，从而发挥其调控mRNA转录与蛋白翻译的总开关作用。多数的miRNA与一个特定的mRNA不是完全互补的，一个miRNA可以与同一个mRNA的不同位点靶向互补或与许多不同的mRNAs靶向互补；另外，不同的miRNAs也可以靶向调控相同的mRNA，并且有相似的生物学功能。即一个miRNA能调控多个信号通路中有关的mRNA，而多个miRNA也能调控同一种mRNA。近年来的文献报道了miRNAs在胚胎干细胞、胚胎发育早期阶段、异常妊娠结局及妊娠合并症等方面的表达，自参与调控线虫时序发育的lin-4与let-7被发现以来，miRNA已逐渐成为调控mRNA稳定性和蛋白翻译的研究热点，分别在2002年和2003年两度入选Science杂志年度十大科技突破。随着研究的深入，越来越多的miRNA被发现。目前，miRNA与肿瘤的关系已成为研究的重点，已发现若干miRNA通过负调控基因的表达与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌高度相关，血浆miRNA可做为多种肿瘤发生与预后的生物标志物。然而，近年来的研究结果提示，血浆miRNA有可能作为巨大儿发生的生物学标志物，用于巨大儿发生的早期预测。最新的研究成果发现血浆中存在上百种的miRNA，性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性，在肺癌、结肠癌中已经证实血浆miRNA的表达谱可作为早期诊断的潜在生物标志物。这一发现令人振奋，血浆miRNA作为一类非编码调节性的小分子RNA有可能取代传统的特异蛋白为代表的生物标志物，开拓了生物标志物的新境界。然而血浆中miRNA在巨大儿早期预测监测中的应用还未得到相应的关注，若能发现稳定的与巨大儿发生相关的特异血浆miRNA作为生物标志物，并研发相应疾病的早期预测、监测试剂盒，不仅在该领域处于国际领先地位，可创造令人瞩目的经济效益，对我国妊娠高血压的防治也将是一次强有力的推动。参考文献：1.KochL.Reproductiveendocrinology:macrosomiaindevelopingcountries.NatRevEndocrinol.2013；9(3):130.2.MaccaniMA,PadburyJF,MarsitCJ.miR-16andmiR-21expressionintheplacentaisassociatedwithfetalgrowth.PLoSOne.2011；6(6):e21210.3.ShiWW,MichaelSK.SeculartrendsoffetalgrowthinCanada,1981to1997.PaediatricandPerinatalEpidemiology,2003；17:347-354.4.YehJ,SheltonJ.Reasonsforincreasingtrendsinlargeforgestationalagebirths.ObstetGynecol.2005；105(2):444；authorreply444-5.5.BarchittaM,MaugeriA,QuattrocchiA,AgrifoglioO,AgodiA.TheRoleofmiRNAsasBiomarkersforPregnancyOutcomes:AComprehensiveReview.IntJGenomics.2017；2017:8067972.doi:10.1155/2017/8067972.6.JiangH,WenY,HuL,MiaoT,ZhangM,DongJ.SerumMicroRNAsasDiagnosticBiomarkersforMacrosomia.ReprodSci.2015；22(6):664-71.
技术实现思路
本专利技术是通过筛查孕妇血浆中的miRNAs的特异性变化，筛选出在孕有巨大儿患者和正常健康胎儿的孕妇中表达差异显著的miRNA，通过检测这些miRNA，可评估是否孕有巨大儿患者的特异性和敏感性，本专利技术提供的miRNA标志物或其组合、可用于临床特别是早期人类巨大儿诊断、监测的分子标记物，具有很高的特异性和灵敏性。本专利技术的目的是提供与人类巨大儿发生相关的血浆microRNA标志物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与人类巨大儿相关的miRNA标志物或其组合，其特征在于选自hsa‑miR‑195‑5p、hsa‑miR‑155‑5p或hsa‑miR‑221‑3p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种与人类巨大儿相关的miRNA标志物或其组合，其特征在于选自hsa-miR-195-5p、hsa-miR-155-5p或hsa-miR-221-3p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的miRNA标志物或其组合，其特征在于选自hsa-miR-195-5p、hsa-miR-155-5p或hsa-miR-221-3p中的多种。3.根据权利要求2所述的miRNA标志物或其组合，其特征在于包括hsa-miR-195-5p、hsa-miR-155-5p和hsa-miR-221-3p。4.权利要求1～3任一项所述的miRNA标志物或其组合在制备检测和/或预测人类巨大儿试剂中的应用，特别是在制备早期检测和/或预测人类巨大儿试剂中的应用。5.检测权利要求1～3任一项所述的miRNA标志物或其组合的探针或引物。6.根据权利要求6所述的探针或引物，其特征在于选自以下(1)-(3)任意一对或多对引物：(1)hsa-miR-195-5p的上游引物序列为SEQIDNo.4，下游引物序列为SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴炜，汤秋勤，江华，陈丽平，陈婷，陈敏健，陆春城，夏彦恺，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32