化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法技术

技术编号:18967485 阅读:226 留言:0更新日期:2018-09-19 01:39
本发明专利技术提供了一种化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法。该化学发光免疫分析用清洗液包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂,表面活性剂包括阴离子表面活性剂、聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂、酰胺型非离子表面活性剂。本申请的清洗液可以保证测试试剂的测试重复性、特异性,而且可以提高测试试剂的灵敏度。

Chemiluminescence immunoassay for cleaning liquid and magnetic particle chemiluminescence immunoassay

The invention provides a cleaning solution for chemiluminescence immunoassay and a method for detecting magnetic particle chemiluminescence immunoassay. The CLIA cleaning solution includes surfactant, non-protein protectant and buffer, and the surfactant includes anionic surfactant, polyoxyethylene ether non-ionic surfactant and amide non-ionic surfactant. The cleaning solution can ensure the repeatability and specificity of the test reagent, and can improve the sensitivity of the test reagent.

【技术实现步骤摘要】
化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法
本专利技术涉及生物技术分析领域,具体而言,涉及一种化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法。
技术介绍
磁微粒化学发光免疫分析法是化学发光免疫分析法与磁性微粒载体技术相结合的一种检测方法,它利用磁微粒具有超顺磁性、成本低、能耗少和无污染等特点,将待测物抗原(抗体)包被磁微粒形成磁微粒-免疫复合物,发光标记物标记待测物抗原(抗体)制备标记结合物,通过免疫反应形成抗原-抗体-标记抗原(抗体)复合物,发光强度与待测物抗体(抗原)的含量成正比。由于悬浮性磁微粒作为载体具有较高的比表面积,能够更为充分地与样品反应,加之外加磁场的灵活应用,较酶标板载体具有更高的灵敏度和特异性、更快的检测速度和更好的重复性等优点,因此磁微粒化学发光免疫分析法日益受到人们的青睐,在生命科学、临床医学以及环境、食品、药物等领域得到广泛应用。在磁微粒化学发光免疫检测过程中,抗原抗体反应结束后,需要加入清洗液清洗,从而去除未结合到磁微粒-免疫复合物的物质。清洗液的清洗效果,直接关系到检测结果的准确性。好的清洗液对磁微粒化学发光免疫检测应有重复性好、特异性强和灵敏度高的作用。因此,清洗液对磁微粒化学发光免疫检测的准确性具有重要的意义。目前,在提高磁微粒化学发光免疫诊断试剂性能(重复性、灵敏度和特异性等)方面,研发人员通常致力于筛选到好的主要原料(抗原和抗体)及优化工艺反应体系,往往忽略清洗液的作用。目前,清洗液的研究和报道相对较少。鲜有几篇关于清洗液专利多是通过研制清洗液,使其达到目前已上市的免疫分析系统原装清洗液的性能,从而降低检测成本。各大厂商的磁微粒化学发光免疫系统的清洗液通常是弱的无机酸及其盐配制的接近中性的缓冲剂,同时添加少量的无机盐、表面活性剂和防腐剂,可使大部分化学发光免疫诊断试剂具有较好的精密度。但现有的清洗液对化学发光免疫诊断试剂特异性作用和灵敏度作用有限,临床上时常出现假阳性和假阴性,不能满足化学发光免疫诊断试剂高灵敏度和特异性的要求。而且,对于少数竞争法检测项目,如皮质醇、雄烯二酮、雌二醇等,由于市场上未开发出性能更好的原料,导致曲线高值区的RLU区分度相对较差,RLU的微小偏差则可造成明显的浓度偏差,最终造成高值区精密度较差。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法,以解决现有技术中的清洗液不能满足化学发光免疫分析的特异性和灵敏度要求的问题。为了实现上述目的,根据本专利技术的一个方面,提供了一种化学发光免疫分析用清洗液,其包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂,表面活性剂包括阴离子表面活性剂、聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂、酰胺型非离子表面活性剂。进一步地,清洗液中,阴离子表面活性剂的重量含量为0.001~0.003%,优选聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂的重量含量为0.02~0.08%,进一步优选酰胺型非离子表面活性剂的重量含量为0.005~0.01%,进一步优选缓冲剂的浓度为50~100mM。进一步地,阴离子表面活性剂为磺酸盐类表面活性剂,优选阴离子表面活性剂的分子式为R1-SO3-M,其中R1为碳原子数为10~15的烷基,M为碱金属中的一种;优选聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂的分子式为R2O(C2H4O)n2H,R2为碳原子数为12~18的烃基;n2为20~25;进一步优选酰胺型非离子表面活性剂的分子式为C11H23CON(C2H4OH)2。进一步地,非蛋白类蛋白保护剂包括非还原糖类和胆碱类保护剂,胆碱类保护剂为2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱与其亲水性共聚单体衍生物聚合而成,优选亲水性共聚单体衍生物为甲基丙烯酸羟乙酯,优选胆碱类保护剂具有以下结构通式(C11H22NO6P)n1(C6H10O3)m1:其中,n1:m1为(5~6.5):(3.5~5),或(C11H22NO6P)n1(C6H10O3)m1的相对分子量为2万~10万。进一步地,清洗液中,非还原糖类的重量含量为0.5~3%,和/或(C11H22NO6P)n1(C6H10O3)m1的重量含量为0.3~1%。进一步地,非还原糖类为蔗糖、海藻糖和棉子糖中的任意一种或多种,和/或(C11H22NO6P)n1(C6H10O3)m1中n1和m1的和为10的倍数。进一步地,缓冲剂为弱酸性缓冲剂,优选缓冲剂的pH值为5.0~6.0。进一步地,缓冲剂中含有柠檬酸根。进一步地,清洗液还包括无机盐,优选无机盐的含量为130~180mM,进一步优选无机盐为氯化钠或氯化钾。进一步地,清洗液还包括防腐剂,优选防腐剂的重量含量为0.05~0.09%,进一步优选防腐剂为Proclin300。根据本专利技术的另一方面,还提供了一种磁微粒化学发光免疫分析检测方法,包括利用清洗液清洗磁微粒-免疫复合物的过程,其中,清洗液为上述清洗液。进一步地,磁微粒化学发光免疫分析检测方法利用免疫分析仪实施。进一步地,磁微粒化学发光免疫分析检测方法为竞争法、捕获法、夹心法或间接法。进一步地,磁微粒化学发光免疫分析检测方法为通过竞争法对皮质醇、雄烯二酮或雌二醇的检测。应用本专利技术的技术方案,提供了化学发光免疫分析用清洗液,其包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂,表面活性剂包括阴离子表面活性剂、聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂、酰胺型非离子表面活性剂。本申请的清洗液可以保证测试试剂的测试重复性、特异性,而且可以提高测试试剂的灵敏度。具体实施方式需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。如本申请
技术介绍
所分析的,现有技术的清洗液对化学发光免疫诊断试剂的重复性、特异性、灵敏度作用有限,导致其不能满足化学发光免疫分析的要求,为了解决该问题,本申请提供了一种化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法。在本申请一种典型的实施方式中,提供了一种化学发光免疫分析用清洗液,该清洗液包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂,其中,表面活性剂包括阴离子表面活性剂、聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂、酰胺型非离子表面活性剂。利用表面活性剂的润湿、乳化、增溶、分散和洗涤的作用,提高磁微粒-免疫复合物中磁微粒的分散性,使清洗液清洗的更彻底,保证了利用该磁微粒-免疫复合物作为测试试剂较高的重复性。其中,聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂的亲水性可以在蛋白的表面形成水化膜以此来提高蛋白的稳定性,其碳链的疏水性可与清洗对象中的磁微粒疏水性吸附,通过二者的竞争去除已结合到磁微粒上的杂蛋白,而且由于聚氧乙烯醚的长链产生的空间位阻可降低杂蛋白与磁微粒的非特异性结合效率,同时聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂可封闭在阴离子表面活性剂以及弱酸性环境中作用下已解离的非特异性结合位点,避免已解离的非特异性的弱结合再次结合,进一步提高了检测试剂的特异性;酰胺型非离子表面活性剂没有浊点,且由于分子中存在酰胺键,因此具有较强的耐水解性能和稳定性,同时与前述的阴离子表面活性剂和聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂具有良好的复配、协同效应,尤其是在阴离子表面活性剂呈酸性时,与其具有更好的配伍性,能够增强洗涤效果,从而进一步提高检测试剂的重复性和特异性。同时清洗液中还含有非蛋白类蛋本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种化学发光免疫分析用清洗液,其特征在于,包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂,所述表面活性剂包括阴离子表面活性剂、聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂、酰胺型非离子表面活性剂。

【技术特征摘要】
1.一种化学发光免疫分析用清洗液,其特征在于,包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂,所述表面活性剂包括阴离子表面活性剂、聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂、酰胺型非离子表面活性剂。2.根据权利要求1所述的清洗液,其特征在于,所述清洗液中,所述阴离子表面活性剂的重量含量为0.001~0.003%,优选所述聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂的重量含量为0.02~0.08%,进一步优选所述酰胺型非离子表面活性剂的重量含量为0.005~0.01%,进一步优选所述缓冲剂的浓度为50~100mM。3.根据权利要求1所述的清洗液,其特征在于,所述阴离子表面活性剂为磺酸盐类表面活性剂,优选所述阴离子表面活性剂的分子式为R1-SO3-M,其中R1为碳原子数为10~15的烷基,M为碱金属中的一种;优选所述聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂的分子式为R2O(C2H4O)n2H,R2为碳原子数为12~18的烃基;n2为20~25;进一步优选所述酰胺型非离子表面活性剂的分子式为C11H23CON(C2H4OH)2。4.根据权利要求1所述的清洗液,其特征在于,所述非蛋白类蛋白保护剂包括非还原糖类和胆碱类保护剂,所述胆碱类保护剂为2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱与其亲水性共聚单体衍生物聚合而成,优选所述亲水性共聚单体衍生物为甲基丙烯酸羟乙酯,优选所述胆碱类保护剂具有以下结构通式(C11H22NO6P)n1(C6H10O3)m1:其中,n1:m1为(5~6.5):(3.5~5),或所述(C11H22NO6P)n1(C6H10O3)m1的相对分子量为2万~10万。5.根据权利要求4所述的清洗液,其特征在于,所述清洗液中,...

【专利技术属性】
技术研发人员:饶微李婷华袁锦云刘来壮程然许婧
申请(专利权)人:深圳市新产业生物医学工程股份有限公司
类型:发明
国别省市:广东,44

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