【技术实现步骤摘要】
一种利用基因工程手段高效创制低木质素含量紫花苜蓿的方法
本专利技术属于生物
,具体涉及利用基因工程手段,高效创制低木质素含量紫花苜蓿的方法。
技术介绍
紫花苜蓿(MedicagosativaL.)是我国种植面积最大的人工牧草,由于其产草量高,适口性好,营养价值列牧草之首,又被称为“牧草为王”。紫花苜蓿不仅含有蛋白质、矿物质和维生素等重要的营养成分,还含有动物所需的必需氨基酸、微量元素和未知生长因子。在相同的土地上,紫花苜蓿比禾本科牧草所收获的可消化蛋白质高2.5倍,矿物质高6倍左右,可消化养分高2倍左右。与其它粮食作物相比,紫花苜蓿单位面积营养物质的产量也较高。另外,紫花苜蓿还在土壤改良、水土保持及生态环境保护等方面发挥着重要而积极的作用。紫花苜蓿在中国、美国、澳大利亚等国家广泛种植,目前在我国的种植面积在2千万亩,居世界第四。改良紫花苜蓿的品种,提高其营养价值,对我国乃至世界的畜牧业具有重要的意义。紫花苜蓿进入牛和羊的肠胃后,由于牧草的特性而存在消化不完全的现象,从而影响了牲畜对营养物质的吸收。造成这一现象的主要原因是植物细胞壁中存在过量的木质素。木质素是组成植物细胞壁的重要化学成分,位于纤维素和半纤维素之间,能够增强植物体的机械强度,增强植物的抗压性和支撑力、利于疏导组织水分运输、抵御病虫害的侵袭等,对植物的正常生长具有重要的作用。但是,木质素本身很难被动物消化;而且,由于木质素的存在,还妨碍了其他营养成分如纤维素、半纤维素的利用。研究表明,牲畜对苜蓿干物质的消化率与木质素含量具有显著的负相关,饲料中所含的木质素是影响饲料消化率的限制因子。如果降 ...
【技术保护点】
1.一种利用基因工程手段高效创制低木质素含量紫花苜蓿的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)获得紫花苜蓿无菌苗:紫花苜蓿种子经0.1%的HgCl2灭菌后,播种在湿润的无菌滤纸上,25℃,暗培养,直至发芽,得紫花苜蓿无菌苗;2)预培养:取紫花苜蓿无菌苗的子叶,切成0.2cm2~0.3cm2小块,接种于预培培养基上,25℃,暗培养1d;3)侵染:将内含反义表达载体p2300‑ubi‑4fan‑4CL的农杆菌LBA4404的菌液于3000r/min离心10min,收集菌体,用侵染培养基重悬菌体;将步骤2)预培养1d的子叶转入菌体与侵染培养基的混合物中,120r/min,震荡处理20min,获得侵染子叶;4)共培养:将浸染子叶,转入共培培养基上,25℃、12h/日、光照度30umol/m2·s下,光照培养3d,得共培养后的浸染子叶;5)愈伤组织的诱导:将共培养后的浸染子叶接种于愈伤组织诱导培养基上,25℃、12h/日、光照度30umol/m2·s下光照培养,诱导愈伤组织的形成;6)不定芽的分化:将形成的愈伤组织切成0.2cm2~0.3cm2,转入分化培养基,25℃、12h/日、光照度30umol ...
【技术特征摘要】
1.一种利用基因工程手段高效创制低木质素含量紫花苜蓿的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)获得紫花苜蓿无菌苗:紫花苜蓿种子经0.1%的HgCl2灭菌后,播种在湿润的无菌滤纸上,25℃,暗培养,直至发芽,得紫花苜蓿无菌苗;2)预培养:取紫花苜蓿无菌苗的子叶,切成0.2cm2~0.3cm2小块,接种于预培培养基上,25℃,暗培养1d;3)侵染:将内含反义表达载体p2300-ubi-4fan-4CL的农杆菌LBA4404的菌液于3000r/min离心10min,收集菌体,用侵染培养基重悬菌体;将步骤2)预培养1d的子叶转入菌体与侵染培养基的混合物中,120r/min,震荡处理20min,获得侵染子叶;4)共培养:将浸染子叶,转入共培培养基上,25℃、12h/日、光照度30umol/m2·s下,光照培养3d,得共培养后的浸染子叶;5)愈伤组织的诱导:将共培养后的浸染子叶接种于愈伤组织诱导培养基上,25℃、12h/日、光照度30umol/m2·s下光照培养,诱导愈伤组织的形成;6)不定芽的分化:将形成的愈伤组织切成0.2cm2~0.3cm2,转入分化培养基,25℃、12h/日、光照度30umol/m2·s下光照培养,每28d继代一次;7)生根诱导:当不定芽长至2cm~3cm时,从基部切下,转入生根培养基中生根,25℃、12h/日、光照度30umol/m2·s下光照培养;8)当生根苗的根长至2~3cm时,打开瓶口炼苗,然后移栽到混合好的基质中。2.根据权利要求1所述的一种利用基因工程手段高效创制低木质素含量紫花苜蓿的方法,其特征在于,步骤2)中,所述的预培培养基为:以MS培养基为基本培养基,添加4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸,按重量百分比添加3%的蔗糖和0.7%的琼脂,调pH至5.8。3.根据权利要求1所述的一种利用基因工程手段高效创制低木质素含量紫花苜蓿的方法,其特征在于,步骤3)中,内含反义表达载体p2300-ubi-4fan-4CL的农杆菌LBA4404的制备方法为:获得紫穗槐的总DNA,以紫穗槐的总DNA为模板,以特异性引物进行PCR扩增,获得紫穗槐4CL1基因片段;将紫穗槐4CL1基因片段与载体p2300-ubi-4fan连接,构建重组表达载体p2300-ubi-4fan-4CL;将重组表达载体p2...
【专利技术属性】
技术研发人员:阮亚男,韩阳,王红艳,邢晓琳,李曹娜,安娜,
申请(专利权)人:辽宁大学,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。