本发明专利技术提供了微小RNA及其在制备抗日本血吸虫感染制剂中的应用。具体地，本发明专利技术提供了对血吸虫有显著杀灭或抑制作用的核酸抑制分子，尤其是微小RNA核酸分子。实验表明，本发明专利技术的特定amiRNA对于日本血吸虫(尤其是早期童虫)具有很高的杀灭或抑制能力。本发明专利技术还提供了所述核酸抑制分子的制法、药物组合物和应用。
【技术实现步骤摘要】
微小RNA及其在制备抗日本血吸虫感染制剂中的应用
本专利技术涉及生物医药，具体地，涉及微小RNA及其在制备抗日本血吸虫感染制剂中的应用。
技术介绍
血吸虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫病。目前血吸虫病治疗仍以吡喹酮为主，但完全依赖单一药物治疗难以控制血吸虫病重复感染，且近年来研究发现吡喹酮化疗有诱导抗药性产生的潜在风险，因此开展血吸虫病新型疫苗和新药研发对血吸虫病有效控制乃至消除有重要的战略意义。非编码小核糖核酸广泛存在于真核生物中，长度一般为18-30个核苷酸(nucleotide,nt)，主要包含微小核糖核酸(microRNAs,miRNA)、小干扰核糖核酸(smallinterferingRNA,siRNA)、Piwi-相互作用核糖核酸(piRNA)等3类，是生物基因表达、基因组稳定和抵御外来遗传因子的关键调节因子。近年来研究者发现血吸虫不同发育阶段存在其特异性非编码RNA，这为深入研究血吸虫发育和寄生以及致病机制提供新的思路。微小RNA的鉴定及发现将有利于发现潜在抗日本血吸虫药物靶标，为更深入了解日本血吸虫的生物学特征以及进一步发展日本血吸虫新药物研发提供新线索。因此，本领域迫切需要开发一种可以有效杀灭或抑制血吸虫(尤其是日本血吸虫,)且副作用小的微小RNA药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于开发一种可以有效杀灭或抑制血吸虫(尤其是日本血吸虫)且副作用小的微小RNA药物。本专利技术第一方面提供了一种核酸抑制分子，所述核酸抑制分子为单链或双链amiRNA，所述核酸抑制分子的正义链的5'至3'端具有式I所示的结构：Z0-Z1-Z2(I)其中，Z0＝A、T、C、G或无；Z1是如SEQIDNO.：1、3、或5所示的核苷酸序列；和Z2＝A、T、C、G或无。在另一优选例中，所述式I结构选自下组：SEQIDNO.：1、3、5、或其组合。在另一优选例中，所述的核酸抑制分子包括siRNA。在另一优选例中，所述的核酸抑制分子的长度为16-50nt，较佳地16-30nt，更佳地16-25nt。在另一优选例中，所述的核酸抑制分子为分离的、重组的、或人工合成的核酸分子。本专利技术第二方面提供了一种产生本专利技术第一方面所述的核酸抑制分子的前体序列，所述前体序列正义链的5'至3'端具有式II所示的结构：式中，B1为所需要的第一核糖核苷酸序列，其中所述的第一核糖核苷酸序列包括amiRNA序列形式；B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；C为茎环结构。在另一优选例中，所述的B1或所述的amiRNA具有式I结构，或如式I所示。在另一优选例中，所述B1的序列选自下组：SEQIDNO.：1、3、5、或其组合。本专利技术第三方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子的序列如SEQIDNO.:1、3、5中任一所示。在另一优选例中，所述的核酸分子为单链或双链。本专利技术第四方面提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成本专利技术第二方面所述的前体序列。本专利技术第五方面提供了一种表达载体，所述的表达载体含有本专利技术第二方面所述的前体序列或本专利技术第四方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述表达载体为病毒载体或非病毒载体。在另一优选例中，所述病毒载体选自下组：慢病毒载体、腺病毒载体、或其组合。本专利技术第六方面提供了一种用于杀灭或抑制血吸虫的组合物，所述的组合物包括；(a)本专利技术第一方面所述的核酸抑制分子、和/或本专利技术第二方面所述的前体序列；和(b)药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述组合物还包括病毒载体。在另一优选例中，所述组合物还包括(c)其他杀灭或抑制血吸虫的药物。在另一优选例中，所述血吸虫选自下组：日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫、或其组合。在另一优选例中，所述血吸虫包括日本血吸虫。在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体选自下组：水、盐水、脂质体、脂质、蛋白、肽类物质、纤维素、纳米凝胶、或其组合。在另一优选例中，所示组合物的剂型选自下组：片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、注射液、或粉针剂。在另一优选例中，所述的组合物的剂型还包括喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、挥发性液体、外用溶液剂、洗剂、浇淋剂、搽剂、巴布膏剂、膏药、橡胶膏剂、软膏剂、含漱剂。在另一优选例中，所述的剂型为注射剂，较佳地为静脉注射剂、腹腔注射剂。在另一优选例中，所述剂型为口服剂型。在另一优选例中，所述组合物选自下组：药物组合物、疫苗组合物、或其组合。本专利技术第七方面提供了本专利技术第一方面所述核酸抑制分子或本专利技术第二方面所述前体序列的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(i)预防或治疗血吸虫感染；和/或(ii)杀灭或抑制血吸虫。在另一优选例中，所述组合物或制剂还用于杀灭或抑制血吸虫童虫。在另一优选例中，所述组合物或制剂还包括其他杀灭或抑制血吸虫的药物。本专利技术第八方面提供了一种抑体外杀灭或抑制血吸虫的方法，包括步骤：在本专利技术第一方面所述的核酸抑制分子或本专利技术第二方面所述的前体序列或本专利技术第六方面所述的组合物存在的情况下，培养血吸虫，从而杀灭或抑制血吸虫。在另有一优选例中，所述血吸虫选自下组：日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫、或其组合。在另一优选例中，所述血吸虫包括日本血吸虫。在另一优选例中，所述步骤为在培养体系中，将所述血吸虫与表达本专利技术第一方面所述的核酸抑制分子或本专利技术第二方面所述的前体序列的病毒载体接触，从而杀灭或抑制血吸虫。在另一优选例中，所述培养体系中，所述病毒载体的浓度为104-1010个/ml，较佳地，104-107个/ml。本专利技术第九方面提供了一种筛选抑制或杀灭血吸虫的候选化合物的方法，包括步骤：(a)在测试组中，在培养体系中，在测试化合物存在的条件下，培养表达FTL蛋白和/或SJCL蛋白的细胞一段时间T1，检测测试组所述培养体系中FTL蛋白和/或SJCL蛋白的表达量E1和/或活性A1；并且在不存在所述测试化合物且其他条件相同的对照组中，测试对照组所述培养体系中FTL蛋白和/或SJCL蛋白的表达量E2和/或活性A2；(b)将上一步骤所检测到的FTL蛋白和/或SJCL蛋白的表达量E1和/或活性A1与FTL蛋白和/或SJCL蛋白的表达量E2和/或活性A2进行比较，从而确定所述测试化合物是否是抑制或杀灭血吸虫的候选化合物，其中，如果E1显著低于E2、和/或A1显著低于A2，则表示所述测试化合物为抑制或杀灭血吸虫的候选化合物。在另一优选例中，所述“显著低于”指E1/E2≤1/2，较佳地≤1/3，更佳地，≤1/4。在另一优选例中，所述“显著低于”指A1/A2≤1/2，较佳地≤1/3，更佳地，≤1/4。在另一优选例中，所述方法包括步骤(c)，将步骤(b)确定的候选化合物施用于血吸虫，并测定其对血吸虫的杀灭或抑制作用。在另一优选例中，所述的方法是非诊断和治疗性的。本专利技术第十方面提供了一种预防和/或治疗血吸虫疾病的方法，向所需要的对象施用本专利技术第一方面所述的核酸抑制分子或本专利技术第二方面所述的前体序列或本专利技术第六方面所述的组合物。在另一优选例中，所述的需要的对象包括哺乳动物，较佳地，为人、小鼠、大鼠、兔。本专利技术第十一方面提供了一种amiRNA、或其前体、或其表达载体的用途，用于制备药物，所述药物用于(i)预防或治疗血吸虫感染；和/或(ii)杀灭本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸抑制分子，其特征在于，所述核酸抑制分子为单链或双链amiRNA，所述核酸抑制分子的正义链的5'至3'端具有式I所示的结构：Z0‑Z1‑Z2 (I)其中，Z0＝A、T、C、G或无；Z1是如SEQ ID NO.：1、3、或5所示的核苷酸序列；和Z2＝A、T、C、G或无。
【技术特征摘要】
1.一种核酸抑制分子，其特征在于，所述核酸抑制分子为单链或双链amiRNA，所述核酸抑制分子的正义链的5'至3'端具有式I所示的结构：Z0-Z1-Z2(I)其中，Z0＝A、T、C、G或无；Z1是如SEQIDNO.：1、3、或5所示的核苷酸序列；和Z2＝A、T、C、G或无。2.如权利要求1所述的核酸抑制分子，其特征在于，所述式I结构选自下组：SEQIDNO.：1、3、5、或其组合。3.一种产生权利要求1所述的核酸抑制分子的前体序列，其特征在于，所述前体序列正义链的5'至3'端具有式II所示的结构：式中，B1为所需要的第一核糖核苷酸序列，其中所述的第一核糖核苷酸序列包括amiRNA序列形式；B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；C为茎环结构。4.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸能被宿主转录形成权利要求3所述的前体序列。5.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有权利要求3所述的前体序列或权利要求4所述的多核苷酸。6.一种用于杀灭或抑制血吸虫的组合物，其特征在于，所述的组合物包括：(a)权利要求1所述的核酸抑制分子、和/或权利要求3所述的前体序列；和(b)药学上可接受的载体。7.权利要求1所述核酸抑制分子或权利要求3所述前体序列的用途，其特征在于，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(i)预防或治疗血吸虫...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦志强，许静，杨杰，吕山，李石柱，周晓农，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：上海,31
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