本发明专利技术提供一株内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌及其应用，所述菌为乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）WYS‑A01‑1，已于2017年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.14378。所述毛竹内生乙酸钙不动杆菌具有解磷解钾固氮的作用，可以在植物体内定殖，促进毛竹光合作用，提高生物酶活性，对调节植物生长和发育具有重要的作用。
An endophytic phosphorus solubilizing potassium Acinetobacter Azotobacter and its application
The invention provides an endophytic phosphorus-hydrolyzing potassium-fixing calcium acetate Acinetobacter and its application. The bacterium is Acinetobacter calcoaceticus WYS_A01_1, which has been preserved in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation Management Committee on July 3, 2017, and the preservation number is CGMCC No. 14378. The endophytic Acinetobacter calcoacetate of Phyllostachys pubescens has the function of phosphorus-solubilizing, potassium-fixing and nitrogen-fixing, can colonize in plants, promotes photosynthesis of Phyllostachys pubescens, improves biological enzyme activity, and plays an important role in regulating plant growth and development.
【技术实现步骤摘要】
一株内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌及其应用
本专利技术属于微生物领域，涉及一株促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌及其应用。
技术介绍
毛竹（Phyllostachysedulis）是中国南方地区重要的森林资源，属散生型竹种，具有生长快、成材早、用途广、经济收益大等优点。根据国家林业局第6次全国森林资源清查统计，福建、江西、浙江等10省（自治区、直辖市）竹林面积占全国竹林总面积（484.26万hm2）的93.78%。其中毛竹约337.2万hm2，占全国竹林面积的70%。植物内生细菌是指其生活史的一定阶段或全部阶段均生活在健康植物的各种组织和器官内部，并且与植物建立了和谐联合关系的细菌（胡桂萍等，2010）。有益的内生细菌不仅将植物作为栖息场所，而且对寄主植物具有促生、防病、内生固氮等多方面的生物学作用（何红等，2004），从而促进植物对恶劣环境的适应和保证寄主植物健康生长。国内外学者已对茄子、棉花、水稻、烟草、杨树、铁皮石斛等多种植物的内生细菌进行了深入的研究。近年来，李潞滨等（2008）、王纪杰（2008）、徐秋芳（2006）、齐泽民（2006）等人分别对毛竹和苞箭竹根际微生物和土壤细菌进行了研究，夏冬亮等（2009）、韩烁等（2010）也探索了毛竹根部内生细菌分离培养基的选择，毛竹根部解磷细菌的分离与筛选。但目前对毛竹不同组织可培养内生细菌分离、解磷解钾固氮功能内生细菌的筛选及具有促进光合作用的功能内生细菌方面尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一株促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌，其分类命名为乙酸钙不动杆菌（Acinetobactercalcoaceticus）WYS-A01-1，已于2017年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.14378，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌的菌落特征及菌体形态为：将WYS-A01-1在NA平板上培养24h后形成菌落颜色为白色，具有光泽，呈圆形、表面光滑、边缘整齐，无流动性，革兰氏染色阴性，无芽孢；菌落直径4-5mm。所述促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌的生理生化特征：WYS-A01-1接触酶反应呈阳性，V．P测定呈阴性，甲基红测定呈阴性，葡萄糖产酸试验阳性，葡萄糖产气试验阴性，柠檬酸盐试验阳性，硝酸盐还原反应呈阳性，淀粉水解呈阳性，需氧性测定呈阴性，吲哚实验呈阴性，丙二酸测定呈阳性，产H2S试验试验阳性。将所述促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌的16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，结果表明:WYS-A01-1与Acinetobactercalcoaceticus同处于一个分支上，其16SrDNA序列与Acinetobactercalcoaceticus（HM063913）的相似度达99%。结合菌落形态、生理生化特征和16SrDNA序列分析，鉴定为乙酸钙不动杆菌（Acinetobactercalcoaceticus）。本专利技术的优点在于：所述毛竹内生乙酸钙不动杆菌具有解磷解钾固氮的作用，可以在植物体内定殖，促进毛竹光合作用，提高生物酶活性，对调节植物生长和发育具有重要的作用。本专利技术所述乙酸钙不动杆菌制成菌剂通过灌根接种到毛竹幼苗，可以明显提高毛竹叶片叶绿素含量、提高光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)，降低叶片胞间CO2浓度(Gs)，与对照相比，差异达显著水平。通过竹腔注射接种到II度毛竹，可以提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量，与对照相比，差异达显著水平。因此，本专利技术为将来开发毛竹专用的微生物菌剂菌肥提供了良好的菌株资源。附图说明图1内生细菌处理后毛竹叶片SPAD值的变化。图2内生细菌处理后毛竹叶片CAT活性的变化。图3内生细菌处理后毛竹叶片MDA含量的变化。图4内生细菌处理后毛竹叶片POD活性的变化。图5内生细菌处理后毛竹叶片SOD活性的变化。图6内生细菌处理后毛竹叶片可溶性蛋白含量的变化。图7内生细菌处理后毛竹叶片可溶性糖含量的变化。具体实施方式下面结合实例对本专利技术进一步说明。一株促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌，其分类命名为乙酸钙不动杆菌（Acinetobactercalcoaceticus）WYS-A01-1，已于2017年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.14378。实施例1促进毛竹光合作用的内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌的筛选（1）筛选过程：通过梯度稀释法，从福建省武夷山市、长汀县、将乐县毛竹中心产区I度毛竹中分离出82株分离物。通过三区划线法对分离到的内生细菌进行纯化，并通过镜检判断菌株是否纯化，对纯化后的细菌进行编号，挑取单菌落，转移到NA斜面上保存备用。通过平板解磷解钾固氮效果测定初步筛选出20株具有较好解磷解钾固氮效果的内生菌株，最终筛选出一株具有良好解磷解钾固氮效果的内生细菌，标记为WYS-A01-1。（2）菌落特征及菌落形态：将WYS-A01-1在NA平板上培养24h后形成菌落颜色为白色，具有光泽，呈圆形、表面光滑、边缘整齐，无流动性，革兰氏染色阴性，无芽孢；菌落4-5mm。（3）生理生化特征：WYS-A01-1接触酶反应呈阳性，V．P测定呈阴性，甲基红测定呈阴性，葡萄糖产酸试验阳性，葡萄糖产气试验阴性，柠檬酸盐试验阳性，硝酸盐还原反应呈阳性，淀粉水解呈阳性，需氧性测定呈阴性，吲哚实验呈阴性，丙二酸测定呈阳性，产H2S试验试验阳性。（4）解磷解钾固氮能力测定：将分离得到的内生细菌菌株分别接种到事先配制好的有机磷培养基、无机磷培养基、钾细菌培养基以及Ashby无氮培养基平板上，每皿4个接菌点，重复３次。28℃恒温培养5d。分别观察并记录菌株生长情况及分解圈大小，根据分解圈大小、透明圈直径／菌落直径（Ｄ/ｄ值）确定内生细菌的解磷解钾固氮活性。分解圈越大、Ｄ/ｄ值越大，表示解磷解钾固氮活性越强。其中，有机磷培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO40.5g，NaCl0.3g，KCl0.3g，MnSO40.03g，FeSO40.03g，卵磷脂0.2g，CaCO35.0g，酵母膏0.4g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2（液体培养基则不加琼脂）；无机磷培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO40.5g，NaCl0.3g，KCl0.3g，MnSO40.03g，FeSO40.03g，MgSO40.3g，CaCO35.0g，Ca3(PO4)25.0g，酵母膏0.4g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2（液体培养基则不加琼脂）；钾细菌培养基：蔗糖10.0g，酵母膏0.5g，(NH4)2SO4,1.0g，Na2HPO42.0g，MgSO4·7H2O0.5g，CaCO31.0g，钾长石粉1g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2（液体培养基则不加琼脂）；Ashby无氮培养基：蔗糖10.0g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌，其特征在于：所述菌为乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）WYS‑A01‑1，已于2017年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.14378。
【技术特征摘要】
1.一株内生解磷解钾固氮乙酸钙不动杆菌，其特征在于：所述菌为乙酸钙不动杆菌（Acinetobactercalcoaceticus）WYS-A01-1，已于2017年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁宗胜，刘芳，张国防，谢宝贵，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
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