一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法技术

本发明专利技术提供一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法，包括如下步骤：无菌HCl溶液的制备、培养基的配制、培养基的灭菌、pH的调节和无菌检查。该方法具有方法简单、易操作、实用等优点。采用该方法制备的培养基凝固性良好、酸度易于控制、无污染、适用范围广等优点，同时可以避免采用传统方法配制时低pH条件下以琼脂为凝固剂的培养基不能凝固的缺陷。

A preparation method of low pH solid medium with agar as coagulant

The invention provides a preparation method of low pH solid culture medium with agar as coagulant, which comprises the following steps: preparation of aseptic HCl solution, preparation of culture medium, sterilization of culture medium, regulation of pH value and aseptic examination. The method is simple, easy to operate and practical. The medium prepared by this method has the advantages of good coagulability, easy control of acidity, no pollution and wide application range. At the same time, the defect that agar as coagulant can not be coagulated under low pH condition can be avoided.

【技术实现步骤摘要】
一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法。
技术介绍
固体培养基是微生物培养常用的培养基，在液体培养基的基础上加入适当的凝固剂，琼脂熔化后调节至需要的pH，再经过高压蒸汽灭菌后制备而成。琼脂是多糖类聚合物，具有凝固点高、含氮量低，凝固后可再融化、不易被微生物分解利用的特点，因而成为固体培养基配制时最为常用的凝固剂。然而在低pH（pH＜4.0）条件下，琼脂在灭菌时可被水解成低聚糖和还原糖，其凝固性丧失，导致以琼脂为凝固剂的固体培养基在低pH条件下（pH＜4.0）不能凝固。一些科学研究需要在低pH条件下培养微生物，包括耐低pH的微生物的分离和筛选、高酸度（低pH）条件下的抑菌效应研究、低pH条件的下微生物的生长特性研究等。已有的含琼脂的低pH固体培养基的配制方法是将琼脂和培养基中其它营养成份分别配制成琼脂溶液和营养液，然后将营养液pH进行调整，两者分别进行高压灭菌，最后再将两种溶液混合。这样虽然可以避免琼脂在灭菌时发生水解作用，但由于只对营养液pH进行了调整，混合后的溶液pH会发生变化，因而很难达到科学研究的要求。有鉴于此，本专利技术提供了一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法，为利用低pH固体培养基培养微生物奠定了基础。
技术实现思路
一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法，其特征是它包括以下步骤：（1）无菌HCl溶液的制备配置0.5~1.5M的HCl溶液，并用0.22µm微孔滤膜滤器过滤灭菌，得到无菌HCl溶液；（2）培养基的配制按照培养基配方称量各物质，溶解、煮沸后混合均匀，然后定容、分装；（3）培养基的灭菌将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌15～20min；（4）pH的调节灭菌后的培养基立即取出，在超净工作台中用无菌HCl溶液将培养基的pH调节为0.5～4.0；（5）无菌检查将调节完pH的培养基倒平板，置于28℃恒温培养箱中24h后进行无菌检查。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：（1）本专利技术配制的低pH固体培养基凝固性好。由于本方法经高压蒸汽灭菌后再调节pH，琼脂没有经过高酸度溶液的影响，不容易被水解为低聚糖或还原糖，因而不会影响培养基的凝固性。（2）本专利技术的操作方法简单。调节酸度用的HCl溶液，只需配制后用微孔滤膜滤器过滤即可。（3）本专利技术配制的低pH固体培养基，pH可低至0.5。而现有的通用固体培养基配置中，调节酸度的方法，pH低于4.5后则不能凝固。（4）本专利技术配制的低pH固体培养基无微生物污染，可以满足科学研究的需要。具体实施方式下面的实施例可以进一步说明本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1配置0.5M的HCl溶液，并用0.22µm微孔滤膜滤器过滤灭菌；按照牛肉膏蛋白胨培养基配方称量各物质，加入水中进行溶解，煮沸后混合均匀，然后定容、分装；将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌15min；灭菌后的培养基立即取出，在超净工作台中用无菌HCl溶液将培养基的pH分别调节为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0；将调节完pH的培养基分别倒平板，冷却后均凝固，置于28℃恒温培养箱中24h后无微生物生长。对照例1按照牛肉膏蛋白胨培养基配方称量各物质，加入水中进行溶解，煮沸后混合均匀，然后定容、分装；用0.5MHCl溶液将分装好的培养基的pH分别调节为3.5、4.0、4.5；将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌20min；将杀菌后的培养基分别倒平板，冷却24h后均呈液态或粘稠的液态，无法正常使用。实施例2配置1.0M的HCl溶液，并用0.22µm微孔滤膜滤器过滤灭菌；按照察氏培养基配方称量各物质，加入水中进行溶解，煮沸后混合均匀，然后定容、分装；将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌20min；灭菌后的培养基立即取出，在超净工作台中用无菌HCl溶液将培养基的pH分别调节为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0；将调节完pH的培养基分别倒平板，冷却后均凝固，置于28℃恒温培养箱中24h后无微生物生长。对照例2按照察氏培养基配方称量各物质，加入水中进行溶解，煮沸后混合均匀，然后定容、分装；用1.0MHCl溶液将分装好的培养基的pH分别调节为3.5、4.0、4.5；将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌20min；将杀菌后的培养基分别倒平板，冷却24h后均呈液态或粘稠的液态，无法正常使用。实施例3配置1.5M的HCl溶液，并用0.22µm微孔滤膜滤器过滤灭菌；按照PDA培养基配方称量各物质，加入煮好的马铃薯汁中进行溶解，煮沸后混合均匀，然后定容、分装；将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌20min；灭菌后的培养基立即取出，在超净工作台中用无菌HCl溶液将培养基的pH分别调节为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0；将调节完pH的培养基分别倒平板，冷却后均凝固，置于培养箱中24h后无微生物生长。对照例3按照PDA培养基配方称量各物质，加入煮好的马铃薯汁中进行溶解，煮沸后混合均匀，然后定容、分装；用1.5MHCl溶液将分装好的培养基的pH分别调节为3.5、4.0、4.5；将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌20min；将杀菌后的培养基分别倒平板，冷却24h后均呈液态或粘稠的液态，无法正常使用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法，其特征是它包括以下步骤：1）无菌HCl溶液的制备配置0.5~1.5M的HCl溶液，并用0.22µm微孔滤膜滤器过滤灭菌，得到无菌HCl溶液；2）培养基的配制按照培养基配方称量各物质，溶解、煮沸后混合均匀，然后定容、分装；3）培养基的灭菌将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅内，在1.05kg/cm2、121℃下灭菌15～20min；4）pH的调节灭菌后的培养基立即取出，在超净工作台中用无菌HCl溶液将培养基的pH调节为0.5～4.0；5）无菌检查将调节完pH的培养基倒平板，置于28℃恒温培养箱中24h后进行无菌检查。

【技术特征摘要】
1.一种以琼脂为凝固剂的低pH固体培养基的配制方法，其特征是它包括以下步骤：1）无菌HCl溶液的制备配置0.5~1.5M的HCl溶液，并用0.22µm微孔滤膜滤器过滤灭菌，得到无菌HCl溶液；2）培养基的配制按照培养基配方称量各物质，溶解、煮沸后混合均匀，然后定容、分装；3）培养基的...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱艳，张卫兵，杨积鹏，曹磊，马江，罗俏俏，曹瑛瑛，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62