一种用于快速检测非稳定物质的电化学传感器及利用其快速定量检测ATP的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于快速检测非稳定物质的电化学传感器及利用其快速定量检测ATP的方法，其主要是在超微电极表面电沉积了一层由Au纳米颗粒堆积的纳米花，形成了Au纳米花超微电极，再将双链DNA(dsDNA)组装在Au纳米花超微电极表面，在定量检测ATP时，将该电化学传感器进行后处理，使电极表面的活性位点被封闭，再将组装dsDNA的Au纳米花电极在ATP溶液中培育完成杂交反应，使电极表面的活性位点释放，利用方波伏安法即可快速定量测定出ATP；能够快速、准确地实现对性质不稳定物质的快速测定，而且检测结果精确、反应灵敏，克服了常规检测方法耗时长、检测结果误差大的问题。

An Electrochemical Sensor for Rapid Detection of Unstable Substances and a Method for Rapid Quantitative Detection of ATP

The invention relates to an electrochemical sensor for rapid detection of unstable substances and a method for rapid quantitative detection of ATP by using the sensor. The method mainly consists in electrodepositing a layer of nano-flowers piled up by Au nanoparticles on the surface of the ultramicro-electrode, forming an Au nano-flower ultramicro-electrode, and then assembling double-stranded DNA (dsDNA) on the Au nano-flower ultramicro-electrode. On the surface, when ATP was quantitatively detected, the electrochemical sensor was post-processed so that the active sites on the electrode surface were blocked, and then the hybridization reaction of the assembled dsDNA Au nanoflower electrode was accomplished in ATP solution, so that the active sites on the electrode surface were released. Rapid and accurate determination of unstable substances is realized, and the detection results are accurate and sensitive, which overcomes the problems of time-consuming and large error in the conventional detection methods.

【技术实现步骤摘要】
一种用于快速检测非稳定物质的电化学传感器及利用其快速定量检测ATP的方法
本专利技术属于ATP检测
，特别涉及一种用于快速检测非稳定物质的电化学传感器及基于该电化学传感器快速定量检测ATP的方法。
技术介绍
ATP(三磷酸腺苷)是一种不稳定的高能化合物，由一分子腺嘌呤，一分子核糖和三分子磷酸基团组成，水解时能释放大量的能量，是生物体内最直接的能量来源。ATP作为生物体内化学能的主要载体，是生物生物体内重要的底物，在细胞代谢的调节和整合中起着重要的作用。由于其在生物中无处不在，它也用作细胞存活和细胞损伤的指示剂。因ATP在细胞中的水平还与许多疾病有关，例如心血管疾病、心肌疾病和帕金森疾病等，且由于ATP是一种高能磷酸化合物，在细胞中，它能与ADP快速的发生相互转化实现贮能和放能，从而保证细胞各项生命活动的能量供应生，故而在生物体内ATP的含量是时刻不停的在发生变化的，处于动态平衡之中(Wat.ScLTech.Vol.36.No.10.pp.109-1IS.1997.)，具有不稳定性，因此，实现快速而又准确的定量检测生物体内及生物细胞中的ATP，对于生化研究和临床诊断都有着至关重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于快速检测非稳定物质的电化学传感器，其特征在于该电化学传感器由以下步骤制得：(1)将浓度均为1μmol/L的anti‑ATP适配体与其互补链混合置于含有1mmol/L的三(2‑羧乙基)膦和1mol/L的NaClO4的磷酸缓冲溶液中，加热至70～90℃，缓慢冷却至室温，得到dsDNA；(2)将Pt圆盘超微电极用超纯水超声清洗，以该Pt圆盘超微电极为工作电极，放入含有质量浓度为1.5％HCl与浓度为1.2mg/mL HAuCl4及0.1mol/L NaCl的混合液中，用循环伏安扫描法在Pt圆盘超微电极上电沉积Au，得到Au纳米花超微电极；(3)将步骤(2)的Au纳米花超微电极放入0.5m...

【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测非稳定物质的电化学传感器，其特征在于该电化学传感器由以下步骤制得：(1)将浓度均为1μmol/L的anti-ATP适配体与其互补链混合置于含有1mmol/L的三(2-羧乙基)膦和1mol/L的NaClO4的磷酸缓冲溶液中，加热至70～90℃，缓慢冷却至室温，得到dsDNA；(2)将Pt圆盘超微电极用超纯水超声清洗，以该Pt圆盘超微电极为工作电极，放入含有质量浓度为1.5％HCl与浓度为1.2mg/mLHAuCl4及0.1mol/LNaCl的混合液中，用循环伏安扫描法在Pt圆盘超微电极上电沉积Au，得到Au纳米花超微电极；(3)将步骤(2)的Au纳米花超微电极放入0.5mol/L的H2SO4中，利用循环伏安扫描法进行电化学清理，直至扫描的峰电流稳定，之后再用超纯水反复清洗后，完成Au纳米花超微电极的预处理；(4)将步骤(3)预处理好的Au纳米花超微电极置于步骤(1)的dsDNA中，反应10h～16h后，使dsDNA组装至Au纳米花超微电极上，得到用于快速检测非稳定物质的电化学传感器。2.根据权利要求1所述的用于快速检测非稳定物质的电化学传感器，其特征在于：步骤(1)和步骤(4)中的磷酸缓冲溶液的pH均为7.4。3.根据权利要求1所述的用于快速检测非稳定物质的电化学传感器，其特征在于所述步骤(1)的anti-ATP适配体的序列为：5’-ferrocene-C6-ACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGTTT-C6-SH-3’；互补链的序列为：5'-ACCTTCCTCCGCAATACTCCCCCAGGT-3'。4.根据权利要求1所述的用于快速检测非稳定物质的电化学传感器，其特征在于所述步骤(2)中的Pt圆盘超微电极的制备方法为：截取一段Pt微米线置于石英玻璃管中，将石英玻璃管的一端用环氧树脂胶封住，将放有Pt微米线的石英玻璃管放入P-2000激光拉制仪中...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭志慧，唐丽芳，郑行望，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61