一种区分羊绒皮质细胞的染色方法技术

本发明专利技术提供了一种区分羊绒皮质细胞的染色方法。方法为：将羊绒浸泡在石油醚与无水乙醇的混合液中，进行水浴加热1h，完成脱脂处理；所述水浴加热的温度为37℃；然后依次进行羊绒鳞片层的剥离和皮质细胞的染色；所述混合液中，石油醚与无水乙醇的体积比为1:1。本发明专利技术的染色工艺更省时省力，对操作人员的危害性小，对羊绒正、副皮质细胞的染色区分度高，正皮质细胞被染成深蓝色，副皮质细胞被染成浅蓝色，而且两者的染色更均匀，呈现出绚丽的渐变色彩。

A staining method for differentiating cashmere cortical cells

The invention provides a dyeing method for differentiating cashmere cortical cells. The method is as follows: the cashmere is immersed in the mixture of petroleum ether and absolute ethanol, heated by a water bath for 1 hour, and degreased; the temperature of the water bath is 37 C; the scales of the cashmere are stripped off and the cortical cells are stained sequentially; in the mixture, the volume ratio of petroleum ether to absolute ethanol is 1:1. The dyeing process of the invention is more time-saving, labor-saving, less harmful to operators, high degree of staining discrimination for cashmere orthocortical and paracortical cells, dark blue for orthocortical cells, light blue for paracortical cells, and more uniform staining for both, showing a gorgeous gradual color.

【技术实现步骤摘要】
一种区分羊绒皮质细胞的染色方法
本专利技术涉及染色工艺领域，尤其是一种区分羊绒皮质细胞的染色方法。
技术介绍
目前，对羊毛的区分正、副皮质细胞的研究很多，主要有的染料有2％氯化金水、亚甲基蓝、还原-银染色等。但是对羊绒区分正、副皮质细胞的研究还没有报道。羊毛纤维由约含80～90％的皮质层和10％左右的鳞片层以及少量的纤维表面膜组成。羊毛从外到内的由鳞片层和皮质层组成，鳞片层的存在使羊绒具有独特的毡缩性能而皮质层是组成羊毛的主体，对羊毛纤维的物理化学和机械性能起着决定作用。羊毛的外在形态特征是由其内部结构决定的，因此皮质层和皮质细胞的研究就十分重要了。羊毛的皮质层和皮质细胞包含着正皮质层和正皮质细胞以及副皮质层和副皮质细胞。在羊毛中正、副皮质细胞的含量约2:1，在羊毛纤维结构中呈双边分布。正皮质层分布在卷曲羊毛卷曲波的外侧，副皮质层分布在卷曲波的内侧。由于两部分在结构上的差异，正、副皮质细胞的受力情况不同，可能是导致羊毛弯曲的根本原因。本文根据羊毛的基本特性，深入研究羊绒的皮质细胞的结构特征。从羊绒的皮质细胞的含量和分布的结构进行分析其弯曲的原因显得尤为重要。羊绒从外到内分为两层，外表是由鳞片层构成，内层是由皮质细胞层构成。羊绒的鳞片层由片状鳞片细胞组成，鳞片细胞的抱合力很强对羊绒的皮质细胞主要起保护作用。鳞片层容易被酸、碱、氧化剂、还原剂破坏。由于鳞片层和皮质层之间有非均一性的细胞粘合物，即细胞间质。细胞粘合物甘氨酸和酪氨酸含量很高，甲酸是二者的可溶物。甲酸对皮质细胞也有腐蚀作用，所以要严格把控甲酸回流的时间，本文中采用高效快速的甲酸回流和超声波震荡相结合的方法进行破坏细胞间质，并溶胀和软化鳞片，从而将鳞片层剥离，同时也不破坏皮质细胞，使皮质细胞可以有效的染色。因此必须先对羊绒进行脱鳞片，使皮质细胞能够暴露出来，让染料可以充分与皮质细胞结合，HiroshiSakabe等通过碱性染料甲基蓝和孔雀绿对经甲酸和蛋白酶处理的美利奴羊毛的双边染色机制进行了研究。正、副皮质细胞中非角质化蛋白质网络结构存在差异，尤其是正、副皮质细胞间结构的不同，正皮质细胞层的细胞间质结构的渗透性比副皮质细胞层的渗透性好，它提供了染料的通道和结合基，在碱性染料的染色中起着至关重要的作用，细胞间质的双边分布最终导致了染色密度的不同。本试验中1％亚甲基蓝溶液是碱性染料，所以正皮质细胞被染成深蓝色，副皮质细胞被染成浅蓝色。目前，对羊毛区分正、副皮质细胞的染色方法一般为如下的过程。第一步，羊毛在染色前用实验室常规方法进行脱脂和除杂质，任意选取羊毛5g，卷入滤纸筒中，在索式提取器中先用乙醚提取8h，每小时循环8-10次，然后在用无水乙醇提取8h，每小时8-10次，取出，拣去杂质。将上述试剂在烧杯中用50℃蒸馏水反复洗涤5次，每次3min，然后移入浓度为5％的精制烷基苯磺酸钠(不含碱，防止纤维损伤)溶液中，45℃洗涤5次，每次5min，再用蒸馏水(50℃)洗涤5次，每次5min，以去除吸附的烷基苯磺酸钠。必须注意，在上述处理温度勿高，并避免剧烈搅动，否则发生毡缩，则试验就很难进行。净化的试样脱水后晾干。第二步，甲酸回流处理：取精制的羊毛品约1g，置于容量为250mL的三角瓶中，加入已蒸馏过的浓度为88％的甲酸100mL，加热至沸腾(107℃)，回流处理。回流的目的是避免甲酸的蒸发并保证条件一致。回流煮沸30min，取出试样，置于500mL的聚乙烯塑料瓶中，再注入50mL的甲酸，用超声震荡仪(电流300mA)30min，取出试样用蒸馏水充分洗净，脱水干燥，在显微镜下观察羊毛鳞片的剥离完全，用亚甲基蓝染色，正皮质细胞被染成深蓝色，副皮质细胞被染成浅蓝色。研究中发现正、副皮质细胞在酸碱方面存在显著性差异，正皮质层反映出耐碱性很差，副皮质层具有较强的耐碱性。为了验证正、副皮质细胞在酸碱条件的变化，首先将羊毛皮质层用亚甲基蓝染色，将染色试样放在载玻片上，盖上盖玻片，在试样上滴加1％的醋酸溶液，在显微镜下观察发现经甲酸回流处理的羊毛皮质细胞沿羊毛长度上的分布与原毛相反，副皮质层分布在卷曲羊毛卷曲波的外侧，正皮质层转向卷曲波的内侧。若向染色的皮质细胞层滴加1％NaOH溶液，在显微镜下发现正皮质层迅速膨胀。正皮质层迅速转向卷曲波的外侧，并失去其卷曲形状，成为圆环状，正皮质层出现腐蚀破坏。以上方法中，脱脂时间过长，导致染色工艺费时、费工、费钱，若将该工艺直接运用于羊绒的染色，也必然存在以上问题。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种区分羊绒皮质细胞的染色方法，该染色方法缩短了脱脂时间，降低了脱脂溶剂对操作者的刺激，从而提高了染色效率和工艺安全度。为了解决以上技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：一种区分羊绒皮质细胞的染色方法，包括下列步骤：将羊绒浸泡在石油醚与无水乙醇的混合液中，进行水浴加热1h，完成脱脂处理；所述水浴加热的温度为37℃；然后依次进行羊绒鳞片层的剥离和皮质细胞的染色；所述混合液中，石油醚与无水乙醇的体积比为1:1。以上染色方法与现有技术的主要区别在于：改变了脱脂所用的溶剂，本专利技术采用1:1石油醚/无水乙醇为脱脂溶剂，脱脂速率更快，而且两种试剂对人体鼻粘膜的刺激小于乙醚，使操作者的安全得到保障。综上，与现有技术相比，本专利技术的染色方法省时、省力，安全性更高。本专利技术中，羊绒鳞片层的剥离、用染色液染色这两步的操作方法可以参照羊毛区分正、副皮质细胞的工艺。在脱脂时，为防止乙醇挥发，浸泡的容器应当密封。另外，在脱脂之前，应当进行必要的预处理——除杂除尘：将羊绒在50mL烧杯中经60℃温水清洗多次(次数视情况而定，一般5次已足够)，用镊子反复的搅拌，去除羊绒中的砂尘和皮屑。在脱脂之后，还需清洗羊绒上残留的溶剂、烘干，再进行鳞片剥离、染色等工序。清洗溶剂的方法为：用清水反复清洗。烘干的方法为在50℃下烘干，烘干时间为30min。以上染色方法还可以进一步改进，具体如下。优选地，所述羊绒鳞片层的剥离方法为：先将羊绒在浓度为88％的甲酸中回流加热，然后在浓度为88％的甲酸中超声裂解。本专利技术采用甲酸回流和甲酸超声震荡裂解相结合的方法，能达到剥离更完全、用时更短等效果。在甲酸中回流适当时间后，羊绒的鳞片细胞松动，此时再进行震荡裂解，剥离更完全，鳞片层剥落后，皮质细胞暴露，且皮质细胞之间的致密结构被破坏，使得亚甲基蓝可以充分染色。甲酸的浓度对剥离程度、速率有重要影响，经筛选，当甲酸浓度为88％(体积)时，效果最佳。优选地，所述回流加热的时间为15min。回流时间会影响工艺成本和剥离效果，经筛选，当回流15min后，既能满足超声震荡剥离细胞的要求，又能将成本控制在合理范围内。优选地，所述超声裂解的方法为：在功率为52.5W的超声震荡仪中超声30min，在此过程中，每工作2s停止6s。超声的功率、震荡频率对剥离有重要影响，经筛选，在功率为52.5W的超声震荡仪中超声30min，在此过程中，每工作2s停止6s，获得的剥离效果最佳。优选地，所述回流加热时，每1g羊绒，加入50mL浓度为88％的甲酸。回流时甲酸的用量对染色工艺的综合效益有重要影响，用量过多，则成本过高，用量过低则剥离不完全。经筛选，每1g羊绒，加入50mL浓度为88％的甲酸的综合效益高。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种区分羊绒皮质细胞的染色方法，其特征在于，包括下列步骤：将羊绒浸泡在石油醚与无水乙醇的混合液中，进行水浴加热1h，完成脱脂处理；所述混合液中，石油醚与无水乙醇的体积比为1:1；所述水浴加热的温度为37℃；然后依次进行羊绒鳞片层的剥离和皮质细胞的染色。

【技术特征摘要】
1.一种区分羊绒皮质细胞的染色方法，其特征在于，包括下列步骤：将羊绒浸泡在石油醚与无水乙醇的混合液中，进行水浴加热1h，完成脱脂处理；所述混合液中，石油醚与无水乙醇的体积比为1:1；所述水浴加热的温度为37℃；然后依次进行羊绒鳞片层的剥离和皮质细胞的染色。2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述羊绒鳞片层的剥离方法为：先将羊绒在浓度为88％的甲酸中回流加热，然后在浓度为88％的甲酸中超声裂解。3.根据权利要求2所述的染色方法，其特征在于，所述回流加热的时间为15min。4.根据权利要求2所述的染色方法，其特征在于，所述超声裂解的方法为：在功率为52.5W的超声震荡仪中超声30min，在此过程中，工作2s停止6s。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月琴，张英杰，段春辉，高昆，李闰婷，王康，尹雪姣，杨若晨，曹文新，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北,13