含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体及其应用。所述质粒载体含有CMVFny株系RNA2全序列，并在2a蛋白终止密码子后插入有烟草PDS基因199bp的片段。该质粒载体与含野生型CMVFny RNA1和野生型CMVFnyRNA3的质粒通过农杆菌浸润方法接种本氏烟，可显示弱致病症状以及不依赖仪器可裸眼判断其诱导基因沉默的能力；为弱毒疫苗的深入研究提供极大便利。

Cucumber mosaic virus RNA2 attenuated mutant plasmid vector containing tobacco PDS gene fragment and its application

The present invention discloses attenuated mutant plasmid vector of cucumber mosaic virus RNA 2 containing tobacco PDS gene fragment and its application. The plasmid vector contains the complete RNA 2 sequence of CMVFny strain and inserts a 199bp fragment of tobacco PDS gene after the codon termination of 2A protein. The plasmid vector and the plasmid containing wild type CMVFny RNA 1 and wild type CMVFny RNA 3 were inoculated with Agrobacterium tumefaciens, which showed the weakly pathogenic symptoms and the ability of inducing gene silencing without the aid of instruments.

【技术实现步骤摘要】
含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体及其应用
本专利技术涉及植物病毒学和分子生物学
，具体涉及一种含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体及其应用。
技术介绍
黄瓜花叶病毒(Cucumermosaicvirus，CMV)是目前已知的寄主范围最广的植物病毒之一，可侵染100多科2000多种植物。造成多种具有重要经济价值的植物(农作物、园艺作物等)出现黄化、矮化、畸形等症状，严重影响其产量和品质。对于植物病毒病的防治，最有效的方法是抗病品种的筛选与培育，但其存在育种周期长、抗病品种抗性易丧失等不足。另一种方法是弱毒交叉保护，是利用弱毒刺激植物自身的免疫系统而防治后期侵染的强毒株系；是一种行之有效的病毒防治策略。弱毒突变体可以是天然存在的，也可以通过分子生物学手段进行人工制备。CMV基因组由三条RNA(RNA1、RNA2和RNA3)组成，共编码5个蛋白。RNA1编码的1a蛋白是病毒复制酶重要组分。RNA2编码2a与2b蛋白，其中，2a蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性，与1a蛋白共同参与病毒的体内复制(Hampton，1992本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体pCB301‑CMVFny2‑PDS199‑Q，其特征在于，所述质粒载体含有CMVFny株系RNA2全序列，并在2a蛋白终止密码子后插入有烟草PDS基因199bp的片段。

【技术特征摘要】
1.一种含烟草PDS基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体pCB301-CMVFny2-PDS199-Q，其特征在于，所述质粒载体含有CMVFny株系RNA2全序列，并在2a蛋白终止密码子后插入有烟草PDS基因199bp的片段。2.根据权利要求1所述的质粒载体，其特征在于，所述烟草PDS基因199bp的片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的质粒载体，其特征在于，所述质粒载体的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.权利要求1-3任一项所述的质粒载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以CMVFnyRNA2侵染性克隆质粒pCB301-CMVFny2为模板，利用反向PCR扩增方法获得中间载体；(2)利用RT-PCR从烟草中扩增得到烟草PDS基因片段；(3)利用酶切和连接方法将PD...

【专利技术属性】
技术研发人员：原雪峰，刘珊珊，曹欣然，于成明，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37