坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法及其产品和应用技术

本发明专利技术涉及一种坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法及其产品和应用，通过将非结构蛋白NS2A截短，然后进行重组表达，截短后容易表达，且表达量高；表达中通过优化表达条件使重组蛋白在包涵体内表达，便于纯化，纯化的蛋白具有免疫原性，免疫动物后能够获得效价高的多抗血清，并且制得的抗体灵敏度高，可用于坦布苏病毒非结构蛋白NS2A的检测以及并检测坦布苏病毒在感染不同时期非结构蛋白NS2A在细胞内的定位变化情况，对坦布苏病毒的研究具有重要意义。

Expression method of truncus virus non structural protein NS2A truncated protein and its product and Application

The present invention relates to an expression method and its product and application of the truncated protein NS2A of Tambusu virus, by truncating the non-structural protein NS2A and then recombinant expressing it, the truncated protein is easy to express and the expression quantity is high, and the recombinant protein can be expressed in the inclusion body by optimizing the expression conditions so as to facilitate purification. The purified protein has immunogenicity, and can be immunized with high titer of multi-antiserum. The antibody has high sensitivity. It can be used to detect the non-structural protein NS2A of Tambusu virus and detect the localization of the non-structural protein NS2A in cells of Tambusu virus at different stages of infection. The research of poison is of great significance.

【技术实现步骤摘要】
坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法及其产品和应用
本专利技术属于生物
，涉及坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，还涉及表达的截短蛋白和在制备多克隆抗体中的应用。
技术介绍
坦布苏病毒病(Tembusuvirusdisease)是由坦布苏病毒(Tembusuvirus，TMUV)引起的急性传染病，坦布苏病毒是属于黄病毒科黄病毒属的病毒，主要感染水禽，引起出血性卵巢炎和神经症状，临床症状主要为食欲下降或废绝，体重急剧下降和产蛋量下降。随着我国养禽业规模的不断扩大，坦布苏病毒作为威胁我国养禽业的主要病毒之一，引起了巨大的经济损失。但目前还没有适合的用于治疗坦布苏病毒感染的特效药和治疗方案。坦布苏病毒非结构蛋白NS2A在病毒的基因的复制和病毒的装配中有重要的作用，但到目前为止，有关非结构蛋白NS2A的功能及定位情况还没有详细的研究，而使用标签抗体不管是在研究定位或其功能都有很大的局限，而全长NS2A蛋白是一个拥有八个跨膜区的跨膜蛋白且含有很多稀有密码子，因此我们提供了一种截短方案便于蛋白的表达，同时制备的抗体能够高特异性及高灵敏度的识别全长的NS2A蛋白，NS2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：1)以感染坦布苏病毒的鸭胚成纤维细胞提取的RNA为模板，反转录合成cDNA，然后以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物进行PCR扩增，扩增获得NS2A截短基因；2)将步骤1)扩增获得的NS2A截短基因连入表达载体获得重组表达载体，然后将重组表达载体转化宿主表达菌，获得工程菌，然后将工程菌用IPTG诱导表达，经纯化获得坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白。

【技术特征摘要】
1.坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：1)以感染坦布苏病毒的鸭胚成纤维细胞提取的RNA为模板，反转录合成cDNA，然后以SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示序列为引物进行PCR扩增，扩增获得NS2A截短基因；2)将步骤1)扩增获得的NS2A截短基因连入表达载体获得重组表达载体，然后将重组表达载体转化宿主表达菌，获得工程菌，然后将工程菌用IPTG诱导表达，经纯化获得坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白。2.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2)中，所述表达载体为pGEX-4T-1质粒。3.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2)中，所述宿主表达菌为BL21(DE3)。4.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2)中，所述诱导表达为将工程菌培养至A600＝0.6时，按终浓度为0.4～0.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈舜，姜博文，张伟，程安春，汪铭书，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51