一种赶黄草提取物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种赶黄草提取物及其应用，所述赶黄草提取物按如下方法制备：赶黄草用体积浓度70％乙醇水溶液浸提、浓缩后用石油醚、乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取物用体积浓度30％乙醇水溶液、体积浓度80％乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度80％乙醇水溶液的洗脱液，减压浓缩至干，获得赶黄草提取物，其中s1、s2和s3质量含量分别为8.19±0.63％，24.86±2.02％和0.92±0.01％。通过体内外实验证明，该提取物不仅能够防治慢性酒精性肝病，预防或治疗肝脏氧化应激或脂质蓄积，还能够通过抑制肠道菌群的增殖来改善由于饮酒造成的肠道菌群紊乱。

A Chinese herb extract and its application

The invention discloses a yellow rush extract and its application. The yellow rush extract is prepared according to the following methods: yellow rush is extracted by 70% ethanol aqueous solution with volume concentration, extracted by petroleum ether and ethyl acetate after concentration, and extracted by ethyl acetate with 30% ethanol aqueous solution with volume concentration and 80% ethanol aqueous solution with volume concentration. The eluent of 80% ethanol aqueous solution was collected and concentrated to dry. The extracts were obtained. The contents of s1, s 2 and S3 were 8.19 (+ 0.63%), 24.86 (+ 2.02%) and 0.92 (+ 0.01%) respectively. Experiments in vivo and in vitro show that the extract can not only prevent and treat chronic alcoholic liver disease, prevent or treat oxidative stress or lipid accumulation in the liver, but also improve the intestinal flora disorder caused by drinking by inhibiting the proliferation of intestinal flora.

【技术实现步骤摘要】
一种赶黄草提取物及其应用(一)
本专利技术涉及一种赶黄草提取物及其应用。(二)
技术介绍
赶黄草，学名扯根菜(PenthorumChinesePursh)，俗名水泽兰、水杨柳等，为虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜属(Penthorum)植物。作为传统苗药，赶黄草被苗疆人誉为“神仙草”，是苗族治疗肝病的常用方，食用赶黄草的水煎剂可避免摄入过量酒精引起的肝损伤，其嫩苗可食用。近年来，通过不等剂量赶黄草对CCl4诱导的肝损伤大小鼠模型、酒精灌胃并饲喂含硫酸亚铁饲料诱导的酒精性脂肪肝大鼠模型、脂肪乳灌胃诱导的脂肪肝大鼠模型、胆管结扎诱导的大鼠梗阻性黄疸模型、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积大鼠模型、五粮春灌胃诱导的小鼠醉酒模型的干预，验证了赶黄草对肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝具有保护作用，有抗肝炎病毒和解酒作用，有利胆退黄之效。以赶黄草为原料制备的中成药已被应用于临床，治疗包括乙肝引起的肝纤维化、长期饮酒引起的酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化等肝脏疾病。赶黄草中已鉴定的化学成分超过50种，可以大致分为黄酮类化合物、有机酸、甾体类化合物和挥发油，但还没有充足的研究阐明这些化合物与赶黄草药效的对应关系。肠道菌群紊乱引起很多疾病，例如肠易激综合征、代谢综合征、抑郁症、癌症等。大量研究证明肠道菌群紊乱也是导致酒精性和非酒精性肝病、脂肪肝、肝纤维化乃至肝癌的重要原因之一。有研究发现赶黄草提取物具有抑菌活性，然而其中的具体活性成分并不清楚，关于其改善肠道菌群紊乱有关的研究更是史无前例。赶黄草虽作为一类保肝护肝药在临床使用，有关药物活性成分以及防病治病的理论研究却依然不足。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种赶黄草提取物及其应用，本专利技术方法制备的赶黄草提取物，具有抗氧化、防止脂质蓄积、调节肠道菌群、抑菌的活性。该方法制备的赶黄草可以被用于改善肠道微生态环境、防治肝脏脂质蓄积和慢性酒精性肝病。本专利技术采用的技术方案是：本专利技术提供一种赶黄草提取物，所述赶黄草提取物按如下方法制备：(1)取赶黄草，加入体积浓度70％乙醇水溶液混合后冷凝回流浸提1-3小时，过滤，收集滤液和滤饼，滤液(优选多次浸提，合并多次浸提的滤液)减压浓缩至十分之一体积，获得浓缩物；所述体积浓度70％乙醇水溶液体积用量以赶黄草重量计为10-15ml/g；(2)取浓缩物用等体积石油醚萃取，取水层(即下层)加入乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层为无色透明，浓缩至干，获得乙酸乙酯萃取物；(3)取乙酸乙酯萃取物用体积浓度30％乙醇水溶液溶解后，加入体积浓度30％乙醇水溶液平衡的大孔树脂色谱柱中，分别用体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度80％乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度80％乙醇水溶液的流出液，减压浓缩至干，获得赶黄草提取物。进一步，所述赶黄草以赶黄草粉末形式加入，所述赶黄草粉末是将赶黄草自然风干，过80目筛，获得赶黄草粉末。进一步，步骤(3)所述大孔树脂型号为HPD500。进一步，步骤(3)溶解乙酸乙酯萃取物所用体积浓度30％乙醇水溶液的体积用量以乙酸乙酯萃取物重量计为0.2～2.5ml/g，所述体积浓度30％乙醇水溶液、体积浓度80％乙醇水溶液和体积浓度95％乙醇水溶液分别洗脱1～10个柱体积(优选1个柱体积)。本专利技术所述赶黄草提取物富含大环多酚乔松素苷类化合物(下文称HHDPP)，主要成分是：乔松素-7-O-[4”,6”-(S)-六羟基联苯二酰基]-β-D-葡萄糖苷(S1)、乔松素-7-O-[3”-O-没食子酰基-4”,6”-(S)-六羟基联苯二酰基]-β-D-葡萄糖苷(S2)，乔松素二氢查儿酮-7-O-[3”-O-没食子酰基-4”,6”-(S)-六羟基联苯二酰基]-β-D-葡萄糖苷(S3)，其中S1、S2和S3质量含量分别为8.19±0.63％，24.86±2.02％和0.92±0.01％。赶黄草提取物分离纯化S1、S2和S3的方法为：采用DionexUltimate3000制备型HPLC，用WelchUltimateXB-C1810×250mm10μm柱，由流动相由A:乙腈和B：含0.1％甲酸的蒸馏水在30分钟内流动相A的浓度由20％增至50％，将1mg/mlHHDPP(溶于20％乙腈和0.1％甲酸水溶液)中的S1，S2和S3分别在Rt＝17.5分钟、Rt＝20.5分钟和Rt＝22分钟洗脱出。根据Rt值收集洗脱物并经旋转蒸发仪干燥。本专利技术提供一种所述赶黄草提取物在制备预防或治疗酒精性肝病药物中的应用。本专利技术涉及一种所述赶黄草提取物在制备预防或治疗肝脏氧化应激或脂质蓄积药物中的应用。本专利技术还提供一种所述赶黄草提取物在制备肠道菌群调节剂中的应用。本专利技术涉及一种所述赶黄草提取物在制备抗菌剂中的应用，具体所述抗菌剂为大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌，粪肠球菌，表皮葡萄球菌，嗜热链球菌，或鼠李糖乳杆菌。与现有技术相比，本专利技术有益效果主要体现在：本专利技术提供一种赶黄草提取物，富含大环多酚乔松素苷类化合物(下文称HHDPP)，主要成分是：乔松素-7-O-[4”,6”-(S)-六羟基联苯二酰基]-β-D-葡萄糖苷(S1)、乔松素-7-O-[3”-O-没食子酰基-4”,6”-(S)-六羟基联苯二酰基]-β-D-葡萄糖苷(S2)，乔松素二氢查儿酮-7-O-[3”-O-没食子酰基-4”,6”-(S)-六羟基联苯二酰基]-β-D-葡萄糖苷(S3)，其中s1、s2和s3质量含量分别为8.19±0.63％，24.86±2.02％和0.92±0.01％。通过体内外实验证明，该提取物不仅能够防治慢性酒精性肝病，预防或治疗肝脏氧化应激或脂质蓄积，还能够通过抑制肠道菌群的增殖来改善由于饮酒造成的肠道菌群紊乱。(四)附图说明图1：赶黄草HHDPP的HPLC分析。图2：S1LC-MS分析图谱([M+H]+＝721)及其结构式。图3：S2LC-MS分析图谱([M+H]+＝873)及其结构式(A)和S3LC-MS分析图谱(B)。图4：本专利技术HHDPP及其中主要化合物S1和S2对慢性酒精性肝病小鼠血清中ALT含量的影响，PF-对照组，AF-模型组，HHDPP-L为HHDPP低剂量组，HHDPP-M为HHDPP中剂量组，HHDPP-H为HHDPP高剂量组，S1为S1化合物组，S2为S2化合物组。图5：本专利技术HHDPP及其中主要化合物S1和S2对慢性酒精性肝病小鼠肝脏中TG含量的影响，PF为对照组，AF为模型组，HHDPP-L为HHDPP低剂量组，HHDPP-M为HHDPP中剂量组，HHDPP-H为HHDPP高剂量组，S1为S1化合物组，S2为S2化合物组。图6：本专利技术HHDPP及其中主要化合物S1和S2对慢性酒精性肝病小鼠肝脏中TC含量的影响，PF为对照组，AF为模型组，HHDPP-L为HHDPP低剂量组，HHDPP-M为HHDPP中剂量组，HHDPP-H为HHDPP高剂量组，S1为S1化合物组，S2为S2化合物组。图7：各实验组肝脏HE染色结果，a、正常对照组；b、慢性酒精性肝病模型组；c、HHDPP低剂量组；d、HHDPP中剂量组；e、S1治疗组；f、S2治疗组。图8：不同浓度HHDPP对H2O2作用下NCTC1469细胞的LDH(乳酸脱氢酶)活性影响，UT为DM本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种赶黄草提取物，其特征在于所述赶黄草提取物按如下方法制备：(1)取赶黄草，加入体积浓度70％乙醇水溶液混合后冷凝回流浸提1‑3小时，过滤，收集滤液和滤饼，滤液减压浓缩至十分之一体积，获得浓缩物；(2)取浓缩物用等体积石油醚萃取，取水层加入乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层为无色透明，浓缩至干，获得乙酸乙酯萃取物；(3)取乙酸乙酯萃取物用体积浓度30％乙醇水溶液溶解后，加入体积浓度30％乙醇水溶液平衡的大孔树脂色谱柱中，分别用体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度80％乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度80％乙醇水溶液的流出液，减压浓缩至干，即为赶黄草提取物。

【技术特征摘要】
1.一种赶黄草提取物，其特征在于所述赶黄草提取物按如下方法制备：(1)取赶黄草，加入体积浓度70％乙醇水溶液混合后冷凝回流浸提1-3小时，过滤，收集滤液和滤饼，滤液减压浓缩至十分之一体积，获得浓缩物；(2)取浓缩物用等体积石油醚萃取，取水层加入乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层为无色透明，浓缩至干，获得乙酸乙酯萃取物；(3)取乙酸乙酯萃取物用体积浓度30％乙醇水溶液溶解后，加入体积浓度30％乙醇水溶液平衡的大孔树脂色谱柱中，分别用体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度80％乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度80％乙醇水溶液的流出液，减压浓缩至干，即为赶黄草提取物。2.如权利要求1所述赶黄草提取物，其特征在于所述赶黄草以赶黄草粉末形式加入，所述赶黄草粉末是将赶黄草自然风干，过80目筛，获得赶黄草粉末。3.如权利要求1所述赶黄草提取物，其特征在于步骤(1)所述体积浓度70％乙醇水溶液体积用量以...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋凯，王照磊，金卓，梁文星，陈鑫珉，丁滨，窦晓兵，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33