用于生产酵母提取物的方法技术

一种用于生产酵母提取物的方法，该方法包括以下步骤：a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；b)孵育以便水解该蛋白质，其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生产酵母提取物的方法
本专利技术涉及使用包含蛋白酶的酶组合物生产酵母提取物的方法。序列表的引用本申请含有计算机可读形式的序列表。将该计算机可读形式通过引用结合在此。专利技术背景酵母提取物被广泛地使用，例如，用于食品行业中的调味剂，用于微生物发酵培养基，并且用作保健食品。所述的酵母提取物的生产被描述于文献中，参见例如，Kelly,M.(1982)，YeastExtract[酵母提取物](在：IndustrialEnzymology[工业酶学]中，Godfrey,T.编著)或Chae,H.J.等人，(2001),BioresourceTechnology[生物资源技术]76,253-258。它典型地是通过以下步骤制造的：通过酸水解或机械或化学破坏细胞分解酵母，然后通过用内源性酶自溶降来解酵母的大分子结构，尤其是蛋白，为可溶性材料的最大量。可能地，添加外源酶，包括蛋白酶，如木瓜蛋白酶，来增进酵母自身酶的作用。在酶水解之后，将酵母提取物自细胞碎片分离并且可能进行巴氏消毒并且浓缩。GB2075054A披露了一种用于生产酵母提取物的方法，其中木瓜蛋白酶用作蛋白水解酶。WO2008/077890披露了一种使用衍生自拟诺卡氏菌属物种(Nocardiopsissp.)NRRL18262的蛋白酶生产酵母提取物的方法。但仍然希望生产具有高提取物产量的酵母提取物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种生产酵母提取物及其酶组合物的改进方法。专利技术人惊奇地发现使用包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶的酶组合物可以实现同基因效应，例如，这种酶组合物可用于有效提高酵母提取物的产量，同时，本专利技术制备的酵母提取物的浊度和味道与仅用木瓜蛋白酶作为外源蛋白酶制备的酵母提取物几乎相同。在一方面，本专利技术涉及用于生产酵母提取物的方法，该方法包括：a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；和b)进行孵育以便水解该蛋白质，其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且该第二蛋白酶选自由以下组成的组：(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQIDNO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQIDNO:2的氨基酸1-177，或由其组成；(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQIDNO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQIDNO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；(iii)变体，该变体包含本文中的SEQIDNO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQIDNO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。在优选的实施例中，该第二蛋白酶衍生自热子囊菌属(Thermoascus)，优选地衍生自嗜热子囊菌(Thermoascusaurantiacus)，最优选地衍生自嗜热子囊菌CGMCC编号0670。在优选的实施例中，该酵母是酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluveromyces)或假丝酵母属(Candida)，优选地所述酵母是酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或葡萄汁酵母(Saccharomycesuvarum)。在优选的实施例中，该木瓜蛋白酶以0.0125mg-12.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.025mg-5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.125mg-2.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.25mg-1.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.5mg-1mg/g酵母干物质的量存在。在优选的实施例中，基于该蛋白酶活性，该木瓜蛋白酶以30U-30000U/g酵母干物质的量存在、优选地以60U-12000U/g酵母干物质的量存在、优选地以300U-6000U/g酵母干物质的量存在、优选地以600U-3600U/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以1200U-2400U/g酵母干物质的量存在。在优选的实施例中，该第二蛋白酶以0.002mg-2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.004mg-0.4mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.02mg-0.2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.04mg-0.08mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在。在优选的实施例中，基于该蛋白酶活性，该第二蛋白酶以0.001-1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.002-0.2FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.01-0.1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.02-0.04FLPU-A/g酵母干物质的量存在。在其他方面，本专利技术涉及包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶的酶组合物，并且涉及该酶组合物生产酵母提取物的用途，并且涉及由本专利技术生产的酵母提取物。具体实施方式蛋白酶术语“蛋白酶”在此被定义为水解肽键的酶。它包括属于EC3.4酶组(包括其13个亚类中的每一个)的任何酶。EC编号参考来自NC-IUBMB的1992年酶命名法[EnzymeNomenclature1992]，加利福尼亚州圣地亚哥的学术出版社(AcademicPress，SanDiego，California)，分别包括在Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1994，223，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1995，232，1-6；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1996，237，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1997，250，1-6；以及Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1999，264，610-650中出版的增刊1-5。命名会定期得以增补和更新；参见例如万维网(WWW)于http://www.chem.qmw.ac.uk/iubmb/enzyme/index.html。蛋白酶也称为，例如肽酶、蛋白酶、肽水解酶、或蛋白水解酶。用于根据本专利技术所述的用途的蛋白酶属于内部作用于多肽链的内切型(肽链内切酶)。对于用于根据本专利技术所述用途的蛋白酶的起源没有限制。因此，术语蛋白酶不仅包括自然或野生型的蛋白酶，还包括它们的展示出蛋白酶活性的任一突变体、变体、片段等等，以及合成的蛋白酶，例如改组蛋白酶以及共有蛋白酶。可以例如通过定点诱变、PCR(在PCR反应中使用含有所希望突变的PCR片段作为引物之一)、或随机诱变来制备此类经基因工程改造的蛋白酶，其是本领域通常已知的。共有蛋白质的制备描述于例如EP897985中。用于本上下文中的蛋白酶变体的实例是其中一个或多个氨基酸已经缺失、插入或被其他氨基酸取代的蛋白酶。木瓜蛋白酶，也被称为木瓜蛋白酶I，是存在于木瓜(番木瓜)和山木瓜(Vasconcelleacundinamarcensis)中的半胱氨酸蛋白酶(EC3.4.22.2)。木瓜蛋白酶由具有三个二硫键的单一多肽链和酶活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产酵母提取物的方法，该方法包括：a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；和b)进行孵育以便水解该蛋白质，其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且该第二蛋白酶选自由以下组成的组：(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1‑177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1‑177，或由其组成；(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1‑177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1‑177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1‑177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1‑177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.28 CN PCT/CN2015/0992091.一种用于生产酵母提取物的方法，该方法包括：a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；和b)进行孵育以便水解该蛋白质，其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且该第二蛋白酶选自由以下组成的组：(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQIDNO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQIDNO:2的氨基酸1-177，或由其组成；(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQIDNO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQIDNO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；(iii)变体，该变体包含本文中的SEQIDNO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQIDNO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。2.如权利要求1所述的方法，其中该第二蛋白酶衍生自嗜热子囊菌属(Thermoascus)，优选地衍生自嗜热子囊菌(Thermoascusaurantiacus)，并且最优选地衍生自嗜热子囊菌CGMCC编号0670。3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该酵母是酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluveromyces)或假丝酵母属(Candida)，优选地该酵母是酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或葡萄汁酵母(Saccharomycesuvarum)。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该木瓜蛋白酶以0.0125mg-12.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.025mg-5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.125mg-2.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.25mg-1.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.5mg-1mg/g酵母干物质的量存在。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于该蛋白酶活性，该木瓜蛋白酶以30U-30000U/g酵母干物质的量存在、优选地以60U-12000U/g酵母干物质的量存在、优选地以300U-6000U/g酵母干物质的量存在、优选地以600U-3600U/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以1200U-2400U/g酵母干物质的量存在。6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该第二蛋白酶以0.002mg-2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.004mg-0.4mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.02mg-0.2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.04mg-0.08mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在。7.如前述权利要求中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永江，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK