西青果提取物、西青果提取物单体化合物及其在抑制单胺氧化酶B活性中的应用制造技术

本发明专利技术公开了西青果提取物、西青果提取物单体化合物及其在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。西青果(Terminalia chebula Retz.)提取物XQG‑EA‑7是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷‑丙酮‑甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。西青果提取物的5种单体化合物是该西青果提取物经反相柱分离得到；分离体系是中压玻璃层析柱，以水‑甲醇体系，梯度洗脱得到。本发明专利技术提供上述西青果提取物、西青果提取物5种单体化合物在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。本发明专利技术还提供单体化合物XQG‑EA‑7‑6的HPLC鉴定方法。

Monomer Compounds of Extracts from Celastrus sinensis and Celastrus sinensis and Their Application in Inhibiting Monoamine Oxidase B Activity

The present invention discloses the extract of broccoli fruit, the monomer compound of broccoli fruit extract and its application in inhibiting the activity of monoamine oxidase B. XQG_EA8209 The five monomers of the extract were separated by reversed phase column, and the separation system was a medium pressure glass column with gradient elution by water methanol system. The present invention provides the application of five monomer compounds of the extract and the extract in inhibiting the activity of monoamine oxidase B. The invention also provides a HPLC identification method for the monomer compound XQG EA 7 6.

【技术实现步骤摘要】
西青果提取物、西青果提取物单体化合物及其在抑制单胺氧化酶B活性中的应用
本专利技术涉及西青果提取物、西青果提取物单体化合物，以及两者在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。属于天然产物化学领域。
技术介绍
单胺氧化酶(MAO)是位于神经元和非神经元细胞线粒体外膜的氧化还原酶，能催化内源性单胺神经递质与胺异生素的氧化脱氨。人体内含有两种单胺氧化酶，分别是单胺氧化酶A(MAO-A)、单胺氧化酶B(MAO-B)。MAO活性的变化与某些中枢神经系统疾病和外周神经系统疾病有关。异常MAO-A活动与抑郁、焦虑和精神紊乱有关，而患有阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病的病人脑内的MAO-B活性异常升高。单胺氧化酶B存在于动物的多种组织中，如肝、肾、脑、甲状腺等。在脑5-羟色胺能神经元、组胺能神经元和神经胶质细胞中，能够催化多巴胺、血清素等单胺类神经递质氧化脱氨基生成相应的醛和过氧化氢；在肝脏中，主要催化苄胺、苯乙基胺、酪胺等外源胺生成二氧化碳及氨；它还可氧化环境毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)生成1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)，MPP+是一种能够抑制线粒体功能并导致多巴胺能神经元退化的神经毒素。MAO-B抑制剂通过抑制单胺氧化酶B的活性，减少多巴胺分解代谢，提高突触间隙多巴胺浓度，从而改善帕金森病的症状。临床上，MAO-B抑制剂如司来吉兰、雷沙吉兰已被用于治疗帕金森病。然而，司来吉兰有选择性差、不良反应大的缺点，能增加高血压和心脏病发生率，其在体内会代谢为安非他命类的衍生物，有中枢兴奋的毒副作用；雷沙吉兰对两种MAO选择性不够强，同时其对酶活性抑制的不可逆性仍然不是理想的药物。因此，从天然资源中寻找更好的MAO-B抑制剂对于药物发现具有重要意义。西青果是我国传统药材，主要分布于巴基斯坦与印度，在我国主要分布于广东、云南等地区。传统医药对西青果药用功效的使用主要集中在清热生津、解毒涩肠，现代医药对西青果的化学成分及相应生物活性研究较少，对于西青果的生物活性潜质挖掘不足。尚无文献报道西青果对单胺氧化酶B的抑制活性。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对现有技术的不足，提供西青果提取物、西青果提取物5种单体化合物在抑制单胺氧化酶B活性中的应用，以及一种西青果提取物单体化合物。为实现上述目的，本专利技术首先提供西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物XQG-EA-7，技术方案如下：西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物XQG-EA-7，其特征在于：是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。上述西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物XQG-EA-7具体制备方法是：步骤S1、西青果原料粉碎，料液比1:5，80％甲醇回流提取，滤液减压浓缩至无甲醇味，得西青果甲醇提取物；步骤S2、西青果甲醇提取物经石油醚萃取，分离，水相经乙酸乙酯萃取，分离，有机相浓缩得乙酸乙酯部分；步骤S3、乙酸乙酯部分经甲醇溶解，HPLC正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，分离所得组分中，抑制单胺氧化酶B活性最强的部分即为西青果提取物XQG-EA-7；所述二氯甲烷-丙酮-甲酸体系浓度为15:1:0.1～0:1:0.1。上述西青果提取物XQG-EA-7，是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经HPLC二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，所得分离组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。该西青果提取物XQG-EA-7经试验证明，能够抑制单胺氧化酶B活性。因而，本专利技术同时提供如下技术方案：西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物XQG-EA-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。本专利技术同时提供西青果提取物的5种单体化合物，其技术方案如下：西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7，其特征在于：是上述的西青果提取物XQG-EA-7经反相柱分离得到；所述分离体系是中压玻璃层析柱，以水-甲醇体系，水-甲醇＝3:1～0:1，梯度洗脱。上述单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7的获得，是：首先，制备西青果提取物XQG-EA-7；其次，将西青果提取物XQG-EA-7用尽量少的25％甲醇溶解，湿法上样，中压玻璃层析柱，柱温：室温，流速：2ml/min，压力：1.5MPa，以水-甲醇体系梯度洗脱，具体洗脱条件：水-甲醇＝2:1、3.3h，水-甲醇＝3:2、3.3h，水-甲醇＝1:1、3.3h，水-甲醇＝2:3、3.3h，水-甲醇＝3:7、3.3h，水-甲醇＝1:4、3.3h，水-甲醇＝1:9、3.3h，水-甲醇＝0:1、3.3h。上述5种西青果提取物的单体化合物经试验证明，能够抑制单胺氧化酶B活性。因而，本专利技术同时提供如下技术方案：西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物任一单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。本专利技术同时提供西青果提取物的单体化合物XQG-EA-7-6，该单体化合物经试验证明，能够抑制单胺氧化酶B活性。其具体技术方案是：西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物单体化合物XQG-EA-7-6，其特征在于：是白色粉末，溶于甲醇，是权利要求1或2或3所述的西青果提取物XQG-EA-7经反相柱分离得到；所述分离体系是中压玻璃层析柱，以水-甲醇体系，水-甲醇＝3:1～0:1，梯度洗脱。本专利技术同时提供西青果提取物单体化合物XQG-EA-7-6的HPLC鉴定方法，其技术方案如下：西青果提取物单体化合物XQG-EA-7-6的HPLC鉴定方法，其特征在于：样品处理：取西青果提取物XQG-EA-7-6溶解于50％甲醇中；HPLC检测体系：C18柱、柱温35℃、流速0.8mL/min、表1所示洗脱条件：表1HPLC洗脱条件时间/min流速/mL·min-1流动相A：0.1％磷酸/％流动相B：甲醇/％0.010.88515200.84555250.80100280.80100300.88515紫外检测波长254nm。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)提供了西青果提取物XQG-EA-7及其中的5种单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7。(2)提供了西青果提取物XQG-EA-7及其中的5种单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。(3)提供了一种单体化合物XQG-EA-7-6，该物质从西青果中提取分离得到，具有抑制单胺氧化酶B活性的功效。附图说明图1是西青果提取物XQG-EA-7硅胶薄层板点板分析结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.西青果(Terminalia chebula Retz.)提取物XQG‑EA‑7，其特征在于：是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷‑丙酮‑甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。

【技术特征摘要】
1.西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物XQG-EA-7，其特征在于：是西青果甲醇提取物依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，所得组分中抑制单胺氧化酶B活性最强的部分。2.根据权利要求1所述的西青果提取物XQG-EA-7，其特征在于：依如下方法制备：步骤S1、西青果原料粉碎，料液比1:5，80％甲醇回流提取，滤液减压浓缩至无甲醇味，得西青果甲醇提取物；步骤S2、西青果甲醇提取物经石油醚萃取，分离，水相经乙酸乙酯萃取，分离，有机相浓缩得乙酸乙酯部分；步骤S3、乙酸乙酯部分经甲醇溶解，正相柱流动相二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，分离所得组分中，抑制单胺氧化酶B活性最强的部分即为西青果提取物XQG-EA-7；所述二氯甲烷-丙酮-甲酸体系浓度为15:1:0.1～0:1:0.1。3.根据权利要求2所述的所述西青果提取物XQG-EA-7，其特征在于：所述步骤S3中，分离体系：常压玻璃层析柱：高75cm、内径8cm、外径8.7cm，柱温：室温，流速：15ml/min，压力：常压，梯度洗脱：二氯甲烷-丙酮-甲酸＝15:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝12:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝10:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝8:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝6:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝4:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝2:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝1:1:0.1、6.6h，二氯甲烷-丙酮-甲酸＝0:1:0.1、6.6h。4.权利要求1或2或3所述的西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物XQG-EA-7在抑制单胺氧化酶B活性中的应用。5.西青果(TerminaliachebulaRetz.)提取物单体化合物XQG-EA-7-2、XQG-EA-7-3、XQG-EA-7-5、XQG-EA-7-6、XQG-EA-7-7，其特征在于：是权利要求1或2或3所述的西青果提取物XQG-EA-7经反相柱分离得到；所述分离体系是中压玻璃层析柱，以流动相水-甲醇体系，水-甲醇＝3:1～0:1，梯度洗脱。6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖循，蒋晓兰，吴桂芳，袁韫聪，白小琳，
申请(专利权)人：中国科学院成都生物研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51