具有修饰的J-链的结合分子制造技术

本发明专利技术提供包含含有包括拮抗T‑细胞抑制性信号传导途径的结合部分的修饰的J链的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体的结合分子，及其用途。

Binding molecules with modified J- chains

The present invention provides a binding molecule comprising a modified J-chain IgM, IgA, IgG/IgM or IgG/IgA antibody comprising a binding portion that antagonizes the T_cell inhibitory signal transduction pathway, and its use.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有修饰的J-链的结合分子相关申请的交叉引用本申请要求2015年9月30日提交的美国临时专利申请系列号62/235,486的申请日优先权，其公开通过引用全文纳入本文。专利
本专利技术涉及包含含有经修饰以包括影响T-细胞信号传导途径的结合部分的J链的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体的结合分子，及其用途。
技术介绍
J链是酸性15-kDa多肽，其通过二硫键与五聚体IgM和二聚体IgA结合，所述二硫键涉及IgMμ或IgAα重链的C-末端处的18个氨基酸分泌尾部片段(tp)中的倒数第二半胱氨酸残基。三个二硫桥分别在Cys12和100，Cys71和91，以及Cys108和133之间形成。参见例如Frutiger等，1992，Biochemistry31，12643-12647。Sorensen等，2000，Int.Immunol.12(1)：19-27和Yoo等，1999，J.Biol.Chem.274(47)：33771-33777分别报道了将J链纳入人IgM和IgA以及聚合免疫球蛋白装配和与J链缔合的结构要求。Redwan等，2006，HumanAntibodies15：95-102报道了大肠杆菌中可溶性J链的重组生产。制备杂合IgA/IgG和IgM/IgG抗体的方法是本领域已知的。因此，Chintalacharuvu等，ClinImmunol101(1)：21-31中报道了重组产生杂合IgA2/IgG1抗体。据报道，在IgGγ重链末端添加αtp或μtp促进聚合并增强效应功能，如补体活化(Smith等，JImmunol1995，154：2226-2236)。IgA/IgG杂合抗体同时具有IgA和IgG的特性。用于重组生产IgM抗体的方法在本领域中也是已知的。例如，TchoudakovaA等，人PER.C6细胞中功能性人IgM的高水平表达(HighlevelexpressionoffunctionalhumanIgMsinhumanPER.C6cells).mAbs.2009；1(2)：163-171。尽管在设计抗体方面取得了进展，但仍需要具有改进的性质(例如改进的亲和性(affinity)，特异性和/或亲合力(avidity))以及与多个结合靶标结合的能力的修饰的抗体。随着该领域的进展，抗体功能已通过如下方式而被增加：例如，蛋白质工程改造的创新性手段，以提供更高的亲和力、更长的半衰期，和/或更好的组织分布，以及用于增加通过毒性净负荷递送(例如抗体-药物偶联物)的细胞破坏的集中性小分子和大分子技术的组合。另一种提高抗体功能的方法利用了允许一个IgG分子结合两个抗原的免疫球蛋白G(IgG)结构的二价结合。事实上，在某些应用中，通过同时结合两种不同的靶抗原，不对称抗体具有发挥有用功能的良好潜力。为了满足这种需求，已经生产了多种构建体以产生可以结合两种不同抗原的单个分子，从而实现了自然界以前从未出现的功能。这种双特异性方法的一个例子是结合分别在T细胞和B细胞上的CD3和CD19受体的“博纳吐单抗(blinatumomab)”(MT103或AMG103)。将细胞毒性T细胞系连于癌性B细胞允许有效治疗B细胞白血病。免疫检查点的阻断已经成为推进癌症治疗的一个有前途的领域。免疫检查点是指编码进入免疫系统的抑制性信号传导途径，其在维持自身耐受性以及调节免疫应答的持续时间和幅度方面发挥重要作用。参见例如，Pardoll，DrewM.″癌症免疫治疗中的免疫检查点的阻断(Theblockadeofimmunecheckpointsincancerimmunotherapy).″NatureReviewsCancer12.4(2012)：252-264；Postow，MichaelA.等，“癌症治疗中的免疫检查点阻断(ImmuneCheckDointBlockadeinCancerTherapy)，”JClinOncol.2015年6月10日；33(17)：1974-82.doi：10.1200/JCO.2014.59.4358。尽管临床前模型对概念结果有肯定的证据，但研究人员已报道针对T细胞抑制性信号传导途径成分(例如，均针对CTLA4的伊匹单抗(Bristol-MyersSquibb)和特姆单抗(MedImmune/AstraZenica))的单克隆IgG封闭抗体在临床上仅取得了很小的疗效结果。例如，Postow等，第1-2页。此外，涉及单克隆IgG抗体的治疗已导致免疫相关的不良事件，如皮肤病，胃肠道，肝脏，内分泌和其他炎症事件。例如，同上，第4页。因此，单克隆IgG抗体在免疫检查点阻断中的应用可能受到这些分子的治疗指数的限制，因为引发所需治疗效果所需的单克隆IgG抗体的剂量也会引起免疫相关的不良事件。因此，需要具有提高的亲合力的结合分子，其将提供增加的效力，从而可以使用较低的剂量水平，从而防止发生免疫相关的不良事件，同时仍然实现有效阻断T细胞抑制性信号传导途径。
技术实现思路
本专利技术至少部分基于如下认识：可以通过将一个或多个结合部分引入天然J链序列来修饰IgM或IgA抗体的J链，并且修饰的J链可被引入IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体中，而不影响修饰的J链与其靶标的结合或受者抗体的功能。这使得具有结合部分的修饰的J链与一组靶抗原相互作用，而IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体可与不同组靶抗原相互作用。本专利技术进一步基于这样的认识，即由于其多价性质，IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体可以提供抗体与靶抗原之间增加的亲和力，从而促进与低水平表达和/或低结合亲和性的抗原的结合。此外，所述结合分子的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA部分的任选多特异性允许特定数目和/或特定类型的结合靶标之间的结合，从而促进抗原靶标的特异性组合。所述结合分子的修饰的J链部分提供可靶标结合的额外机会，使得所述结合分子通过该分子的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA部分结合一个或多个靶标，同时通过J链上的结合部分结合一个或多个靶标。本专利技术的方面包括包含具有修饰的J链的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体或其抗原结合片段的结合分子，其中修饰的J链包含影响T-细胞信号传导途径的结合部分。在一些实施方式中，如权利要求1所述的结合分子，其中结合部分拮抗T-细胞抑制性信号传导途径。在一些实施方式中，修饰的J链上的结合部分结合选自下组的细胞表面蛋白：CTLA4、PD-1、TIM3、LAG3、BTLA、VISTA和TIGIT。在一些实施方式中，IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体拮抗T-细胞抑制性信号传导途径。在一些实施方式中，抗体结合选自下组的靶标：PD-1、PD-L1、TIM3和LAG3。在一些实施方式中，IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体激动T-细胞刺激性信号传导途径。在一些实施方式中，抗体结合选自下组的靶标：CD137、OX40、CD40、GITR、CD27和HVEM。在一些实施方式中，IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体结合低水平表达靶标。在一些实施方式中，低水平表达靶标选自下组：EGFR、HER2、HER3、EpCAM、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含具有修饰的J链的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体或其抗原结合片段的结合分子，其中修饰的J链包含影响T‑细胞信号传导途径的结合部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.30 US 62/235,4861.一种包含具有修饰的J链的IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体或其抗原结合片段的结合分子，其中修饰的J链包含影响T-细胞信号传导途径的结合部分。2.如权利要求1所述的结合分子，其中所述结合部分拮抗T-细胞抑制性信号传导途径。3.如权利要求2所述的结合分子，其中所述修饰的J链上的结合部分结合选自下组的细胞表面蛋白：CTLA4、PD-1、TIM3、LAG3、BTLA、VISTA和TIGIT。4.如权利要求2或3所述的结合分子，其中所述IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体拮抗T-细胞抑制性信号传导途径。5.如权利要求4所述的结合分子，其中所述抗体结合选自下组的靶标：PD-1、PD-L1、TIM3和LAG3。6.如权利要求2或3所述的结合分子，其中所述IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体激动T-细胞刺激性信号传导途径。7.如权利要求6所述的结合分子，其中所述抗体结合选自下组的靶标：CD137、OX40、CD40、GITR、CD27和HVEM。8.如权利要求2或3所述的结合分子，其中所述IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体结合低水平表达靶标。9.如权利要求8所述的结合分子，其中所述低水平表达靶标选自下组：EGFR、HER2、HER3、EpCAM、CEACAM、Gp100、MAGE1和PD-L1。10.如权利要求8所述的结合分子，其中所述低水平表达靶标是上皮癌细胞上的细胞表面蛋白。11.如权利要求2或3所述的结合分子，其中所述IgM，IgA，IgG/IgM或IgG/IgA抗体结合低亲和性靶标。12.如权利要求11所述的结合分子，其中所述低亲和性靶标选自下组：NY-ESO-1，唾液酸化LewisX抗原和Tn抗原。13.如权利要求11所述的结合分子，其中所述低亲和性靶标是上皮癌细胞上的细胞表面蛋白。14.如权利要求2或3所述的结合分子，其中所述抗体靶标是血液癌细胞上的细胞表面蛋白。15.如权利要求14所述的结合分子，其中所述抗体靶标选自下组：CD19、CD20、CD22、CD33、CD38、CD52和CD70。16.如前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述修饰的J链包括修饰的人J链序列，或其功能性片段。17.如权利要求16所述的结合分子，其中所述修饰的人J链序列包括SEQIDNO：1的天然人J链序列。18.如权利要求17所述的结合分子，其中将所述J链结合部分通过直接或间接融合被引入SEQIDNO：1的天然人J链序列。19.如权利要求18所述的结合分子，其中所述结合部分通过经肽接头的间接融合引入。20.如权利要求19所述的结合分子，其中所述间接融合是通过所述结合部分的C端和/或N端或其周围的肽接头。21.如权利要求20所述的结合分子，其中将所述结合部分在C端处或其附近引入SEQIDNO：1的天然人J链序列。22.如权利要求21所述的结合分子，其中将所述结合部分在距离C端约10个残基内引入SEQIDNO：1的天然人J链序列。23.如权利要求20所述的结合分子，其中将所述结合部分在N端处或其附近引入SEQIDNO：1的天然人J链序列。24.如权利要求23所述的结合分子，其中将所述结合部分在距离N端约10个氨基酸残基内引入SEQIDNO：1的天然人J链序列。25.如权利要求19所述的结合分子，其中将所述结合部分在SEQIDNO：1的半胱...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·基特，L·G·普雷斯塔，R·巴利加，
申请(专利权)人：IGM生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK