一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer、回收凝胶DNA的试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer、回收凝胶DNA的试剂盒及其使用方法。其由异硫氰酸胍和NaCl组成；优选的，由3‑3.2M异硫氰酸胍和1.5‑3M NaCl组成。还公开了与所述溶胶buffer配套使用的DNA特异性吸附材料的制备方法，及其用于回收凝胶DNA的试剂盒和试剂盒的使用方法。本发明专利技术用于凝胶DNA回收的溶胶buffer和配套使用的DNA特异性吸附材料的成本低，制备简单快速(2个小时左右)，使用简单、效果好，回收率高达50％以上，仅需要实验室常规的仪器、试剂，单次回收DNA的起始量可达到200μg以上，回收的DNA可用于后续的PCR、测序等。

【技术实现步骤摘要】
一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer、回收凝胶DNA的试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及DNA回收领域，尤其涉及一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer、回收凝胶DNA的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
在基因克隆实验操作过程中，纯化回收经琼脂糖电泳的DNA是最常见的实验环节。目前，对于经过琼脂糖电泳的DNA纯化回收常用方法包括：低熔点琼脂糖胶回收、试剂盒柱式回收和玻璃奶法。但是这些方法操作相对繁琐、耗时长且每次实验的成本较高。此外，对于玻璃奶回收DNA法，使用的溶胶buffer的主要成分为NaI，该物质易被空气中的氧氧化而析出变色，影响DNA回收。目前实验室最常用的凝胶DNA回收方法是试剂盒柱式回收法。如QiaquickGelExtractionKit(Qiagen)、UniversalDNAPurificationKit(天根)、EasyPureQuickGelExtractionKit(全式金)等，它们均采用特殊的缓冲液和离心吸附柱，可以从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段。尽管它们操作不是十分复杂，但成本相对较高，每次回收的最低成本6-20元，这对于大量回收DNA的实验室来说，耗费了很大的经济成本。此外，这类离心吸附柱的单个最高吸附能力为10ug左右，若大于10ug的量则需要使用多个吸附柱分开纯化，进而影响回收效率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种成本低，高效，稳定，制备方法简单的用于凝胶DNA回收的溶胶buffer—AGbuffer。本专利技术还提供了快速制备高效DNA特异性吸附材料—Glassmilk的方法，同时制备出与Glassmilk配套使用的效果更佳更稳定的溶胶buffer—AGbuffer。同时，提供采用Glassmilk快速、高效回收凝胶DNA产物的实验方案。本专利技术主要解决凝胶DNA回收时间长、经济成本高、DNA回收能力有限、与Glassmilk配套溶胶buffer不稳定等问题。本专利技术的Glassmilk制备方法简单、高效，并且成本低，使得凝胶DNA回收成本相对于试剂盒柱式回收法，降低了95％左右，并且使得DNA的回收能力到达200μg，甚至更大。为实现上述目的，本专利技术提供一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer，其特征在于，由异硫氰酸胍和NaCl组成；优选的，由3-3.2M异硫氰酸胍和1.5-3MNaCl组成。进一步，由3.2M异硫氰酸胍和3MNaCl组成。本专利技术还提供一种与所述用于凝胶DNA回收的溶胶buffer配套使用的DNA特异性吸附材料，其特征在于，制备方法为，称取Silica，加入超纯水A搅拌至混匀，离心，用超纯水重悬沉淀，再依次加入超纯水B和浓硝酸后混匀，加热至接近沸腾后冷却至室温，离心弃上清，再用超纯水C重悬，离心弃上清；再重复重悬，离心弃上清步骤1-4次；最后加入超纯水重悬沉淀即可；优选的，按照超纯水和沉淀1：1的体积比加入超纯水重悬沉淀即可。进一步，所述Silica：超纯水A：超纯水B：浓硝酸的用量比例为10g：(50-70)ml：(3-5)ml：(5-15)ml；优选的，用量比例为10g：60ml：4ml：10ml。进一步，所述离心为8000g离心10min；所述加超纯水B和浓硝酸后混匀，加热至接近沸腾后冷却至室温步骤是在通风橱中进行的。本专利技术还提供一种用于回收凝胶DNA的试剂盒，其特征在于，含有权利要求所述的用于DNA回收的溶胶buffer。进一步，还含有所述的DNA特异性吸附材料。本专利技术还提供一种所述用于回收凝胶DNA的试剂盒的使用方法，其特征在于，根据切取的DNA凝胶重量，加入所述溶胶buffer，55-68℃下融化凝胶，优选65℃下融化凝胶；再将融化的凝胶恢复至室温；加入充分混匀的所述DNA特异性吸附材料进行混匀，第一次室温放置后第一次离心弃上清，沉淀加入洗液buffer，第二次离心弃上清；加入洗液buffer，第三次离心弃上清；开盖第二次室温放置，加入无菌水混匀，第三次放置；第四次离心后将上清转移至新管内，-20℃或-80℃保存即可。进一步，所述洗液buffer为11.7g/LNaCl，0.74g/LEDTA,2.42g/LTris-HCl，pH7.5；使用前加入2倍体积的无水乙醇。进一步，所述切取的DNA凝胶重量：溶胶buffer：DNA特异性吸附材料：洗液buffer的用量比例为100mg：(250-350)μl：(3-8)μL：(400-1000)μL；优选的，比例为100mg：300μl：5μL；所述第一次离心为13000rpm离心30s；第二次离心为13000rpm离心10s，第三次离心为13000rpm离心30s，第四次离心为13000rpm离心1min；所述第一次室温放置为室温下放置5min；第二次室温放置为室温下放置5-10min；第三次放置为放置3min。本专利技术的有益效果：1、本专利技术的Glassmilk制备方法简单、快速，仅需要实验室常规的仪器、试剂，2个小时左右就能够完成Glassmilk的制备；2、采用本专利技术制备的Glassmilk对经琼脂糖电泳的DNA的回收效率高，可达到50％以上；3、本专利技术的溶胶buffer(命名为AGbuffer)与Qiagen试剂盒中的溶胶buffer有相当的效果且成本更低；4、本专利技术的溶胶buffer与6MNaI效果相同，但比6MNaI稳定且不会出现被氧化问题；5、试剂盒柱式回收法采用的离心柱体积均为750μl，若溶胶后体积大约750μl，则需要多次加入处理，多次离心。本专利技术的凝胶DNA回收方案，可根据实际情况，自行选用不同规格的离心管，避免了溶胶后反复过柱操作；6、本专利技术的凝胶DNA回收方案可根据DNA的量，自行调节Glassmilk的使用量，单次回收DNA的起始量不再仅限于10μg，可达到200μg,甚至更大。7、采用本专利技术的凝胶DNA回收方案，DNA的回收率，可达到与QiaquickGelExtractionKit(Qiagen)相媲美，但成本仅仅是其1/40。8、采用本专利技术的凝胶DNA回收方案成本是UniversalDNAPurificationKit(天根)、EasyPureQuickGelExtractionKit(全式金)的1/20左右；9、该方案回收的DNA可用于后续的PCR、测序等等。附图说明图1是不同溶胶buffer配合Glassmilk回收凝胶DNA比较结果图。图2是不同浓度GuSCN和NaCl组合配合Glassmilk回收凝胶DNA比较结果图。图3是常用的溶胶buffer配合Glassmilk回收凝胶DNA比较结果图。图4是常用的溶胶buffer配合Glassmilk回收凝胶DNA效率统计结果图。图5是Glassmilk配合溶胶AGbuffer使用与国产商品化的凝胶回收试剂盒比较结果图。图6是Glassmilk配合溶胶AGbuffer使用与国产商品化的凝胶回收试剂盒回收DNA效率比较结果图。图7是Glassmilk配合溶胶AGbuffer使用与进口商品化的凝胶回收试剂盒比较结果图。图8是Glassmilk配合溶胶AGbuffer使用与商品化的凝胶回收试剂盒回收DNA效率比较结果图。图9是采用本方案回收纯化DNA后的测序结果图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer，其特征在于，由异硫氰酸胍和NaCl组成；优选的，由3‑3.2M异硫氰酸胍和1.5‑3M NaCl组成。

【技术特征摘要】
1.一种用于凝胶DNA回收的溶胶buffer，其特征在于，由异硫氰酸胍和NaCl组成；优选的，由3-3.2M异硫氰酸胍和1.5-3MNaCl组成。2.权利要求1所述用于凝胶DNA回收的溶胶buffer，其特征在于，由3.2M异硫氰酸胍和3MNaCl组成。3.一种与权利要求1配套使用的DNA特异性吸附材料，其特征在于，制备方法为，称取Silica，加入超纯水A搅拌至混匀，离心，用纯水重悬沉淀，再依次加入超纯水B和浓硝酸后混匀，加热至接近沸腾后冷却至室温，离心弃上清，再用超纯水C重悬，离心弃上清；再重复重悬，离心弃上清步骤1-4次；最后加入超纯水重悬沉淀即可；优选的，按照超纯水和沉淀1：1的体积比加入超纯水重悬沉淀即可。4.权利要求3所述DNA特异性吸附材料，其特征在于，所述Silica：超纯水A：超纯水B：浓硝酸的用量比例为10g：(50-70)ml：(3-5)ml：(5-15)ml；优选的，用量比例为10g：60ml：4ml：10ml。5.权利要求3所述DNA特异性吸附材料，其特征在于，所述离心为8000g离心10min；所述加超纯水B和浓硝酸后混匀，加热至接近沸腾后冷却至室温步骤是在通风橱中进行的。6.一种用于回收凝胶DNA的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1-2任一项所述的用于凝胶DNA回收的溶胶buffer。7.权利要求6所述用于回收凝胶DNA的试剂盒，其特征在于，还含有权利要求3-5任一项所述的DNA特异性吸附材料。8.一种权利要求6-7任...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁耀极，刘天星，陈莹，庄明火，徐国标，赵燕燕，潘旭，鲁靖，
申请(专利权)人：爱默基因厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35