一种染色体滴片制作方法技术

本发明专利技术属于细胞遗传物质染色设备技术领域，公开了一种染色体滴片的制作方法，染色体滴片制作方法包括：滴片前将滴片室的温度控制在25℃‑27℃，湿度控制在40％‑60％；滴片前三个小时内将滴片室的空调和加湿器打开，控制滴片室的温度和湿度；在滴片完成前不在打开滴片室门窗，让室内温湿度保持恒定；滴好的片放在铁板上分散，待片干透再收好放入烤箱。本发明专利技术固定了滴片的温湿度后制出的片细胞比较胀大，染色体分散均匀且不粘连，几乎没有染色体在包浆内，且消化染色体时间比较固定，染色体制片质量有很大的提高。

【技术实现步骤摘要】
一种染色体滴片制作方法
本专利技术属于细胞遗传物质染色设备
，尤其涉及一种染色体滴片制作方法。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：由于染色体滴片制作是纯手工操作，影响制片质量的因素很多，滴片制作环节对染色体分散效果影响较大，滴片时染色体分散程度和冰乙酸挥发带走水份有很大关系。染色体是基因的载体，具有储存和传递遗传信息的作用，人类细胞遗传学研究的主要对象是染色体，生物体细胞染色体数目和结构是重要的遗传标志之一。因此，在染色体的分析研究中，制备染色体标本无疑是细胞遗传学最基本而重要的技术。优良的染色体制片方法，良好的染色体扩散是基础细胞遗传学研究的根本。染色体制片是染色体核型分析过程中的一个重要环节，理想的核型中染色体应分散均匀，无互相交叠才便于核型分析。滴片时的温度和湿度是染色体分散良好的关键条件。细胞遗传学家普遍认为，滴片环境的温度和湿度是影响中期染色体分散质量的重要因素。德国friedrichschiller大学GrummtUW说，有经验的细胞遗传学家都非常清楚的认识到中期染色体的分散质量主要决定于载玻片上固定液(甲醇-冰醋酸)的挥发过程，而这一过程主要受环境的温度和相对湿度的影响。无独有偶，中国香港大学的WenDeng也认为载玻片表面的湿度是影响染色体分散质量的最重要因素。美国的JackL.Spurbeck则认为，通过不同温度和相对湿度的协同作用，可以保证最佳中期染色体分散面积。意大利学者Terzoli.G认为中期染色体有时不完整，染色体丢失；有时受细胞质干扰严重，显带质量差。这是因为，在天气变化的过程中，没有适当的环境调控措施。此类变化将是实验中的常见问题。为了探究环境温度和相对湿度对中期染色体分散质量的影响，遗传学家利用相差显微镜观察了滴片后固定液干燥的全过程。在相差显微镜下观察滴片时载玻片干燥的过程，可以描述为五个步骤：(1)细胞悬液在载玻片上扩散时，细胞向各个方向随机飘动，但当细胞最终接触到玻璃表面时，细胞迅速固定到玻片表面。此时染色体不扩散，细胞看起来像小灰球。(2)固定液开始挥发，当固定液的表面接触到细胞表面时，细胞反光，周围有明亮的光圈。染色体完全不分散。宏观上看，载玻片表面变为粒状。(3)因为染色体的扩散，有丝分裂期的细胞比非有丝分裂期的细胞更快的失去光圈和展平。染色体在这一时期变得暗而可见，染色体扩散的大部分是在这一步完成的。非有丝分裂期的细胞仍有光圈，说明核膜及其内容物对挥发的固定液的展平效用有更强的耐受性。(4)随着固定液的挥发，非有丝分裂期细胞继续展平，同时染色体也有小幅度的扩散(不超过中期分裂相扩散直径的7％)。(5)微量的固定液围绕着各个细胞，但是迅速挥发。可见的染色体扩散停止，但是不排除继续进行细小的改变。由上可知，中期染色体的扩散主要是在固定液干燥的过程中完成的。因此，若想提高染色体的分散度，从理论上来讲，我们可以通过减慢固定液的挥发速度，延长固定液挥发的时间，得到分散良好的中期分裂相。固定液挥发过快时，染色体分散不开，交叠在一起，对核型分析不利。固定液挥发速度合适时，能够得到分散良好的中期染色体，染色体重叠数少，断裂数少，缺失数少。固定液挥发过慢时，染色体容易断裂，卷曲，缺失，虽然分散面积较大，但是同样不利于染色体核型分析。环境中的相对湿度，影响着固定液的挥发速度。当温度不变时，相对湿度越高，固定液挥发越慢，理论上染色体的分散度就越大；相对湿度越低，固定液挥发越快，染色体的分散度就越小。JackL.Spurbeck等为探讨环境相对湿度和温度对染色体分散的影响，以2250例羊水细胞和1650例淋巴细胞为材料，通过实验设计控制环境的相对湿度和温度，分析数据后得出：无论是原位还是非原位培养体系，干燥后的中期染色体的分散面积是相对湿度和温度的相互作用的结果。当相对湿度和温度升高时，在到达一个阈值之前，中期分裂相的面积也随之增大。通过不同的温度和相对湿度的组合，可以得到完美的中期分裂相。在他们看来，采用环境控制系统来控制相对湿度和温度是获得最佳染色体分裂相的实用和稳定的手段。由此可见，相对湿度和温度的升高可以增加染色体的分散程度，其中相对湿度是染色体分散程度的主要影响因素，但随着相对湿度和温度的升高，染色体断裂的比率增加，染色体的质量降低。因此适当的相对湿度和温度对于高质量的染色体制备非常重要。综上所述，现有技术存在的问题是：(1)现有技术，没有固定滴片的温湿度，制出的片细胞胀大效果差，染色体分散均匀差且易粘连，染色体在包浆内的个数多，且消化染色体时间不固定。(2)现有技术没有针对天气变化，找到适当的环境调控措施。(3)传统的染色体制备方法未能考虑到温度和湿度对染色体分散程度的影响，因此造成不同批次实验所处的环境因素不相同，导致最终制备的染色体扩散效果不理想，且重复性差。解决上述技术问题的难度和意义：本专利技术经过长期验证发现染色体分散在一定的温湿度范围内的分散效果比其他条件下好，为了提高染色体滴片质量本专利技术摸索出一个适合染色体分散的环境。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种染色体滴片的制作方法。本专利技术是这样实现的，一种染色体滴片制作方法，所述染色体滴片制作方法包括：滴片前将滴片室的温度控制在25℃-27℃，湿度控制在40％-60％。进一步，滴片前三个小时内将滴片室的空调和加湿器打开，滴片室的温度为25℃，湿度为50％。进一步，在滴片完成前不在打开滴片室门窗，让室内温湿度保持恒定；滴好的片放在铁板上分散，待片干透再收好放入烤箱。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：本专利技术固定了滴片的温湿度后制出的片细胞比较胀大，染色体分散均匀且不粘连，几乎没有染色体在包浆内，且消化染色体时间比较固定，染色体制片质量有很大的提高。本专利技术通过长期的实践和总结，找到了适合的温度、湿度控制条件，即在染色体滴片前3小时控制实验室温度在25℃，湿度在50％，从而达到控制载玻片表面固定液的挥发速度，使不同批次实验置于相同环境条件下进行，使滴片质量重复性好，制备出高质量的、分散程度最佳的染色体，便于染色体分析，减少误判。附图说明图1是本专利技术实施例提供的染色体滴片制作方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。现有技术，没有固定滴片的温湿度，制出的片细胞胀大效果差，染色体分散均匀差且易粘连，染色体在包浆内的个数多，且消化染色体时间不固定。如图1所示，本专利技术实施例提供的染色体滴片制作方法，包括：S101：在一个空间相对大的房间滴片，滴片前三个小时内将滴片室的空调和加湿器打开，如果遇到连续下雨或者连续低温天气就将暖风机和空调、加湿器一起打开，使温度控制在25℃-27℃之间，湿度控制在40％-60％之间；S102：在滴片完成前不在打开滴片室门窗，让室内温湿度尽量保持恒定。滴好的片放在铁板上分散，待片干透再收好放入烤箱。步骤S101中，滴片前三个小时内将滴片室的空调和加湿器打开，滴片室的温度为25℃，湿度为50％。本专利技术固定了滴片的温湿度后制出的片细胞比较胀大，染色体分散均匀且不粘连，几乎没有染色体在包浆内，且消化染色体时间比较固定，染色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种染色体滴片制作方法，其特征在于，所述染色体滴片制作方法包括：滴片前将滴片室的温度控制在25℃‑27℃，湿度控制在40％‑60％。

【技术特征摘要】
1.一种染色体滴片制作方法，其特征在于，所述染色体滴片制作方法包括：滴片前将滴片室的温度控制在25℃-27℃，湿度控制在40％-60％。2.如权利要求1所述的染色体滴片制作方法，其特征在于，滴片前三个小时内将滴片...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蕊，魏彩霞，段金微，武艳琼，
申请(专利权)人：昆明金域医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53