一种菌根合成培养方法技术

本发明专利技术公开了一种菌根合成培养方法，在隔离空间内将消毒后的种子或组培苗在无菌营养液中培养，待种苗长出侧根后将营养液置换成含有菌根菌的目的菌菌液，促使根系和目的菌建立共生关系形成菌根，本发明专利技术通过前期无菌营养液栽培和后期置换成目的菌菌液的方式实现菌根的合成，确保菌根合成感染率在95%以上，实现了菌根苗的规模化生产；本发明专利技术的操作方法简便，成本低，适用于大规模生产和应用。本发明专利技术适用于菌根合成。

Mycorrhizal synthesis and culture method

The invention discloses a mycorrhizal synthetic culture method, in which disinfected seeds or tissue cultured seedlings are cultured in aseptic nutrient solution in an isolation space, and the nutrient solution is replaced by the target mycorrhizal solution containing mycorrhizal fungi after the lateral roots of the seedlings are grown, so as to promote the symbiosis relationship between the root system and the target bacteria to form mycorrhizal roots. The mycorrhizal synthesis is realized by cultivating nutrient solution and replacing the target mycorrhizal solution at the later stage, which ensures that the mycorrhizal synthetic infection rate is above 95%, and realizes the large-scale production of mycorrhizal seedlings; the operation method of the invention is simple, the cost is low, and the invention is suitable for large-scale production and application. The invention is suitable for mycorrhizal synthesis.

【技术实现步骤摘要】
一种菌根合成培养方法
本专利技术属于农业领域，涉及一种菌根合成培养方法。
技术介绍
菌根共生即菌根土壤中某些真菌与植物根形成的共生体，分布广泛，超过80%的陆生植物都能够与菌根真菌形成共生体。真菌一方面从植物吸收碳源等有机物作为自己的营养，另一方面是扩大根系吸收面，从土壤中吸收养分（土壤中的磷、氮等营养元素）、水分供给植物，显著促进植物的生长。和植物根系共生的真菌称为菌根菌，菌根菌扩大了植物根系的营养吸收面，“菌丝桥”使林地里的林木成为所需水分及营养物质的吸收、传导与运输命运共同体。菌根不仅可以促进植物对磷、锌、铜、钙、镁、铁、锰、硼等微量元素的吸收，还会产生生长素促进植物生长，增强植物的抗病性，改善植物的根际环境，还可改善土壤结构，对植物的生长具有促进作用。近年来的研究中有一些关于菌根合成的方法，均存在一定的缺陷：如操作繁琐、无法大规模生产；或无法有效保证菌根合成率，而且在实施过程中也无法有效控制污染。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，是旨在提供一种菌根合成培养方法，方法简便、过程易于控制，生产成本低，菌根合成率高。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是：一种菌根合成培养方法，它按照如下的步骤顺序依次进行：（1）配置目的植物生长营养液并灭菌处理，记为A，对隔离空间内的育苗容器进行消毒灭菌处理，记为B；目的植物生长营养液由溶于水的肥料组成，主要成分包括氮、磷、钾、钙、镁、硫及植物生长所必需的多种微量元素，它根据不同的植物所需的营养进行配置；（2）将消毒后的种子或组培苗栽培在盛有A的B中；（3）保持A循环流动，对流出B的A进行灭菌后再注入B中；（4）制作目的菌菌液，记为C；（5）逐步调整A的pH值与C适宜生长的pH值一致；（6）在种苗长出侧根后，用C置换A，在光照条件下培养15天至3个月，即可获得目的菌菌根。作为本专利技术的限定：步骤（1）中，所述隔离空间内的温度为8～28℃，隔离空间保持通风透光，隔离空间的空气经空气过滤器过滤，阻隔杂菌污染；步骤（2）中，所述消毒后的种子淹没于A中；步骤（2）中，所述组培苗是用组织培养法在生根培养结束后炼苗之前，用无菌水彻底清洗根部，组培苗的根系淹没于A中。本专利技术还有一种限定，步骤（6）中，所述光照条件下培养，定期调整液位的高低，让部分根系裸露在空气中，以利于根部呼吸，避免根部缺氧。由于采用了上述的技术方案，本专利技术与现有技术相比，所取得的技术进步在于：本专利技术在生产过程中有效控制宿主植物在发芽、生长过程中有可能（如生产过程中浇水、控温等行为）造成的污染，通过液体培养节约了生产成本，降低了生产环节的冗长繁琐，且充分考虑到了宿主植物及目的菌菌丝自身的生长周期及生物活性：在植物长出侧根后再与目的菌合成菌根，并通过调整pH值及定期置换菌液确保目的菌的菌根合成率达到95%以上；本专利技术的制备方法简单、实用、高效，生产成本低，并且不受季节的影响，经济效益显著。本专利技术适用于菌根合成。本专利技术下面将结合具体实施例作进一步详细说明。具体实施方式下述实施例中所述的方法，如无特殊说明，均采用现有的方法，所用的试剂如无特殊说明均为现有的试剂。实施例1一种美味牛肝菌与云南松的菌根合成培养方法本实施例为一种美味牛肝菌与云南松的菌根合成培养方法，按照如下的步骤顺序进行：1）将美味牛肝菌子实体采用组织分离法分离菌肉，接种在PDA平板培养基上，置于培养箱中于22℃～24℃下培养萌发出菌丝，将菌丝再次转接至新的PDA平板培养基进行纯化培养，获得纯菌丝；2）菌丝长满培养皿后，挑取菌丝在改良MMN液体培养基上，置于摇床内进行液体发酵培养一个月；3）对大棚进行改造，增加空气过滤系统，保持通风透光，空气中无杂菌污染，大棚内温度控制在8～28℃；4）配置云南松液体营养液并进行灭菌处理，每100L水中含尿素51g、磷酸二氢钾31g、硫酸钙10g、硫酸镁5g、硫酸锌0.01g、硫酸铁0.03g、硫酸铜0.01g、硫酸锰0.03g、硼酸粉0.02g；5）对云南松种子用稀释后的高锰酸钾溶液进行表面灭菌消毒；6）对大棚内的设施及设备用臭氧进行灭菌后，将步骤5）进消毒后的种子置于育苗器里，注入配置好的云南松液体营养液，液体以淹没种子为宜；7）保持育苗器内的营养液循环流动，同时用紫外线过流式灭菌系统对流出育苗器的营养液进行灭菌，灭菌后的营养液再注入育苗器；在培养期间，每天控制液位的高低，确保新萌发的云南松根系每天能接触到空气；8）使用pH测定仪测定营养液的pH值，用稀释后的盐酸或氢氧化钠调整pH至6.0；9）待云南松长出3个侧根后关闭过流式灭菌系统，将云南松液体营养液置换成稀释800倍的牛肝菌菌液；在注入牛肝菌菌液培养期间，每天控制液位的高低，确保新萌发的云南松根系每天能接触到空气；每天早晨或晚上打开遮阳网，确保充足的阳光；10）光照条件下培养2个月后，获得美味牛肝菌菌根。本实施例的菌根合成率达到98%，制备方法简单、实用、高效，生产成本低，并且不受季节的影响，经济效益显著。实施例2一种干巴菌与滇油杉的菌根合成培养方法本实施例为一种干巴菌与滇油杉的菌根合成培养方法，按照如下的步骤顺序进行：1）将干巴菌子实体采用孢子分离法分离孢子接种在PDA平板培养基上，置于培养箱中于22℃～24℃下培养萌发出菌丝，将菌丝再次转接至新的PDA平板培养基进行纯化培养，获得纯菌丝；2）菌丝长满培养皿后，挑取菌丝在MMN液体培养基上，置于摇床内进行液体发酵培养一个月；3）对玻璃温室进行改造，增加能隔离细菌的新风系统，保持通风透光，空气中无杂菌污染，玻璃温室内温度控制在8～28℃；4）配置滇油杉液体营养液并进行灭菌处理，每100L水中含硝酸钠11g、过磷酸钙71g、硫酸铵25g、硫酸钾35g、硫酸镁42g、硫酸亚铁2.4g、硼酸粉0.35g、硫酸锰0.25g及0.2g微量元素；5）对滇油杉种子用75%酒精进行表面灭菌消毒；6）对玻璃温室内的地面，采用铺设石灰和地布的方式阻隔真菌的繁衍，对设施及设备用75%酒精进行喷雾灭菌后，将步骤5）经消毒的种子置于玻璃容器里，注入滇油杉液体营养液，液体以淹没种子为宜；7）保持玻璃容器内滇油杉液体营养液的循环流动，用过滤法对流出容器的营养液进行过滤灭菌，灭菌后的营养液再注入玻璃容器；在培养期间，控制营养液液位的高低，确保新萌发的滇油杉根系每天能接触到空气；8）使用pH测定仪测定营养液的pH值，用稀释后的盐酸或氢氧化钠调整pH至6.0；9）待滇油杉长出2个侧根后关闭过滤灭菌系统，将营养液置换成稀释成1000倍的干巴菌菌液；在置换为干巴菌菌液后，控制液位的高低，确保新萌发的滇油杉根系每天能接触到空气；每天早晨或晚上打开遮阳网，确保充足的阳光；10）培养2个月后，获得滇油杉干巴菌菌根。本实施例的菌根合成率达到97%，制备方法简单、实用、高效，生产成本低，并且不受季节的影响，经济效益显著。实施例3一种美味牛肝菌与板栗的菌根合成培养方法本实施例为一种美味牛肝菌与板栗的菌根合成培养方法，按照如下的步骤顺序进行：1）将美味牛肝菌子实体采用组织分离法分离菌肉，接种在PDA平板培养基上，置于培养箱中于22℃～24℃下培养萌发出菌丝，将菌丝再次转接至新的PDA平板培养基进行纯化培养，获得纯菌丝；2）菌丝长满培养皿后，挑取菌丝在改良本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种菌根合成培养方法，其特征在于，它按照如下的步骤顺序依次进行：（1）配置目的植物生长营养液并灭菌处理，记为A，对隔离空间内的育苗容器进行消毒灭菌处理，记为B；（2）将消毒后的种子或组培苗栽培在盛有A的B中；（3）保持A循环流动，对流出B的A进行灭菌后再注入B中；（4）制作目的菌菌液，记为C；（5）逐步调整A的pH值与C适宜生长的pH值一致；（6）在种苗长出侧根后，用C置换A，在光照条件下培养15天至3个月，即可获得目的菌菌根。

【技术特征摘要】
1.一种菌根合成培养方法，其特征在于，它按照如下的步骤顺序依次进行：（1）配置目的植物生长营养液并灭菌处理，记为A，对隔离空间内的育苗容器进行消毒灭菌处理，记为B；（2）将消毒后的种子或组培苗栽培在盛有A的B中；（3）保持A循环流动，对流出B的A进行灭菌后再注入B中；（4）制作目的菌菌液，记为C；（5）逐步调整A的pH值与C适宜生长的pH值一致；（6）在种苗长出侧根后，用C置换A，在光照条件下培养15天至3个月，即可获得目的菌菌根。2.根据权利要求1所述的一种菌根合成培养方法，其特征在于：步骤（1）中...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄泽远，庄翔麟，辛培尧，王齐，张平安，陈杨，
申请(专利权)人：云南上智科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53