【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】冻干粪便微生物群样品的方法本专利技术涉及冻干粪便微生物群样品的方法。本专利技术还涉及所获得的冻干物在粪便微生物群移植中的用途,优选地为了治疗肠道生态失调,尤其是艰难梭菌(Clostridiumdifficile)感染。人肠道微生物群是存在于人胃肠系统(胃、肠和结肠)中的微生物(细菌、酵母和真菌)的全体。目前,微生物多样性据估计为大约103个构成了成年个体的占优势的肠道微生物群的细菌物种,其中具有1014个细菌的丰度,其代表了在每个个体中200,000至800,000个基因的占优势的细菌宏基因组(metagenome),即为人基因组的基因数目的10至50倍。肠道(在子宫中是无菌的)从生命的头几天起发生菌落移生,直至向独特的个体微生物群演变。每个人拥有就物种而言相对接近的细菌,但其微生物群的确切组成(物种、比例)在很大程度上(超过2/3的物种)是宿主所特异的。因此,人肠道微生物群是一个非常多样化的、复杂的且特异于每个个体的生态系统。对于个体的健康来说,必要的是维持稳定的微生物群,其同时能够在变化后回到其初始状态和对于侵袭具有抗性。维持微生物群的大的多样性有助于其稳定性。 ...
【技术保护点】
1.制备来自供者受试者的粪便微生物群冻干物的方法,其包括下列步骤:A)将来自供者受试者的粪便微生物群样品与选自多元醇、二至五糖、麦芽糖糊精和其混合物的稀释剂相混合,和B)将在A)中获得的混合物在低于‑50℃,优选地‑70℃至‑100℃的温度下进行冷冻,然后将其冻干。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.18 FR 15627501.制备来自供者受试者的粪便微生物群冻干物的方法,其包括下列步骤:A)将来自供者受试者的粪便微生物群样品与选自多元醇、二至五糖、麦芽糖糊精和其混合物的稀释剂相混合,和B)将在A)中获得的混合物在低于-50℃,优选地-70℃至-100℃的温度下进行冷冻,然后将其冻干。2.根据权利要求1的制备冻干物的方法,其特征在于,所述稀释剂为盐水水溶液,其包含:(i)至少一种选自多元醇、二至五糖或其混合物的冷冻保护剂,和(ii)麦芽糖糊精。3.根据权利要求1或2的制备冻干物的方法,其特征在于,所述稀释剂为盐水水溶液,其至少包含半乳糖-乳糖或海藻糖作为冷冻保护剂。4.根据权利要求1至3之一的制备冻干物的方法,其特征在于,所述稀释剂为盐水水溶液,其至少包含麦芽糖糊精混合物,优选地以相对于该溶液的总体积而言4至20%的量。5.根据权利要求1至4之一的制备冻干物的方法,其特征在于,在所述盐水水溶液中冷冻保护剂的总量为相对于该溶液的总体积而言3至30重量%,优选地相对于该溶液的总体积而言4至20重量%。6.根据权利要求1至5之一的方法,其特征在于,步骤A)包括下列步骤:A1)任选地,制备通过冷冻-解冻而形成的碘克沙醇或5-(N-2,3-二羟基丙基乙酰氨基)-2,4,6-三碘-N,N'-双(2,3-二羟基丙基)间苯二甲酰胺的连续梯度,A2)在厌氧生活条件下,将至少一种来自供者受试者的粪便微生物群样品与任选地包含碘克沙醇或5-(N-2,3-二羟基丙基乙酰氨基)-2,4,6-三碘-N,N'-双(2,3-二羟基丙基)间苯二甲酰胺的盐水缓冲液相混合,A3)任选地,将在A2)中获得的混合物放置于在A1)中获得的梯度之下,A4)将在A2)或A3)中获得的混合物进行在厌氧生活条件下以低的加速度的顺次离心,或者进行超离心,A5)在厌氧生活条件下回收在步骤A4)结束时形成的细菌环或上清液,A6)将在A5)中回收的细菌环或上清液与稀释剂相混合。7.根据权利要求1至6之一的方法,其特征在于,所述方法包括在厌氧生活条件下的下列步骤作为步骤A6):a)将在A5)中获得的并重新悬浮在盐水缓冲液中的细菌环或在A5)中获得的上清液在20至30℃的温度下以3000至4000xg的加速度离心5至15分钟的时间,b)回收在步骤a)结束时获得的粒状沉淀,并将其重新悬浮在盐水缓冲液中,然后在20至30℃的温度下以200至500xg的加速度离心5至15分钟的时间,c)回收在步骤b)结束时获得的上清液,并将其重新悬浮在盐水缓冲液中,然后在20至30℃的温度下以3000至4000xg的加速度离心5至15分钟的时间,d)回收在步骤c)结束时获得的粒状沉淀,和e)将在d)中回收的粒状沉淀与稀释剂相混合。8.根据权利要求1至7之一的方法,其特征在于,步骤B)的冻干在下列条件下进行:B1)将在A)中获得的混合物在低于-50℃,优选地-70℃至-100℃的温度下进行冷冻,B2)在大气压下,将在B1)中获得的经冷冻的混合物加载到预冷却至在-50℃和-30℃之间的温度的冷冻干燥器中,然后B3)至少一个使在B2)中加载的混合物进行首次干燥的步骤,其包括降低压力直至...
【专利技术属性】
技术研发人员:H·阿法加得,C·史怀特纳,C·朱斯特,J·多尔,A·沙普龙,F·方瑟卡,O·戴维,
申请(专利权)人:玛阿特制药公司,国家农艺研究院,
类型:发明
国别省市:法国,FR
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