一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体及方法技术

本发明专利技术公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体及方法。本发明专利技术提供的载体包括含有牛KDM4E基因的体外转录模板载体。载体经体外转录反应可获得大量牛KDM4E基因的mRNA，再将其注入到成功融合并激活的牛体细胞克隆胚胎中，使胚胎过量表达牛KDM4E蛋白。本发明专利技术可以有效减弱体细胞克隆胚胎在合子激活时期的组蛋白H3K9me3和H3K9me2表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可用以高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。

A carrier and method for modifying bovine cloning efficiency based on histone methylation level

The invention discloses a carrier and a method for improving the cloning efficiency of cattle by modifying histone methylation level. The carrier provided in this invention includes an in vitro transcription template carrier containing bovine KDM4E gene. A large amount of bovine KDM4E gene mRNA was obtained by in vitro transcription reaction, and then injected into bovine somatic cell cloned embryos successfully fused and activated to overexpress bovine KDM4E protein. The invention can effectively weaken the epigenetic modification level of histone H3K9me3 and H3K9me2 during the period of molecule activation of somatic cloned embryos, thereby significantly improving the development rate and quality of bovine somatic cloned blastocysts at the later stage, and can be used to efficiently produce bovine somatic cloned embryos in vitro. The birth rate of the cloned bovine after embryo transfer is also significantly improved. High.

【技术实现步骤摘要】
一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体及方法
本专利技术属于动物体细胞克隆
，涉及一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体及方法。
技术介绍
体细胞克隆是一项具有巨大研究和商用价值的技术，可应用到治疗性克隆、疾病模型、人类器官移植、动物转基因研究、濒临灭绝动物品种保护，优良家畜品种扩增等方面。但至今体细胞克隆效率仍然不高，显著制约着此技术的广泛应用。目前认为，克隆效率低下的主要原因是供体体细胞核未被受体卵胞质完全的重编程，即重编程失败或不完全。此重编程过程中没有涉及基因序列的变化，主要是表观遗传修饰的变化，这些表观遗传修饰主要包括组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和DNA甲基化三方面。尽管组蛋白甲基化等表观遗传修饰在动物胚胎发育中广泛存在，但是，目前尚未有研究从克隆胚胎和受精胚胎之间表观遗传修饰差异的角度，揭示表观遗传修饰与内源蛋白表达水平的关系，导致对于如何提高动物胚胎体外发育效率，仍缺乏明确且行之有效的解决策略，特别是利用KDM4家族基因差异表达提高牛体细胞克隆胚胎发育率、囊胚细胞数和出生率的作用尚未见到报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于组蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外转录模板载体，其特征在于：该载体包括用于表达目的序列的重组基因表达盒，所述目的序列包括KDM4E基因，该基因具有编码去组蛋白H3K9甲基化酶KDM4蛋白家族决定酶活性的关键位点序列。

【技术特征摘要】
1.一种体外转录模板载体，其特征在于：该载体包括用于表达目的序列的重组基因表达盒，所述目的序列包括KDM4E基因，该基因具有编码去组蛋白H3K9甲基化酶KDM4蛋白家族决定酶活性的关键位点序列。2.根据权利要求1所述一种体外转录模板载体，其特征在于：所述目的序列还包括与所述KDM4E基因串联表达的绿色荧光蛋白EGFP基因。3.根据权利要求1所述一种体外转录模板载体，其特征在于：所述重组基因表达盒还包括位于所述目的序列上游的Kozak序列。4.根据权利要求1所述一种体外转录模板载体，其特征在于：所述KDM4E基因选自牛KDM4E基因读码框。5.根据权利要求1或4所述一种体外转录模板载体，其特征在于：所述KDM4E基因如SEQ.ID.NO.1所示。6.根据权利要求1所述一种体外转录模板载体，其特征在于：所述载体具体包括作为骨架的pcDNA3.1(+)载体以及插入在pcDNA3.1(+)载体多克隆位点区内的依次排列于pcDNA3.1(+)载体所含T7启动子之后的Kozak序列、绿色荧光蛋白EGFP基因读码框及牛KDM4E基因读码框。7.一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的牛体细胞克隆胚胎处理方法，其特征在于：该处理方法包括以下步骤：经体外转录反应获得转录自目的序列的mRNA，所述目的序列包括KDM4E基因，该基因具有编码去组蛋白H3K9甲基化酶KDM4蛋白家族决定酶活性的关键位点序列；再将所述mRNA注入到完成融合并激活的牛体细胞克隆胚胎中，使该胚胎过量表达KDM4E蛋白。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述mRNA注入时间为牛体细胞克隆胚胎的合子激活期之前。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述处理方法具体包括以下步骤：1)目的序列的体外转录在骨架载体中插入KDM4E基因、绿色荧光蛋白EGFP基因以及位于前端的Kozak序列；然后将所述载体经线性化处理后进行体外转录，得到用于融合表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涌，刘鑫，张景程，高元鹏，邢徐鹏，周川，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61