厚朴多糖及其制备和用途制造技术

本发明专利技术涉及一种厚朴多糖的制备方法及其降血糖、降血脂活性。属于医药领域，国际专利号分类为C08B 38/60。一种厚朴多糖粗品和厚朴多糖精品，它是由植物厚朴皮粉碎后过筛，经热水提取，乙醇沉淀，4℃过夜，离心去上清，沉淀用乙醇洗涤三次，干燥后得厚朴水提物。厚朴水提物溶解于水，加入阴离子大孔树脂去色素和蛋白质。脱色液浓缩后，乙醇沉淀，离心去上清，沉淀用乙醇洗涤3次，干燥后得厚朴多糖粗品。厚朴多糖粗品经离子交换层析和凝胶过滤层析纯化后得厚朴多糖精品。它们具有降血脂、降血糖、抗炎活性和免疫调节作用。

Magnolia officinalis polysaccharide and its preparation and Application

The invention relates to a preparation method of Magnolia officinalis polysaccharide and its activity of lowering blood sugar and lowering blood fat. It belongs to the field of medicine, and the international patent number is classified as C08B 38/60. Magnolia officinalis polysaccharide crude and Magnolia officinalis polysaccharide boutique, it is crushed by the Plant Magnolia officinalis after screening, extracted by hot water, ethanol precipitation, overnight at 4 C, centrifugal to supernatant, precipitation with ethanol washing three times, dried Magnolia officinalis water extract. The aqueous extract of Magnolia officinalis was dissolved in water and added with anionic macroporous resin to remove pigment and protein. After the decolorization solution was concentrated, ethanol precipitated, centrifuged to the supernatant, the precipitation was washed with ethanol three times, and the crude Magnolia officinalis polysaccharide was obtained after drying. Magnolia officinalis polysaccharides were refined by ion exchange chromatography and gel filtration chromatography. They have hypolipidemic, hypoglycemic, anti-inflammatory and immunomodulatory effects.

【技术实现步骤摘要】
厚朴多糖及其制备和用途
本专利技术涉及一种厚朴多糖的制备方法及其降糖、降脂、消炎和抗氧化活性，用于治疗与高血糖、高血脂、炎症相关的疾病或作为免疫调节剂，属于医药领域，国际专利分号分类为C08B37/60。
技术介绍
中药厚朴为木兰科植物厚朴(MagnoliaoffcinalisRendetWils)的干皮、根皮或枝皮，性温、味苦辛、无毒，入脾、胃、大肠经，能温中下气，燥湿消痰。厚朴在我国有两千多年药用历史，用于治疗消化系统、呼吸系统等多个系统及器官的疾病，2015版《中国药典》记载的厚朴为主要原料药的中成药达20余种。我国很多方剂如厚朴三物汤、大承气汤、四七汤和桅子厚朴汤中都含有生药厚朴。厚朴含有多种化学成分，包括酚类、生物碱类、挥发油类、黄酮类、多糖等成分，其中厚朴酚与和厚朴酚是主要活性成分，目前国内外对厚朴的药理研究主要其中在厚朴酚、和厚朴酚的抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等作用。近年来，虽然中药大分子的研究最来最受到关注，但对厚朴多糖的研究仅限于提取方法的优化及体外抗氧化活性，对其结构和药理作用的研究还是空白。本专利技术通过解决厚朴多糖制备的技术性难题，获得均一厚朴多糖，并进一步研究了厚朴多糖的降脂、降糖、抗炎和免疫调节活性，证明厚朴多糖可以应用于高血脂、高血糖、炎症以及免疫相关疾病的治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种从厚朴水提取物中获得厚朴多糖粗品的方法以及从厚朴多糖粗品中分离纯化得到厚朴多糖纯品的方法。本专利技术所述的厚朴多糖为含D-葡萄吡喃环的多糖，具体由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖以摩尔比0.003：0.002：0.019：0.967：0.008组成，所述的厚朴多糖的分子量大于20000Da。所述的获得厚朴多糖粗品的方法，将厚朴皮干燥品粉碎过筛后加入去离子水，加热，离心取上清，将上清液浓缩，加入乙醇沉淀，真空干燥后得到本专利技术所述的厚朴水提取物。将厚朴水提取物溶解于去离子水中，加入大孔树脂去色素和蛋白质，将脱色液过滤，加入乙醇沉淀，将沉淀真空干燥后得到本专利技术的厚朴多糖粗品(MOP)，其多糖含量占总固体重量的60％以上。所述的获得厚朴多糖精品的方法，将厚朴多糖粗品(MOP)溶解于去离子水，用离子交换层析进行纯化，洗脱液为去离子水，用硫酸-蒽酮比色法跟踪检测，收集主峰，再采用凝胶过滤层析，洗脱液为去离子水，用硫酸-蒽酮比色法跟踪检测，收集主峰，真空干燥，即得到本专利技术所述的厚朴多糖精品(MOP-1)，其多糖含量占总固体的95％以上。所述方法中，加热提取是在水浴中加热，水浴温度在60-95℃。所述方法中，加热提取时间为1-6小时。所述方法中，提取所用的液固比为5-30(mL/g)。所述方法中，大孔树脂为阴离子交换树脂。所述方法中，大孔树脂脱色时间为0.5-4小时。所述方法中，离子交换树脂为二乙胺基乙基纤维素(DEAE-52)，或二乙胺基乙基萄聚糖凝胶(DEAESephadexA-25或DEAESephadexA-50)，或二乙胺基乙基琼脂糖凝胶(DEAESepharose)。所述方法中，凝胶过滤层析所用填料为SephcrylS-200。本专利技术目的之二是提供一种结构明确、质量可控的厚朴多糖在制备降脂、降糖、抗炎和免疫调节药物中的应用。所述的本专利技术的多糖在制备降脂、降糖、抗炎和免疫调节药物中的应用，将上述方法制备得到的厚朴多糖精品(MOP-1)应用于小鼠脂肪耐量实验、小鼠葡萄糖耐量实验、二甲苯致耳肿胀实验，均具有一定的治疗作用，因此可应用于制备降脂、降糖、抗炎和免疫调节药物。所述方法中，制得的厚朴多糖粗品(MOP)多糖含量在60％以上。所述方法中，制得的厚朴多糖精品(MOP-1)多糖含量在95％以上，分子量为20000Da左右。本专利技术将所述制备得到的厚朴多糖可以用作制备与高血糖、高血脂、炎症相关的疾病或作为免疫调节剂。附图说明图1为厚朴多糖精品(MOP-1)紫外-可见光扫描光谱。图2为厚朴多糖精品(MOP-1)红外光谱。图3为厚朴多糖精品(MOP-1)降低小鼠血脂的作用。图4为厚朴多糖精品(MOP-1)急性降小鼠血糖的作用。具体实施方式下面结合实施例，进一步说明本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。说明书及实施例中采用的化学试剂、层析柱等，如无特殊说明均按常规实验条件下进行操作，或按供应商提供的说明进行操作。实施例1：厚朴多糖粗品的制备方法取厚朴皮干粉100g，按液固比15：1(mL/g)加入90℃热水，90℃浸提3h，冷却至室温后3500rpm离心15min，取上清液，残渣重复提取一次。合并两次的浸提液，浓缩至总体积的1/10，向浓缩液中缓缓加入无水乙醇，至乙醇终浓度为80％，4℃冰箱静置过夜，3500rpm离心15min，弃上清得到厚朴水提物。将水提物溶解于去离子水中，加入大孔树脂去色素和蛋白质，将脱色液过滤，加入乙醇沉淀，将沉淀真空干燥后得到本专利技术的厚朴多糖粗品(代号：MOP)。实施例2：均一厚朴多糖的制备取厚朴多糖粗品(MOP)500mg，去离子水充分溶解，上样至已平衡好的DEAESephadexA-25离子交换层析柱中，规格为(2.6×30cm)，平衡液为去离子水，用去离子水以1.5mL/min的流速洗脱，3min/管分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，以收集管号为横坐标，吸光值为纵坐标绘制多糖洗脱曲线，根据洗脱曲线合并相同组分。离子交换柱分离所得厚朴多糖水洗组分上SephacrylS-200分子筛层析，去离子水洗脱。柱规格为(1.0×100cm)，分部收集，硫酸-蒽酮法跟踪检测，合并相同组分。冷冻干燥，得到厚朴多糖精品(代号：MOP-1)。在图1中，通过对(MOP-1)进行紫外－可见光(200-700nm)全波长扫描，证明厚朴多糖精品纯度较高，基本无蛋白质、核酸和其它杂质。在图2中：MOP-1在3600～3200cm-1出现一种宽峰，是O-H的伸缩振动。在3000～2800cm-1的一组峰是糖类C-H伸缩振动，1400～1200cm-1的一些峰是C-H的变角振动，这两组峰是糖类化合物的特征吸收。1665～1635cm-1间的吸收是糖水化物的吸收峰，1250～950cm-1的一组峰是吡喃环的醚键(C-O-C)和羟基的吸收峰，在848cm-1的吸收是由α-端基碳差向异构体的C-H变振动引起的，表明MOP-1的端基碳为α-构型，MOP-1在760cm-1处的吸收是由D-葡萄吡喃环的对称环伸缩振动所引起。实施例3：理化性质测定1.多糖含量测定采用硫酸-蒽酮法，在620nm处，分光光度法测定总多糖含量，以葡萄糖(C6H12O6)计厚朴多糖粗品(MOP)多糖含量为60％，厚朴多糖精品(MOP-1)多糖含量为95％。2.紫外光谱分析样品以蒸馏水溶解，置于200～400nm紫外全波长扫描。如图1所示，MOP-1在260、280nm处无吸收，说明其不含蛋白质和核酸。3.红外光谱分析样品2mg加入适量的溴化钾，研磨、压片，制作溴化钾片。400-4000-1区间扫描。如图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.厚朴多糖为含D‑葡萄吡喃环的多糖，具体由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖以摩尔比0.003：0.002：0.019：0.967：0.008组成，所述的厚朴多糖的分子量大约20 000 Da。

【技术特征摘要】
1.厚朴多糖为含D-葡萄吡喃环的多糖，具体由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖以摩尔比0.003：0.002：0.019：0.967：0.008组成，所述的厚朴多糖的分子量大约20000Da。2.权利要求1所述的厚朴多糖为厚朴水提醇沉物。3.权利要求1或2所述的厚朴多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：取厚朴皮干燥品粉碎后，按液固比质量比15-30：1加入70-90℃热水，水浴浸提3h，冷却至室温离心，取上清液，浓缩后加入无水乙醇，2-8℃冰箱静置过夜，离心，弃上清得到厚朴水提物沉淀，干燥得厚朴水提取；步骤二：取干燥后的厚朴水提物溶于水中，加入D301G大孔树脂，室温下振荡、离心，取上清液浓缩，加无水乙醇，2-8℃冰箱静置过夜，离心，弃上清，沉淀烘干，得厚朴多糖粗品；步骤三：将厚朴多糖粗品溶解于水，上阴离子交换柱，去离子水洗脱，分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，收集主峰，浓缩后乙醇沉淀，2-8℃放置，离心去上清，真空干燥；步骤四：将干燥后的样品溶于去离子水，上SephacrylS-200凝胶过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓鹏，姜宁，
申请(专利权)人：湖北民族学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42