一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法技术

本发明专利技术涉及一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，具体的为对刺五加种子进行内生真菌Alternaria alternata浸种处理和变温层积处理。本发明专利技术所述方法可有效促进刺五加种子的形态成熟和生理成熟，并打破刺五加种子的休眠，从而可以有效解决刺五加种子休眠时间长、发芽率低的问题，有利于刺五加资源发展及生态资源保护，改善刺五加人工种植的效率和效益。

An endophytic fungus promoting seed germination of Acanthopanax senticosus

The invention relates to a method for promoting seed germination of Acanthopanax senticosus by endophytic fungi, in particular to seed soaking treatment of the endophytic fungus Alternaria alternata and thermostratification treatment of the seeds of Acanthopanax senticosus. The method can effectively promote the morphological and physiological maturity of the seeds of Acanthopanax senticosus and break the dormancy of the seeds of Acanthopanax senticosus, thereby effectively solving the problems of long dormancy time and low germination rate of the seeds of Acanthopanax senticosus, being conducive to the development of resources of Acanthopanax senticosus and the protection of ecological resources, and improving the efficiency and efficiency of artificial planting of Acanthopanax senticos Benefit.

【技术实现步骤摘要】
一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法
本专利技术属于中药种植
，具体涉及一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法。
技术介绍
刺五加(拉丁名：RadixAcanthopanacissenticosl，英文名称：ManyprickleAcanthopanaxRoot)，又称坎柺棒子、刺拐棒、老虎潦、刺花棒、五加参等，为五加科五加属木本植物，主要分布于我国黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西等省，在俄罗斯、朝鲜、日本也有分布。刺五加具有悠久的药用历史，根、茎、叶、皮和果实均可入药，具有补中益精，坚筋骨、强意志、祛风湿、活血祛瘀、健胃利尿的作用，具有珍贵的药用价值，主治风寒湿痹、腰膝酸痛、筋骨痿软、体虚羸弱、食欲不振、跌打损伤、骨折、水肿、脚气、阴下湿痒等，在《神农本草经》中被列为上品，久服可以轻身、延年益寿，因此有“宁得一把五加，不用金玉满车”的说法。现代药理研究表明刺五加具有兴奋/抑制中枢神经系统、抗疲劳、抗衰老、抗癌、抗菌、消炎、调节内分泌、增强免疫功能随着刺五加药用价值的不断挖掘，制药、保健品、食品等领域对刺五加原材料的需求大量上升，野生刺五加经历了掠夺式的无序采集，使得野生刺五加资源遭受了严重的破坏，目前已经面临枯竭，远远不能满足市场需求，从而造成了刺五加价格连年上涨，而刺五加自然状态下生殖能力弱，被中国植物红皮书列为渐危物种，从而使得人工种植刺五加的需求越来越大。目前，刺五加的繁殖方式包括扦插繁殖、组织培养繁殖和种子繁殖三种，其中刺五加无性繁殖困难，而有性繁殖则具有幼苗茁壮等天然的优势，但刺五加种子具有先天休眠的特性，在果实成熟后，刺五加种子仍需要经冬越夏完成形态发育和生理成熟后才能发芽，且种子的质量差，休眠期长，容易导致自然状态下刺五加种子的霉变，严重影响了自然状态下刺五加种子的发芽率，直接播种需要经过近2年才能有11.53％的发芽率,若种子经变温层积处理半年后播种可于第2年获得17.0％的发芽率，严重制约了种子繁殖方法在刺五加人工栽培中的使用。刺五加种子休眠的原因是：刺五加种胚在形态上似已发育完全，但生理上还未成熟，必须要通过后熟作用才能萌发，即成熟种子离开母体后，需要经过一系列的生理生化变化后，才能完成生理成熟而具备发芽的能力。现有技术中为了打破刺五加种子休眠，一般使用变温催芽和低温休眠依次或交替进行的方法，虽然可以在一定程度上提高刺五加种子的发芽率，但由于处理步骤繁杂、不易控制，且所需周期长，仍然制约了种子繁殖方法在刺五加人工种植中的应用。内生真菌是指生活于不存在外在感染的健康植物组织内部的真菌，研究表明，植物内生菌与病原菌具有相同的生态位，在植物体内相互竞争空间、营养，使病原菌得不到正常的营养供给而消亡，从而增强宿主抵御病害的能力，植物的内生菌还可以分泌抗生素、毒素等代谢物质，可诱导植物产生系统抗性。链格孢菌(Alternaria)为真菌的一种，多数寄居在植物上，一方面，链格孢菌可引起经济作物的病害，因此，多被认定为引起经济作物病害的病原之一。少数种类的链格孢菌还可以侵入人体或动物体，引起皮癣、甲癣等疾病，另一方面，链格孢由于其次代谢产物具有杀虫、灭菌等活性，而具有开发成杀虫剂、抑菌剂的潜力。已有文献报道了链格孢菌AS3.577能够定向将熊果酸生物合成为3-羰基熊果酸，从而进一步拓阔了链格孢菌的用途。由于链格孢菌一般被视为经济作为疾病的病原，因此，链格孢菌在在农作物种植上的应用报道较少，张志刚等，公开了细极链格孢菌蛋白激发子是一种能诱导植物获得系统性抗病性的蛋白激发子，可使棉花产生对病虫害的抗性，促进植株生长，还可以提高棉花生长功能叶的叶绿素含量、净光合速率，气孔导度、蒸腾速率、外界光合作用有效辐射等，延缓叶片的衰老和光合功能衰退，延长了叶片的光合功能期。但链格孢菌在其他植物种植上的应用现有技术中并没有报道。本专利技术的目的即是提供一种快速有效的促进刺五加种子发芽的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种简便有效的促进刺五加种子发芽的方法，具体的为对刺五加种子进行内生真菌Alternariaalternata浸种处理和变温层积处理。优选的所述方法包括如下步骤:(1)种子的获取：采集刺五加黑紫色的成熟果实，放入容器中，加入少量水，等待果实软化后，平铺在地表进行踏踩，使种肉分离，再放入容器中加水多次进行淘洗，倒出果肉以及瘪粒的种子，捞出容器底部的刺五加种子晒干待用；(2)种子消毒：将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后，用清水冲洗净，再用清水浸泡24h，使种子吸水饱和，取出后沥干水分，所述次氯酸钠的浓度为5-8％，所述次氯酸钠的浸种时间为5-15min，所述清水冲洗次数为3-5次；(3)刺五加内生真菌浸种培养：将刺五加内生真菌Alternariaalternata接种在液体培养基上，在摇床上摇7天，取刺五加种子，用75％酒精浸泡20-40s，用无菌水冲洗3-5次，5-8％次氯酸钠处理5-15min，再用无菌水冲洗3-5次，将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中，继续摇24-48h，120rpm，随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒，方法同上，消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里，并及时补充水分，所述刺五加种子与河沙按体积比1∶1-5混匀。(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子，用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒，方法同上，再次用刺五加内生真菌Alternariaalternata悬液浸种共生3-7天，方法同上，用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒，方法同上；(5)种子解除休眠：将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中，种子与湿河沙按体积比1∶1-5混匀，装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽，保持湿度50-70％，缺水时适量浇水，水中加1％新洁尔灭，刺五加种子变温层积：第一阶段：温度保持在20-25℃，时间为10周，每日翻动一次；第二阶段：刺五加种子温度保持在10-15℃，时间为6周，2-3天翻一次；第三阶段：刺五加种子温度保持在0-5℃，时间为9周。(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子，置于室温培养箱下培养。优选的，步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为5-20:1，所述淘洗次数为5-10次；更优选的，所述步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为10:1，所述淘洗次数为10次；优选的，步骤(2)中次氯酸钠的浓度为5％，所述次氯酸钠的浸种时间为10min，所述清水冲洗次数为5次；优选的，步骤(3)中，酒精浸泡时间为30s，使用无菌水冲洗3次，5％次氯酸按处理10min，再用无菌水冲洗5次，将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中，继续摇36h，120rpm，随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒，方法同上，消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里，并及时补充水分，所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。优选的，所述步骤(4)中使用刺五加内生真菌Alternariaalternata悬液浸种共生6天。优选的，步骤(5)中种子与湿河沙按体积比1∶2混匀，装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽，保持湿度60％。本专利技术有益效果1.本专利技术促进刺五加种子发芽的方法能有效促进刺五加种子的形态成熟和生理成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于对刺五加种子进行内生真菌Alternaria alternata浸种处理和变温层积处理。

【技术特征摘要】
1.一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于对刺五加种子进行内生真菌Alternariaalternata浸种处理和变温层积处理。2.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)种子的获取：采集刺五加黑紫色的成熟果实，放入容器中，加入少量水，等待果实软化后，平铺在地表进行踏踩，使种肉分离，再放入容器中加水多次进行淘洗，倒出果肉以及瘪粒的种子，捞出容器底部的刺五加种子晒干待用；(2)种子消毒：将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后，用清水冲洗净，再用清水浸泡24h，使种子吸水饱和，取出后沥干水分，所述次氯酸钠的浓度为5-8％，所述次氯酸钠的浸种时间为5-15min，所述清水冲洗次数为3-5次；(3)刺五加内生真菌浸种培养：将刺五加内生真菌Alternariaalternata接种在液体培养基上，在摇床上摇7天，取刺五加种子，用75％酒精浸泡20-40s，用无菌水冲洗3-5次，5-8％次氯酸钠处理5-15min，再用无菌水冲洗3-5次，将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中，继续摇24-48h，120rpm，随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒，方法同上，消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里，并及时补充水分，所述刺五加种子与河沙按体积比1∶1-5混匀。(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子，用酒精和次氯酸钠溶液对种子进行浸泡消毒，方法同上，再次用刺五加内生真菌Alternariaalternata悬液浸种共生3-7天，方法同上，用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒，方法同上；(5)种子解除休眠：将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中，种子与湿河沙按体积比1∶1-5混匀，装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽，保持湿...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭盛磊，沈宏伟，王谦博，付士朋，王振月，
申请(专利权)人：黑龙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23